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雌激素受体β共调节因子的研究进展被引量：2: 2006年; 雌激素受体(ER)包括α和β等2种,均为核受体。ERβ在乳腺癌预后和激素治疗耐受中有重要意义,其活性受与之相互作用的共调节因子的影响。这些共调节因子有的能与2种ER发生作用,有的只能特异地作用于其中一种。本文简要综述了与ERβ相互作用的共调节因子的相关研究进展。; 杨智洪王晓辉韩聚强袁斌叶棋浓; 关键词：雌激素受体Β 相互作用

含VEGF启动子的报告基因的构建及雌激素受体对其活性的影响被引量：4: 2007年; 目的:构建含血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并检测其在雌激素受体作用下的转录活性。方法:以乳腺癌细胞系MCF-7基因组为模板,扩增VEGF启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的报告基因载体转染293T细胞,检测重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明构建了正确的pGL3-basic-VEGF报告基因载体;转录活性实验表明构建的报告基因载体具有启动子活性,雌激素受体α(ERα)能以剂量依赖的方式升高VEGF启动子调控下的报告基因的转录。结论:克隆了VEGF启动子,为ERα共调节子的功能研究奠定了基础。; 熊志红丁丽华杨树兴孙启鸿杨晓袁斌韩聚强王朝云程龙叶棋浓; 关键词：荧光素酶报告基因转录活性雌激素受体

EYA基因家族的研究进展被引量：2: 2007年; EYA(eyes absent)是一个进化上保守的基因家族,其C端为编码271个氨基酸的EYA结构域。EYA蛋白作为重要的转录调控因子,直接参与胚胎发育过程中的细胞增殖、组织分化和器官发育。EYA基因发生突变或表达异常将导致鳃-耳-肾综合征、鳃裂-耳综合征等遗传病和一些恶性肿瘤(如卵巢癌、结肠癌、食管癌)的发生。本文就EYA基因的结构、生物学功能、组织分布及其与重大疾病的关系作一综述。; 袁斌曾敏李熔叶棋浓; 关键词：转录因子突变肿瘤

高迁移率族蛋白B1与活化T细胞核因子2之间存在直接相互作用被引量：1: 2011年; 目的:探讨高迁移率蛋白1(high mobility protein box1,HMGB1)与活化T细胞核因子2(nuclearfactor of activating T cells2,NFAT2)之间的直接相互作用。方法:首先观察HMGB1与NFAT2在细胞外的相互作用,构建pET28a(+)-HMGB1、pGEX-KG-NFAT2质粒,应用网织红细胞系统进行体外翻译得到带有放射性硫同位素35S的His-HMGB1融合蛋白。应用蛋白纯化技术得到的GST-NFAT2融合蛋白,利用GST-pulldown实验检验二者在体外是否可直接结合;然后观察HMGB1与NFAT2在细胞内能否直接结合,构建HMGB1和NFAT2的真核表达质粒,共同转染人胚胎肾293T细胞系,刺激之后裂解细胞,应用相应的抗体进行免疫共沉淀检测,观察二者在细胞内直接结合的情况。结果:利用GST-pull down实验及免疫共沉淀实验证实,HMGB1全长蛋白与NFAT2全长蛋白在细胞内、外有直接结合的条带,而对照组没有结合条带,说明HMGB1可与NFAT2特异性结合。结论:HMGB1与NFAT2之间存在直接相互作用。; 刘辉姚咏明宋青丁丽华王晓辉袁斌叶棋浓盛志勇; 关键词：活化T细胞核因子蛋白纯化免疫共沉淀

新型雌激素受体β信号通路调节因子的分离及鉴定被引量：1: 2006年; 目的:利用酵母双杂交技术筛选与ERβ相互作用的蛋白,为进一步研究ERβ的功能奠定基础。方法:从乳腺cDNA文库中钓取ER-βAF1 cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-ERβ-AF1,利用酵母双杂交筛选技术,在乳腺cDNA文库中筛选与ERβ-AF1相互作用的蛋白。将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2-1-ERβ-AF1的酵母菌进行交配实验,利用LacZ报告基因检测ERβ-AF1与候选蛋白之间是否存在相互作用。然后将ERβ-AF1和候选蛋白分别构建到pGEX-KG和pET-28 a上,并纯化GST-ERβ-AF1和H is-候选蛋白融合蛋白,利用GST沉淀实验进一步验证ERβ-AF1和候选蛋白的体外相互作用。结果:所获取的候选蛋白为CTGF,是CCN多肽家族成员。交配实验表明,CTGF与ERβ-AF1特异相互作用,而不与空载体或BRCT1对照相互作用。GST沉淀实验进一步验证,CTGF与ERβ、ERα均存在相互作用,但与CTGF同源性较高的NOV蛋白却不与ERβ、ERα结合。结论:CTGF和ERβ存在特异的相互作用。; 韩聚强焦园园丁丽华袁斌王晓辉张浩李杰之吕秋军叶棋浓; 关键词：相互作用

