胡刚
- 作品数：52 被引量：110H指数：6
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 转基因工程植物抗体的研究与进展被引量：2
- 2005年
- 植物抗体即通过基因工程技术在植物中表达或生产的抗体,是抗体基因工程的一个新领域。利用转基因植物生产抗体就是将编码全抗体或抗体片段的基因导入植物,从而在植物中产生全抗体或抗体片段,获得的抗体能功能性地识别并结合抗原。这种技术为大规模生产抗体以用于人类疾病诊断、治疗等方面提供了新思路。
- 杨阳吴兴安胡刚杨麦贵
- 关键词：转基因抗体植物植物基因修饰
- 抗汉滩病毒单抗3G1 scFv植物表达载体的构建被引量：2
- 2004年
- 利用PCR方法,从含有3G1scFv基因的重组质粒中扩增出抗体基因,并使基因两端携带合适的限制性酶切位点.将其克隆入植物表达载体pBI121,构建获得3G1scFv pBI121重组质粒.酶切鉴定及测序结果均证明重组质粒构建成功.将重组植物表达载体转入农杆菌LBA4404,为进一步构建转基因植物的研究奠定了基础.
- 罗雯张九东白文涛吴兴安胡刚张芳琳
- 关键词：汉滩病毒单链抗体植物表达载体
- 人杀菌渗透增强性蛋白N末端片段在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI)N-端193个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193重组蛋白。方法应用RT-PCR的方法从HL-60细胞内扩增出BPI氨基端1-193个氨基酸的基因序列,克隆入T载体。将BPI193基因片段定向克隆入原核表达载体PET-28a中,构建重组的原核表达质粒PET-BPI193,转化大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导表达蛋白。应用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,计算机薄层扫描分析蛋白占菌体总蛋白百分比;Western-blot技术检测表达蛋白的特异性。结果从HL-60细胞中扩增得到579bp的BPI193基因片段,构建了T-BPI193亚克隆和PET-BPI193重组表达质粒。转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导,经SDS-PAGE检测表明,成功表达了6His-BPI193融合蛋白。计算机薄层扫描分析表达量占菌体总蛋白的12%。Western-blot检测显示表达产物具有特异性。结论成功构建了PET-BPI193重组表达质粒。在大肠杆菌BL21内,诱导获得了BPI193与组氨酸融合表达的重组蛋白。
- 董伟董晓慧楚雍烈杨娥胡刚郑建武
- 关键词：基因表达大肠杆菌
- 抗汉滩病毒双链抗体重组杆状病毒在昆虫细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的 应用Bac to Bac杆状病毒表达系统构建具有抗汉滩病毒(HTNV)G2 糖蛋白(GP)鼠源性mAb 3G1与抗HTNV核蛋白(NP)鼠源性mAb 1A8嵌合基因的重组杆状病毒,在昆虫细胞中表达抗HTNV双链抗体并对表达产物进行初步鉴定。方法 构建含有嵌合基因的杆状病毒表达载体ScFv pFBD ScFv’,转化DH10Bac致敏菌,利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至穿梭质粒Bacmid上,快速筛选出含有抗HTNV双链抗体嵌合基因的重组杆状病毒,在昆虫细胞中进行表达,并利用间接免疫荧光试验检测表达产物。结果 构建了含抗HTNV双链抗体嵌合基因之重组杆状病毒,并在昆虫细胞中表达出特异性抗体,该抗体能被兔抗人Cκ抗体所识别并可与HTNVNP和GP特异性结合。结论 成功地在昆虫细胞中表达出抗HTNV双链抗体,且该抗体具有与HTNVNP抗原和GP抗原结合的活性。
- 胡刚徐志凯张芳琳吴兴安阎岩白文涛于澜王海涛
- 关键词：单链抗体汉滩病毒杆状病毒昆虫细胞
- 抗汉滩病毒NP抗原mAb的ScFv-C_κ基因真核和原核表达载体的构建及鉴定被引量：3
- 2001年
- 目的构建抗汉滩病毒HTNVNP抗原mAb的ScFvCκ基因原核和真核表达载体。方法将鼠源性抗HTNVmAb1A8的ScFv基因和人Cκ基因连接,分别克隆入原核表达载体pComb3和真核表达载体pCIneo中,并用间接免疫荧光和Westernblot检测其原核表达产物的活性。结果成功地构建了重组1A8ScFvCκ基因并克隆入原核和真核表达载体。间接免疫荧光和Westernblot分析表明,该基因在E.coliTG1中的表达产物可与HTNVNP抗原特异性结合。结论抗NP抗原mAb的ScFvCκ原核和真核表达载体的构建,为进一步研究细胞内抗体的功能奠定了基础。
- 阎岩徐志凯胡刚白文涛罗雯吴兴安张芳琳刘勇王海涛
- 关键词：单链抗体汉滩病毒真核表达
- 汉坦病毒S0.7基因新型重组腺病毒的构建及鉴定
- 2010年
