马云云
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
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- 人趋化因子受体5基因的克隆及原核表达
- 2008年
- 目的:构建人趋化因子受体5(CCR5)原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达。方法:从健康人外周血单个核细胞提取总RNA,以RT-PCR获得CCR5基因全长1059bp的完整编码序列;将其克隆入载体pGEM-T中,经限制性内切酶和菌落PCR分析并测序;再将阳性重组子中的CCR5片段与表达载体pQE80L连接并转化大肠杆菌DH5α,进行诱导表达,对表达产物进行纯化和鉴定。结果:SDS-PAGE和Western Blot分析表明,在30℃以IPTG诱导获得相对分子质量为41000的CCR5重组蛋白表达带,诱导4h后此蛋白表达量约为全菌总蛋白的25%。结论:成功获得人CCR5重组蛋白。
- 赵国新靳静冯龙马云云卫艳萍赵国强
- 关键词：趋化因子受体5基因克隆
- 人趋化因子受体5基因5′侧翼区功能分析
- 2008年
- 目的:分析人趋化因子受体5(CCR5)基因5′侧翼区的调控序列。方法:构建CCR5基因不同长度5′侧翼区的萤光素酶报告基因载体,分别转染入Jurkat细胞中,检测分析其萤光素酶活性。结果:CCR5基因5′侧翼区-1006bp至-1bp、-804bp至-1bp、-586bp至-1bp和-478bp至-1bp区段的pGL3重组质粒在Jurkat细胞中能表现出明显的萤光素酶活性。结论:CCR5基因5′侧翼区-478bp至-1bp序列中存在基因转录的主要上调元件。
- 靳静赵国新冯龙马云云卫艳萍赵国强
- 关键词：趋化因子受体5报告基因
- 人CXCR4基因启动子萤光素酶报告载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建并鉴定人CXCR4基因启动子萤光素酶报告载体,为AIDS的靶向基因治疗奠定基础。方法利用PCR技术扩增人CXCR4基因启动子的核心片段,克隆至含新霉素抗性的萤光素酶表达载体pGL3-neo,构建含CXCR4启动子的萤光素酶表达载体pGL3-neo-CXCR4,重组子经双酶切、PCR及测序鉴定。再将构建的载体用脂质体转染体外培养的Jurkat细胞株,检测萤光素酶的表达活性。结果扩增得到CXCR4基因启动子序列,克隆入pGL3-neo-CXCR4的CXCR4基因启动子序列与GenBank报道的一致,实验组(pGL3-neo-CXCR4组)萤光素酶的表达活性为869 159.0±62 618.8,与空白组(未转染组)的464.2±44.0和对照组(pGL3-neo组)的39 088.4±3867.9相比,差异有统计学意义(F=1415.124,P均<0.05)。结论成功构建了含人CXCR4基因启动子的萤光素酶报告基因表达载体pGL3-neo-CXCR4。
- 卫艳萍马云云何婷玉冯龙郭文涛赵国强
- 关键词：CXCR4启动子
- 肠道病毒71型河南分离株2株全基因组序列分析被引量：1
- 2012年
- 目的:了解2011年河南洛阳和南阳地区流行的肠道病毒71型(EV71)基因特征。方法:分离洛阳和南阳地区EV71病毒各一株,分别进行全基因测序和基因进化分析。结果:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011的VP1区序列在进化树上均属于C4亚型,与国内流行株都具有较高同源性,与2008年广东流行株亲缘关系最近。这2株全基因核苷酸序列同源性为99.3%,氨基酸序列同源性为97.6%,并且氨基酸均没有发生明显改变。结论:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011属于C4亚型,与我省及我国既往流行株相比,未发生大的变异。
- 冷弘卢欣刘慧涛马云云王媛媛马晶郭茂峰李敏赵国强
- 关键词：肠道病毒71型手足口病同源性分析
- 以人CCR5启动子为靶的药物筛选方法的初步建立被引量：5
- 2009年
- 构建靶向人趋化因子受体5(CCchemokine receptors5,CCR5)启动子的药物筛选系统。将CCR5启动子序列克隆入改建后的报告载体pGL3-neo,转染pGL3-neo-CCR5入Jurkat细胞(急性T淋巴细胞性白血病细胞),G418筛选后分组;用7种中药分别作用于各组细胞16h后,检测细胞中CCR5启动子的表达水平。结果显示,双黄连组比对照组的荧光值明显降低(P<0.05);川琥宁组、黄芩组、黄芪组比对照组的荧光值明显升高(P<0.01)。双黄连可使体外培养细胞转染的CCR5启动子活性降低,川琥宁、黄芩、黄芪可使体外培养细胞转染的CCR5启动子活性增高。表明初步构建成功靶向人CCR5启动子的药物筛选系统。
- 卫艳萍冯龙马云云董子明韩志强赵国强
