丁孟建 作品数:28 被引量:83 H指数:5 供职机构: 西南大学 更多>> 发文基金: 重庆市自然科学基金 西南大学科研基金项目 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 文化科学 医药卫生 更多>>
H5N1型禽流感NS1基因在HEK293细胞中的表达及稳定细胞系的构建 被引量:4 2018年 将H5N1型禽流感病毒NS1(non-structural protein 1)基因插入pEGFP-N1真核表达载体中,获得重组质粒pNS1-EGFP,经酶切鉴定并测序后,去内毒素提取pNS1-EGFP质粒,在脂质体转染试剂作用下将pNS1-EGFP质粒转染HEK293细胞,利用倒置荧光显微镜、FCM和Western blot 3种方法检测NS1-EGFP融合蛋白的表达,利用极限稀释的方法获取单细胞,并利用G418抗性筛选获取稳定细胞系。结果显示,NS1基因正确插入pEGFP-N1真核表达载体,NS1-EGFP融合蛋白读码框架正确;3种检测方法表明,NS1-EGFP融合蛋白在HEK293细胞中能够表达;pEGFP-N1和NS1-EGFP稳定细胞系流式细胞仪检测,阳性率分别为95.74%和96.10%,Western blot检测结果发现,HEK293空白细胞和pEGFP-N1稳定细胞系未见任何条带,NS1-EGFP稳定细胞系在51 000处见特异性条带,综上说明稳定细胞系构建成功。本试验为进一步深入研究禽流感病毒NS1基因的生物学功能作铺垫。 王红均 张其彬 伍莉 陈吉轩 帅学宏 丁孟建 黄庆洲 焦寒伟关键词:H5N1型禽流感病毒 EGFP 真核表达 稳定细胞系 肉鸡S.enteritidis感染的诊断及防制初步研究 肠炎沙门氏菌(S. enteritidis)属于无宿主特异性而有侵害性的病原菌之一,是通过污染动物性产品而引起人类细菌性食物中毒的主要致病菌,其中禽肉及禽蛋的污染最为严重。随着家禽养殖业的集约化程度提高,肠炎沙门氏菌的感... 丁孟建关键词:肉鸡 肠炎沙门氏菌感染 疾病防制 免疫保护 文献传递 鸭疫里默氏杆菌明胶酶的纯化及特性分析 被引量:1 2010年 为阐明鸭疫里默氏杆菌明胶酶的特性,试验以液化明胶的AF株为研究对象,纯化了其明胶酶,并对该酶进行热稳定性、蛋白化学修饰剂抑制作用、金属离子及络合物的影响和致病性等特性分析。结果表明,鸭疫里默氏杆菌AF株的培养上清经超滤浓缩、70%硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、疏水柱层析和凝胶柱层析,可获得纯化的明胶酶,SDS-PAGE显示单条带,相对分子质量约59000。该酶在65℃迅速失活,Cu2+、Cd2+、Mn2+、Hg2+对酶活性有强烈的抑制作用,络合物EDTA和EGTA的抑制作用可被Ca2+逆转,PMSF、NBS和AAD可抑制其活性。明胶酶对雏鸭具有毒力,能缩短鸭疫里默氏杆菌致病菌株感染的潜伏期和致死动物的时间,显著提高动物的死亡率。以上结果表明,鸭疫里默氏杆菌明胶酶是一种具有致病作用的金属蛋白酶。 唐妤 李继祥 高继业 丁孟建 朱周福关键词:鸭疫里默氏杆菌 明胶酶 纯化 牛病毒性腹泻的诊疗报告 2011年 牛病毒性腹泻又称牛黏膜病,由牛病毒性腹泻病毒引起,以发热、口腔及其他消化道黏膜糜烂或溃疡、白细胞减少为特征。笔者在门诊时遇到一养牛场牛口腔溃疡、流涎病例,采用紧急免疫接种、控制继发感染的治疗方案,收到了理想的疗效。