丁海明
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人β_2m转基因小鼠的制备、筛选及鉴定被引量：3
- 2001年
- 目的 :制备人β2 m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4的表达。方法 :应用显微注射将人 β2 m基因注入C5 7BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 ,出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定和测定整合拷贝数 ,利用RT PCR检测阳性鼠中人 β2 m转基因的表达。结果 :6只原代仔鼠及 7只它们的下一代 (F1)带有人 β2 m基因。由微注射基因后移卵出生的 86只小鼠中 ,C5 7BL/6×昆明鼠杂交仔鼠 35只 ,其中 4只阳性 (11.4% ) ,昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠 5 1只 ,其中 2只阳性 (3.9% ) ,含有人 β2 m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠 2 0只 ,其中 7只阳性。整合的转基因均为单拷贝。Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合。阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人 β2 m转基因mRNA的表达。结论 :在转基因动物制备中 ,C5 7BL/6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代。与人HLA B2 70 4基因相比 ,人 β2 m基因不易整合 ,其整合率与整合拷贝数均较低。得到的人 β2 m转基因小鼠能够将人 β2 m基因传给下一代并可与人HLA B2 70 4转基因鼠交配。
- 陈占昆吕厚山艾京蒋东芳丁海明王东王申五冯传汉
- 关键词：转基因小鼠基因组
- 携带HLA-B2704基因转基因小鼠技术的建立被引量：4
- 2002年
- 应用显微注射法制备携带HLA B2 70 4基因的转基因小鼠 .对 2 86只昆明小鼠激素注射进行超排卵 ,采集受精卵 ,将含HLA B2 70 4基因的基因组DNA片段 (简称HLA B2 70 4DNA)显微注射到受精卵原核内 ,把注射存活的两细胞期受精卵移入假孕鼠的输卵管内使其发育产生后代 .用PCR方法进行F0代仔鼠及F1代仔鼠的转基因整合的检测 .利用RT PCR检测阳性鼠中的HLA B2 70 4转基因的表达 .采集了 84 11个卵 ,可注射卵 6 6 0 9个 ,其中注射存活的两细胞期受精卵 4 2 77个 ,卵的注射存活率为 6 4 7%.将卵移入 15 3只假孕鼠 ,其中 2 6只怀孕产仔 ,存活 10 1只 .在 10只F0代仔鼠基因组中有HLA B2 70 4基因整合 ,整合率为 9 9%.转基因阳性鼠F0代之间以及与正常鼠之间进行交配 ,产生的F1代仔鼠 78只 ,其中 15只为阳性 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA B2 70 4转基因mRNA的表达 .在HLA B2 70 4转基因阳性小鼠中 ,6只小鼠皮肤出现脱毛 ,1只小鼠的足部及足趾明显红肿 ,2只在脱毛同时明显畏光 ,1只出现腹泻 .结果表明 ,成功地建立了HLA B2 70 4的转基因小鼠技术 ,该小鼠类似强直性脊柱炎的小鼠模型 .
- 陈占昆吕厚山蒋东芳王东艾京丁海明王申五
- 关键词：转基因小鼠疾病模型
- HLA-B2704转基因小鼠的银屑病样皮肤病
- 2001年
- 目的 通过对HLA B2 70 4转基因小鼠的皮肤疾病表型的研究 ,证实HLA B2 70 4在银屑病样皮肤病发病中的作用。方法 应用聚合酶链式反应 (PCR)、斑点杂交和Southern杂交对转基因小鼠进行筛选和鉴定 ,并用图象处理测定其整合拷贝数 ,发病鼠行皮肤HE染色和免疫组织化学染色检测病理和HLA B2 70 4的表达。结果 有 6只转基因阳性鼠出现明显的皮肤银屑病样改变 ,皮肤HE染色可见表皮明显增生、角化 ,免疫组织化学表皮细胞内可见HLA B2 70 4高表达。结论 HLA B2 70
- 王东吕厚山丁海明张斌陈占昆蒋东芳艾京
- 关键词：关节炎牛皮癣HLA-B27抗原小鼠转基因
- HLA-B2704转基因小鼠自发性前葡萄膜炎被引量：4
- 2000年
- 目的 观察HLA B2 70 4转基因小鼠葡萄膜炎发病情况和糖皮质激素治疗的初步疗效。方法 应用PCR、斑点杂交、Southern杂交、免疫组织化学和流式细胞术进行阳性动物筛选和表达检测。隔日观察眼部症状 ,可疑动物行眼底镜以及裂隙灯检查 ,眼球组织切片行HE染色 ,房水行细胞计数和分类统计。结果 部分HLA B2 70 4转基因阳性鼠出现明显畏光 ,眼科检查发现角膜后沉淀。病理发现角膜上皮细胞增生 ,排列紊乱。房水总细胞数增加 ,炎性细胞与总细胞数之比为9 2 4%。正常对照比值为 0 75 %。 χ2 检验显示二者差异存在显著性 ,P <0 0 5。地塞米松治疗可以减轻症状 ,停药后症状加重。符合前葡萄膜炎诊断。结论 首次在转基因小鼠观察到类似人的HLA B2 7相关性前葡萄膜炎。
- 丁海明吕厚山蒋东芳陈占昆
- 关键词：转基因小鼠HLA-B27抗原
- 人β_2m转基因小鼠的制备及鉴定(英文)被引量：2
- 2001年
- 制备人 β2m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4基因的表达 .应用显微注射将人 β2m基因注入C5 7BL 6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 .出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本进行进一步鉴定和测定整合拷贝数 ,利用RT PCR检测阳性鼠中人 β2m转基因的表达 .6只原代仔鼠及 7只它们的下一代鼠 (F1)带有人 β2m基因 .由微注射基因后移卵出生的 86只小鼠中 ,C5 7BL 6×昆明鼠杂交仔鼠 35只 ,其中 4只阳性 (11 4 % ) ,昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠 5 1只 ,其中 2只阳性 (3 9% ) ,含有人 β2m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠 2 0只 ,其中 7只阳性 .整合的转基因均为单拷贝 .Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人β2m转基因mRNA的表达 .在转基因动物制备中 ,C5 7BL 6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代 .与人HLA B2 70 4基因相比 ,人 β2m基因不易整合 ,其整合率与整合拷贝数均较低 .得到的人 β2m转基因小鼠能够将人 β2m基困传给下一代 ,并可与人HLA B2 70 4转基因鼠交配 。
- 陈占昆吕厚山艾京蒋东芳丁海明王东冯传汉王申五
- 关键词：转基因小鼠