人eya2基因小干扰RNA表达载体的构建及表达: 2008年; 目的:设计并构建人eya2(eyes absent2)基因小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并观察其沉默效果。方法:以人eya2为靶基因,以pSliencer2.1-U6neo质粒为载体,根据人eya2的cDNA序列,设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;转化大肠杆菌DH5α菌株,抽提质粒,测序分析;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过荧光分析、Western blot和转录活性实验检测其抑制效果。结果:重组体测序结果与目的序列相一致,证明构建了eya2 siRNA真核表达载体;荧光观察表明siRNA能显著减弱细胞中绿色荧光强度,抑制eya2基因表达;Western blot分析证明构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性eya2基因表达;转录活性测定表明,构建的siRNA能有效抑制eya2基因表达。结论:构建了eya2 siRNA真核表达载体,该siRNA能有效地抑制eya2基因表达。; 袁斌丁丽华熊志红韩聚强张浩王晓辉杨智洪叶棋浓; 关键词：小干扰RNA 转录

利用小干扰RNA抑制小管间质性肾炎抗原相关蛋白的表达被引量：1: 2008年; 目的:设计并构建TIN-ag-RP基因的小干扰RNA(siRNA),检测其对小管间质性肾炎抗原相关蛋白(TIN-ag-RP)表达的干扰效果。方法:设计2条针对TIN-ag-RP基因的siRNA,并克隆到siRNA表达载体pSliencer 2.1-U6 neo上;经酶切和测序证明构建成功后,将重组质粒和带FLAG标签的TIN-ag-RP基因共转染293T人胚肾细胞,通过Western blot检验siRNA的干扰效果。结果:获得了2个TIN-ag-RP基因siRNA真核表达载体,均能有效抑制TIN-ag-RP的表达,其中一条的抑制效率达90%以上。结论:构建的TIN-ag-RP基因的siRNA能有效抑制TIN-ag-RP的表达。; 杨智洪王晓辉姜艳超李杰萍袁斌王朝云杨树兴叶棋浓; 关键词：小干扰RNA 基因表达

细胞周期蛋白B1、D1和E真核表达载体的构建及表达被引量：1: 2008年; 目的:为研究细胞周期蛋白(cyclin)在肿瘤形成过程中的分子机制,构建带FLAG标签的细胞周期蛋白B1、D1、E的真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达。方法:以乳腺cDNA文库为模板,分别扩增细胞周期蛋白B1、D1、E基因全长编码区序列,克隆到pcDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的表达载体转染293T细胞,检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-Cyclin真核表达载体,Western印迹分析表明克隆的载体都能在真核细胞中表达分子大小相符的重组蛋白。结论:构建了FLAG-CyclinB1、FLAG-CyclinD1、FLAG-CyclinE真核表达载体,为细胞周期蛋白及其相关蛋白的研究奠定了基础。; 熊志红丁丽华袁斌王朝云李杰萍杨丽萍杨智洪叶棋浓; 关键词：细胞周期蛋白克隆真核表达

人EYA基因家族的克隆、表达及转录活性分析: 2007年; 采用PCR方法从人组织或细胞cDNA文库中扩增Eya基因家族的完整编码序列,将所扩增的基因克隆到带FLAG标签的真核表达载体上,转染人胚肾293T细胞,Western blot鉴定Eya基因家族的表达。检测Eya基因及其与Six基因共转染对MEF3-Luc转录活性的影响。经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确,通过Westernblot实验证明Eya基因家族真核表达载体构建成功。荧光素酶活性测定显示Eya能协同Six激活肌细胞生成素的表达。进一步证实Eya是Six的转录共激活因子,能提高肌细胞增强因子的活性。; 袁斌熊志红丁丽华韩聚强张浩王朝云李杰之叶棋浓; 关键词：克隆基因表达转录活性

雌激素受体β的研究进展被引量：8: 2005年; 雌激素受体β(ERβ)属于核受体超家族成员,是一类配体调节的转录因子。ERβ与ERα的结构相似,但在组织学分布、生物学功能等方面不尽相同,具有重要的生理学和病理学意义。本文就ERβ的基因结构、分子生物学特性、组织分布、转录调控的分子机制以及与肿瘤发生、发展的关系作一综述。; 袁斌丁丽华褚春雨叶棋浓; 关键词：雌激素受体Β 转录因子基因表达调控肿瘤

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袁斌

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