报告如下。 丁孟建 李前勇 张德志关键词:牛病毒性腹泻病毒 诊疗报告 紧急免疫接种 白细胞减少 继发感染 鸭疫里默氏杆菌不同分离株生化特性及胞外蛋白酶的检测 2009年 研究测定了29株鸭疫里默氏杆菌不同分离株的生化指标,并采用底物平板法、底物-PAGE法检测了鸭疫里默氏杆菌胞外蛋白酶的产生情况。结果显示,所有分离株接触酶阳性,硝酸盐还原试验、M.R和V.P试验、尿素酶、精氨酸酶阴性,大部分菌株不发酵碳水化合物,能缓慢液化明胶,明胶液化阳性率为89.7%(26/29)。底物平板法和底物-PAGE法检测发现,89.7%(26/29)的鸭疫里默氏杆菌分离株能产生降解明胶和脱脂奶蛋白的胞外蛋白酶,且该酶类活性可被EDTA抑制。 唐妤 李继祥 高继业 丁孟建 汪敏关键词:鸭疫里默氏杆菌 生化特性 胞外蛋白酶 四川广安某猪场香猪疾病的诊断 被引量:2 2016年 2014年7月和2014年11月,广安某香猪养殖场饲养的香猪两次发病。第1次为种母香猪发病,表现精神沉郁,呼吸急促,鼻孔流出大量泡沫样分泌物,皮肤发绀,体温40℃-42℃之间,母猪怀孕后期流产,近1个月内死亡23头种母猪,流产8胎。 丁孟建 杨晓伟 黄坤英 谢正鹏 王自强 李隆耀关键词:猪疾病 猪场 怀孕后期 种母猪 香猪 重庆某猪场猪圆环病毒与附红细胞体混合感染的诊治 2012年 2011年4月中旬,重庆大足县某千头猪场猪群发病,开始表现2头猪胸、背及腰部皮肤炎症,疑似螨虫感染或蚊虫叮咬,口服伊维菌素无效,15日内病情蔓延至全群,大剂量使用磺胺药物后病情更加严重,相继死亡母猪5头,育肥猪14头,另有30多头病危。据养殖户介绍:该场免疫疫苗有猪瘟细胞苗、O型口蹄疫疫苗、伪狂犬基因缺失苗和蓝耳灭活苗,未免疫PCV2苗。笔者亲身经历,对该病诊断情况报告如下,以期对临床猪病防治有帮助。 丁孟建 黄坤英 杨晓伟关键词:猪圆环病毒 附红细胞体 猪场 O型口蹄疫疫苗 诊治 免疫疫苗 种鸭环肠吸虫与棘口吸虫混合感染的诊治 2018年 重庆某养鸭场饲养2500羽产蛋种鸭,2017年8中旬至10月中旬陆续出现以呼吸困难、咳嗽、甩头、产蛋率低、畸形蛋、薄壳蛋、消瘦、零星死亡为特征的疾病。根据发病情况、临床症状、剖检及实验室检验,确诊为鸭环肠吸虫与棘口吸虫混合感染。 余银连 刘光华 丁孟建关键词:种鸭 诊治 应用多聚酶链反应检测生鸡肉中沙门氏菌的研究 2010年 目的:建立快速、特异、灵敏的PCR方法以检测生鸡肉中的肠炎沙门氏菌。方法:以肠炎沙门氏菌的sefA基因作为靶序列设计一对引物,将样品增菌后用煮沸法提取细菌基因组DNA进行检测。结果:每克生鸡肉污染3.0×10°CFU肠炎沙门氏菌,经16h增菌培养后可扩增出500bp特异性性DNA带,对28份屠宰场样品的检测结果与传统方法相符合。结论:PCR法适于生鸡肉中肠炎沙门氏菌的快速、准确检测。 刘子勇 高继业 唐妤 丁孟建 李继祥关键词:多聚酶链反应 肠炎沙门氏菌 动物医学本科病原微生物及免疫学相关课程实验教学改革探析 被引量:1 2018年 对动物医学本科传统病原微生物及免疫学相关课程实验教学中存在的问题进行分析,阐述了课程设置、教学内容、教学方式及教学组织形式等方面的改革思路,并提出具体改革措施,以建立连续、自主、开放的实验教学模式,从而培养创新型动物医学人才。 李继祥 丁孟建 李德龙 高继业 陈思怀 唐发书关键词:动物医学 本科 实验教学