- 目的:构建含汉坦病毒核蛋白(NP)氨基端编码基因S0.7,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的新型重组腺病毒。方法:依据GenBank序列,分别合成CAG序列及WPRE序列,插入S0.7-pShuttle中,构建含S0.7基因,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的转移载体pShuttle-S0.7-CAG-WPRE。采用PI-SceI和I-CeuI限制性内切酶将该片段克隆入腺病毒DNA,得到重组腺病毒DNAAdeno-S0.7-CAG-WPRE,使用PacI线性化后转染HEK293细胞,包装重组腺病毒。感染HEK293细胞后用免疫荧光法检测表达产物。结果:转移载体pShuttle-S0.7-CAG-WPRE通过测序证明构建正确,纯化重组腺病毒滴度达1013pfu/L。免疫荧光结果表明,重组腺病毒感染的HEK293细胞被抗汉坦病毒NP的特异性mAb1A8所识别。结论:成功地构建了含汉坦病毒S0.7基因,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的新型重组腺病毒,本实验为进一步研制汉坦病毒基因疫苗奠定了良好的基础。
- 李凯李璞媛白文涛胡刚吴兴安徐志凯张芳琳
- 关键词：汉坦病毒腺病毒
- 抗汉滩病毒中和性鼠／人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究
- 2008年
- 目的:建立能表达抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的转基因植株,为汉坦病毒基因工程抗体的研究提供实验基础。方法:将构建的含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的植物抗体表达质粒3G1MH-pCAMB IA2301,用TSS冻融法导入农杆菌GV3101,利用农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥,获得转基因植株。用PCR、Northernblot检测转基因植株。结果:经PCR分析表明,拟南芥的基因组中有抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因整合,并成功获得7株T0代转基因拟南芥。植株提取RNA,经Northernblot分析可见约1 500 bp及800 bp处的目的条带,为编码重、轻链的目的基因。结论:成功地构建了含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的拟南芥植株,为进一步利用植物表达治疗性抗体奠定了基础。
- 周伟吴兴安罗雯胡刚张芳琳白文涛张亮于澜史梦远徐志凯
- 关键词：汉滩病毒嵌合抗体转基因植物植物抗体
- 汉坦病毒G1S0.7嵌合基因真核载体的构建及表达被引量：2
- 2010年
- 构建含汉坦病毒嵌合基因G1S0.7的真核重组质粒,并在真核细胞中有效表达。从本室前期构建并经测序的重组质粒pShuttle—G1S0.7上双酶切回收得到片段G1S0.7后,克隆入真核表达载体pVAX,并将其通过脂质体介导转染HEK293细胞,表达产物用ELISA和Western—blot进行鉴定。酶切鉴定结果表明,成功构建了含汉坦病毒嵌合基因G1S0.7的重组质粒pVAX—G1S0.7;ELISA检测结果和Western—blot结果显示,汉坦病毒G1S0.7嵌合基因在HEK293细胞中得到了表达,所表达的融合蛋白分子量约90kD,与预期大小一致,并且表达产物可与抗汉坦病毒NPmAb特异性结合。说明所构建的表达载体可在真核细胞中表达出与汉坦病毒抗体有特异性结合活性的融合蛋白,为下一步基因免疫及进一步筛选HFRS基因疫苗候选组分提供实验依据。
- 楚琰李璞媛李凯胡刚吴兴安张芳琳白文涛张亮王海涛徐志凯
- 关键词：汉坦病毒核蛋白基因表达
- 整合素β_3与汉坦病毒囊膜糖蛋白在RRS系统中的相互作用被引量：2
- 2009年
- 目的:采用RRS酵母双杂交系统,研究人整合素β3与汉坦病毒囊膜糖蛋白的相互作用,进一步揭示汉坦病毒入胞机制。方法:大量制备前期构建的β3-pYesM△PolyA、G1-Met和G2-Met质粒,共转染至酵母温度敏感株cdc25-2,进行双杂交鉴定。结果:双杂交结果表明,β3可与汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在酵母菌中相互作用,而不与G1相互作用。结论:在汉坦病毒与整合素β3受体相互作用的过程中,汉坦病毒囊膜糖蛋白G2可能起到主要作用。
- 白文涛胡刚司瑞史梦远王海涛吴兴安徐志凯张芳琳
- 关键词：汉坦病毒整合素Β3酵母双杂交
- 淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段在真核细胞中的初步表达被引量：6
- 2003年
- 将淋巴囊肿病病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主要衣壳蛋白(Majoy capsid protein,MCP)0.6kb基因片段克隆入真核表达载体pEGFP-N_2,得到阳性重组质粒pEGFP-N_2-LCDV0.6,用脂质体法将其转染入真核细胞CHO,并进行瞬时表达,荧光显微镜观察及特异性RT-PCR检测结果表明:已成功将目的片断LCDV MCP 0.6kb转染到CHO细胞,并得到了初步表达。此研究为LCDV基因工程疫苗的研制提供了实验资料。
- 吴兴安李继业胡刚刘勇张芳琳于澜白文涛孙修勤徐志凯
- 关键词：真核细胞基因克隆基因表达
