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猪瘟病毒及其疫苗研究进展被引量：14: 1996年; 猪瘟病毒及其疫苗研究进展陆宇，陈建国，丁明孝（北京大学生命科学学院，北京１００８７１）ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＨｏｇＣｈｏｌｅｒａＶｉｒｕｓａｎｄｉｔｓＶａｃｃｉｎｅＬｕＹｕ；ＣｈｅｎＪｉａｎｇｕｏ；ＤｉｎｇＭｉｎｇｘｉａｏ（Ｃｏｌｌｅｇ...; 陆宇陈建国丁明孝; 关键词：家畜病毒学猪瘟病毒疫苗

Sindbis病毒的蛋白质合成与细胞骨架的关系: 1998年; 我们以Sindbis病毒感染BHK-21细胞为模式,研究了病毒的感染与细胞骨架的关系。结果显示:在病毒感染早期,细胞的蛋白质合成迅速被抑制,细胞的多聚核糖体(polysome)和mRNA从骨架上脱落,而病毒的RNA结合到骨架上。我们的结果还进一步表明,病毒的RNA是通过其3′-尾端与骨架结合的。另一方面在对Sindbis病毒非结构蛋白在体内与体外合成与加工的比较中,我们发现病毒蛋白在体外翻译加工的速度远低于体内,并且出现很多未成熟蛋白(premature protein),这种区别可能在某种程度上反应细胞骨架在蛋白质合成与加工中的作用。此外,在用秋水仙素和细胞松驰素B破坏微管和微丝后,病毒非结构蛋白的合成与加工没有明显变化,而结构蛋白的合成则受到明显的抑制。这表明病毒的两类蛋白的合成所依赖的细胞骨架成分可能有所不同,在结构蛋白合成过程中,微丝和微管起了重要作用,在非结构蛋白合成过程中,中间丝很可能起了重要作用。; 裘霁张小青陆宇丁明孝; 关键词：蛋白质合成细胞骨架病毒

猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株在原代牛睾丸细胞中增殖特性的研究被引量：20: 2000年; 以猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株 (CSFVC株 )为实验材料 ,研究该病毒株在原代牛睾丸细胞中增殖的基本特性与规律。找到了一株能够使用免疫荧光技术进行检测的C株猪瘟病毒 ,并对病毒滴度的测定方法进行了改进 ,发展完善了荧光斑技术 (F PFU)。使用改进的病毒滴度测定方法 ,对接毒后培养上清中病毒滴度的变化趋势进行检测。在原代牛睾丸细胞中 ,接毒后 5d ,几乎所有的细胞都可被病毒感染 ;释放到培养液中有活性的病毒粒子达到 10 5F PFU/mL以上 ,后维持在该水平。对原代细胞中细胞种类随代次增加的变化趋势进行了观察 ,并对CSFV的增殖特点及生产中出现的一收毒价不稳定、多次收获病毒等现象的机制进行探讨。并对影响猪瘟病毒增殖的因素进行了实验 ,不仅加深了对猪瘟病毒C株在原代牛睾丸细胞中增殖规律的了解。; 王镇陆宇丁明孝; 关键词：猪瘟病毒弱毒疫苗 C株病毒增殖原代细胞

猪瘟病毒在PK细胞和MPK细胞中繁殖过程的研究被引量：21: 1999年; 以猪瘟病毒疫苗Ｔｈｉｖｅｒｖａｌ株（Ｔ株）为实验材料，研究该病毒株在ＰＫ１５细胞中增殖的基本特性与规律。在ＰＫ１５细胞中，猪瘟病毒Ｔ株在感染后１２ｈ即可检测到子代病毒粒子。接毒后４８ｈ，几乎所有的细胞都被病毒感染；到６０ｈ，释放到培养液中有活性的病毒粒子达到最高峰，为１０７ＴＣＩＤ５０／ｍＬ。培养液中的病毒粒子在３７℃半寿期只有３个小时。同时，建立了ＭＰＫ细胞ＣＳＦＶＴ株的感染模式，其ＣＳＦＶ的滴度可达１０８ＴＣＩＤ５０／ｍＬ。在此基础上，用抗ＣＳＦＶ包膜蛋白Ｅ２和非结构蛋白ｐ１２０的单克隆抗体显示了病毒在细胞中增殖的部位。; 王镇陆宇周鹏程翟中和丁明孝; 关键词：猪瘟病毒 CSFV 免疫荧光

