管敏
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 供职机构：暨南大学微生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 假蜜环菌黄曲霉毒素氧化酶的基因克隆、表达、纯化及酶学性质分析(英文)被引量：9
- 2011年
- 【目的】黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO)来源于假蜜环菌(Armillariella tabescens)的细胞内提取物,具有转化黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)的特性。为更进一步了解该酶的性质,我们克隆了AFO的基因,并进行了重组AFO蛋白的表达、纯化和酶学性质分析。【方法】本研究利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得的AFO短肽序列设计简并引物进行逆转录,再通过cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了AFO基因的全长cDNA序列。构建重组表达载体pPIC9-afo,在毕赤酵母中进行重组AFO(rAFO)的融合分泌表达,用Ni离子螯合层析进行rAFO的纯化,获得有活性的rAFO后,对其进行肽质量指纹(peptide mass fingerprinting,PMF)鉴定和酶学性质分析。【结果】黄曲霉毒素氧化酶(AFO)基因的开放阅读框为2088 bp,编码695个氨基酸;肽质量指纹鉴定结果显示重组AFO的肽片段序列覆盖率为63.2%。活性测定表明纯化后的重组AFO(rAFO)比活力为234 U/mg;对rAFO进行酶学性质分析表明,对于底物黄曲霉毒素B1,rAFO的Km值为3.93±0.20×10-6 mol/L;反应最适温度为30℃,最适pH为6.0;30℃放置90 min后酶活力下降50%;rAFO在pH5.5-7.0之间酶活力较稳定,相对活力维持在51%-65%之间。【结论】本文第一次成功克隆并重组表达了一种具有黄曲霉毒素B1转化功能的酶——黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO),纯化后的重组AFO(rAFO)具有较好的黄曲霉毒素B1转化活性,为进一步研究和应用奠定了基础。
- 温思霞管敏周涛曹红谢春芳刘大玲姚冬生
- 关键词：CDNA末端快速扩增毕赤酵母
- 一种具有转化黄曲霉毒素活性的解毒酶及编码该酶的基因
- 本发明涉及一种具有转化黄曲霉毒素活性的解毒酶及编码该酶的基因。发明人首先分离并纯化出了具有该活性的新型蛋白，命名为黄曲霉毒素解毒酶(Aflatoxin－detofizyme，ADTZ)。本发明通过纯化和测序获得ADTZ的...
- 姚冬生刘大岭管敏谢春芳
- 文献传递
- Aflatoxin-detoxifizyme的质谱鉴定及其cDNA的克隆与表达
- 黄曲霉毒素(Aflatoxins,AFT)被认为是潜在的对人类危害极为突出的强致癌诱变剂,世界卫生组织(WHO)在确定重点研究的毒物中,把黄曲霉毒素列在首位。AFT对人类的危害主要通过下面几方面:①污染AFT的食品食用前...
- 姚冬生刘大岭管敏谢春芳宋艳萍
- 关键词：AFLATOXIN-DETOXIFIZYMECDNA
- 文献传递
- 啤酒中二氧化硫抗氧化作用的分子生物学研究进展被引量：8
- 2003年
- 主要论述了啤酒中二氧化硫的代谢机理 ,二氧化硫抗氧化作用的分子生物学研究以及抗氧化啤酒酵母选育的进展。
- 管敏姚冬生范秀英张博润
- 关键词：啤酒二氧化硫抗氧化作用分子生物学啤酒酵母
- 产黄曲霉毒素解毒酶真菌(E-20)cDNA文库的构建被引量：4
- 2004年
- 目的 :构建产黄曲霉毒素解毒酶 (ADTZ)真菌 (E - 2 0 )的cDNA文库 ,为进一步筛选和克隆 (E - 2 0 )菌的特异表达基因做准备。方法 :用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建 (E - 2 0 )菌的cDNA文库 ,检测未扩增文库滴度和重组率后 ,进行文库的扩增 ,并检测扩增文库的质量。随机挑取 1 0个阳性克隆进行测序。结果 :未扩增文库滴度达 1 .0× 1 0 6pfu/mL ,重组率约为 98.9% ,扩增后滴度为 3× 1 0 8pfu/mL ,容量约为 4× 1 0 1 0 。测序结果得到 9条新的表达序列标签 (EST) ,1个 (E - 2 0 )菌的NADH -辅酶Q氧化还原酶 (NuoC)基因。结论 :E - 2 0表达型λ噬菌体cDNA文库的成功建立 ,对于该菌种中有明确功能的特异基因如ADTZ基因的克隆 。
- 姚冬生管敏赵龙谢春芳刘大岭
- 关键词：CDNA文库真菌