- 关键词：体外筛选中药
- RNA干扰沉默Livin基因表达对食管癌裸鼠移植瘤的抑制作用被引量：3
- 2008年
- 目的利用RNA干扰技术在裸鼠体内抑制Livin基因表达,探讨RNA干扰对食管癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法设计靶向Livin基因的siRNA,构建重组siRNA表达载体pRNAT-U6.1-siLivin并导入裸鼠皮下移植瘤,观察肿瘤生长情况。采用RT-PCR方法检测干预组和对照组Livin基因表达。结果pRNAT-U6.1-siLivin导入裸鼠皮下移植瘤后14 d,肿瘤体积明显变小。LivinmRNA表达明显降低。结论pRNAT-U6.1-siLivin可以明显抑制食管癌裸鼠移植瘤的增殖。
- 王春丽何婷玉冯龙马云云郭文涛赵国强
- 关键词：RNA干扰食管癌LIVIN裸鼠
- 复方大青叶注射液对体外培养HT-H9细胞CXCR4启动子活性的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨复方大青叶注射液对体外培养HT-H9细胞中CXCR4启动子活性的作用。方法:克隆人CX-CR4启动子序列,构建报告载体pGL4.17-CXCR4;转染HT-H9细胞株,G418筛选后分组,高、低剂量实验组分别用200、100mg/L大青液注射液处理,设注射水对照组、空白对照组和未转染对照组;各组处理24h后,进行荧光素酶活性检测。结果:成功构建含人CXCR4启动子序列的报告载体PGL4.17-CXCR4;5组荧光素酶活性比较差异有统计学意义(F=135.510,P<0.001)。复方大青叶注射液高剂量组与低剂量组荧光素酶活性均明显低于对照组(P<0.01)。结论:复方大青叶注射液能够有效抑制体外培养HT-H9细胞中CXCR4启动子活性。
- 冷弘刘慧涛臧玉翠马云云李敏靳静赵国强
- 关键词：复方大青叶注射液艾滋病
- 针对人免疫缺陷病毒1型辅助受体CCR5 RNA干扰表达载体的构建
- 2008年
- 目的:抑制细胞表面人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的辅助受体CCR5表达,阻止HIV-1进入靶细胞。方法:设计CCR5靶向的发夹状siRNA,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹pRNAT-U6.2-siCCR5后转染U937细胞,采用RT-PCR和流式细胞术分别检测CCR5基因mRNA和蛋白表达的变化。结果:重组子pRNAT-U6.2-siCCR5,经过测序鉴定与设计一致。RT-PCR检测显示,转染pRNAT-U6.2-siCCR5细胞的CCR5基因表达水平显著降低于未转染对照组和转染空载体细胞(P<0.05)。未转染对照组U937细胞表面CCR5的表达率为(83.10±6.52)%,转染空载体组为(81.44±4.97)%,转染pRNAT-U6.2-siCCR5组为(1.94±0.06)%,3组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建出沉默细胞CCR5基因表达的siRNA载体。
- 靳静赵国新杨松华冯龙马云云卫艳萍赵国强
- 关键词：CCR5RNA干扰人免疫缺陷病毒1型辅助受体
- 带新霉素抗性的萤光素酶报告载体的构建
- 2009年
- 目的:构建带新霉素抗性的萤光素酶报告载体。方法:设计扩增新霉素抗性基因neo,克隆入萤光素酶报告载体pGL3,得到pGL3-neo。分别比较pGL3、pGL3-CMV promoter瞬时转染组和经G418筛选的pGL3-neo、pGL3-neo-CMV promoter稳定转染组细胞萤光素酶活性。结果:PCR扩增出neo表达单元;酶切和DNA测序分析鉴定得到带新霉素抗性的萤光素酶报告质粒pGL3-neo。G418筛选可获得稳定转染pGL3-neo细胞株和稳定转染pGL3-neo-CMV promoter的细胞株。荧光检测显示:瞬时转染pGL3组、pGL3-CMVpromoter组及稳定转染pGL3-neo组、pGL3-neo-CMVpromoter组萤光素酶活性值分别为1047±86、1504±107和34819±1479、456109±15791,稳定转染组萤光素酶活性均高于瞬时转染组,P<0.05。结论:成功构建了带新霉素抗性的萤光素酶报告基因载体,使报告基因检测数据的敏感性和可靠性显著提高。
- 马云云冯龙卫艳萍李月白何婷玉董子明赵国强
- 关键词：克隆
- HTLV-1 HBZ对cyclin D1表达的调控作用和HTLV-1 ELISA检测方法的建立
- 背景与目的 人类T淋巴细胞白血病病毒（human T-lymphotropic virus,HTLV）是最早发现的人类逆转录病毒,主要包括四种亚型,其中HTLV-1和HTLV-2二者的基因水平70%同源。成人T细胞...
- 马云云
- 关键词：CREB
- 文献传递