猪瘟病毒弱毒株感染对体外培养细胞增殖的促进作用被引量：2: 2000年; 猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）能在多种体外培养细胞中增殖，却不使细胞产生病变（ＣＰＥ）。使用原代细胞增殖ＣＳＦＶ弱毒疫苗。结果显示：病毒的增殖能够增加原代牛睾丸细胞的传代次数和维持时间。因此，ＣＳＦＶ疫苗生产上能够在接毒后多次收获病毒。此外，ＣＳＦＶ弱毒株还能够刺激体外培养的兔巨噬细胞增殖，使形成致密的单细胞层。使用传代细胞ＰＫ１５增殖病毒，经流式细胞术检测发现ＣＳＦＶ弱毒的增殖不仅不改变ＰＫ１５细胞的增殖周期，并且能够影响Ｇ４１８对ＰＫ１５细胞增殖的抑制作用，促进其宿主细胞的增殖。ＣＳＦＶ对体外培养细胞的增殖有促进作用，然而感染猪对猪机体的损伤却很严重。实验结果显示ＣＳＦＶ与其宿主细胞间相互作用的复杂性。; 王镇陆宇丁明孝; 关键词：猪瘟病毒增殖宿主细胞相互作用

痘苗病毒诱导HeLa细胞的凋亡被引量：6: 1998年; 痘苗病毒感染ＨｅＬａ细胞后形态学上出现了较典型的细胞凋亡特征，电泳分析显示出ＤＮＡ阶梯，用ＤＮＡ断裂原位检测技术发现其染色质断裂主要存在于核周，与染色质凝聚位置相似。; 张小青陆宇丁明孝; 关键词：细胞凋亡痘苗病毒 HELA细胞

猪瘟病毒E2(gp55)基因的克隆表达及其DNA疫苗的初步研究被引量：23: 2000年; 用RT PCR方法从中国标准强毒株石门毒的细胞培养物中扩增获得了其结构蛋白E2基因cDNA ,将之克隆到 pGEM 5ZT载体 ,用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列 ,并推导出其对应氨基酸序列 ,与几个代表毒株Alfort株、Brescia株和C株相应序列进行比较 ,所测核苷酸序列与各株的同源性分别为 84 7%、92 6%和 95 2 % ,氨基酸序列的同源性分别为89 4% ,92 6%和 94 6% ;将此E2片段亚克隆至真核表达载体 pcDNA3 1 ,构建表达CSFVE2蛋白的重组质粒 pcE2 ,用脂质体转染法将 pcE2导入cos 7细胞进行瞬时表达 ,用针对E2蛋白的特异性单抗以间接免疫荧光法检测 ,结果E2蛋白在cos 7细胞中获得了正确表达 ,随之将pcE2质粒DNA进行小鼠肌内接种免疫 ,ELISA法检测证实在免疫后 2周和 4周的小鼠体内可诱导出较为明显的阳性血清 ,并高于E2单抗的阳性对照 ,病毒中和试验也表明DNA免疫后小鼠体内可诱导产生CSFV中和抗体 ;同时构建了能在昆虫细胞Sf9中表达GST E2和GST GFP E2融合蛋白的重组杆状病毒 ;上述研究结果为研制针对CSFV的DNA疫苗 ,亚单位疫苗及其诊断试剂打下了基础。; 周鹏程陆宇陈建国翟中和丁明孝; 关键词：猪瘟病毒 DNA疫苗 E2基因基因表达免疫防制

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陆宇