倪艳
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：泸州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 四环素调控表达肿瘤坏死因子α抗乙型被引量：2
- 2014年
- 目的研究四环素调控表达的肿瘤坏死因子α（TNFα）抑制HBV复制的作用。方法以pcDNA4TM／四环素操纵子序列（TO）载体为模板，用PeR法扩增含四环素调控表达序列片段TO，插入pUC118载体中测序，选择测序正确的序列取代pVITR03载体中相应的片段，构建成pVITR03-TO。用相同的方法以pcDNA6／四环素阻遏蛋白（TR）。载体为模板扩增TR基因，经测序证实后插入pVITR03-TO载体的一个多克隆位点，构建成pVITR03-TO-TR。在另一个多克隆位点插入TNFα基因，构建pVITR03-TO-T10TNFα。将重组质粒瞬时转染HepG2细胞，研究四环素调控表达TNF0t的有效性。以HepG2．2．15细胞为HBV复制模型，转染pVITR03-TO-TR-TNFα后，经潮霉素抗性筛选及有限稀释，选择高效表达TNFα的细胞建立细胞系，观察经四环素调控表达后，TNFα抑制HBV复制的作用。多组间数据比较使用方差分析。结果经过改建的双表达载体能够有效表达TNFα，并可以用不同剂量的四环素进行调控，四环素的最佳工作浓度为1．0μg／ml。诱导l、3、5d后，转染pVITR03-TOTR-TNFα组上清液中的HBsAg抑制率分别为14．8％、11．5％、28．44％，转染pVITR03-TOTR组分别为1．2％、1．1％、0，诱导5d后的HBsAg抑制率差异有统计学意义（F=13．65，P〈0．05）I转染pVITR03-TOTR-TNFa组的HBeAg的抑制率分别为50％、26．67％、47．85％，转染pVITR03-TOTR组分别为0．3％、1．3％、0，诱导1、3、5d时的HBeAg抑制率差异均有统计学意义（F值分别为27．31、14．06和43．76，P值均〈O．05）。荧光定量PCR结果显示，诱导5d后，TNFα对细胞内和培养上清液的HBVDNA有明显的抑制作用，抑制率分别为70．26％和79．86％，与对照组相比，差异均有统计学意义∽值分别为96．7和62．72，P〈0．05）。进一步的研究结果表明，TNFα对HBVS基因的mRNA转录有明显抑制作用。结论成功构建了四环素调控表
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- 关键词：肝炎病毒乙型细胞因子
- HBV-S基因四环素调控双表达载体的构建及其调控表达研究
- 2011年
- 目的:构建在同一载体中含乙肝病毒表面抗原基因(Hepatitis B virus surface gene,HBV-S)和四环素阻抑蛋白基因的双表达载体,研究在真核细胞中四环素对S基因表达的调控。方法:在双表达载体pVITRO3一个启动子后的多克隆位点插入四环素阻抑蛋白基因,用含四环素操纵子的启动子取代另一个启动子,并在其多克隆位点插入S基因,在同一载体中构建成S基因的四环素调控表达系统。用脂质体将重组质粒转染HepG2细胞,潮霉素400μg/ml进行抗性筛选,20 d形成抗性克隆,建立在四环素诱导下能稳定表达S基因的细胞系。以不同浓度的四环素(0.5、1.0、2.0、3.0μg/ml)进行诱导,用逆转录PCR和微粒子酶免疫分析法检测S抗原的表达,以确定四环素的最佳浓度。结果:转染了重组质粒的HepG2细胞,在无四环素环境下,表达HBsAg水平极低,72 h时S/N值平均为1.57,在不同浓度的四环素诱导下,HBsAg表达量明显增加,72 h时S/N平均值分别为4.24、4.23、4.18、4.20,未发现与四环素的浓度之间有剂量关系。结论:成功构建了在同一质粒中表达HBV-S基因和四环素阻抑蛋白基因的双表达调控载体,在不同浓度四环素诱导下均有HBsAg表达,并随时间延长而表达量增高,但在同一时间点无明显差异。
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- 关键词：乙肝病毒四环素
- HBV-S基因四环素调控双表达载体的构建及其调控表达研究
- 目的:构建在同一载体中含乙型肝炎病毒S基因(HBV-S)和四环素阻抑蛋白基因的双表达载体,研究在真核细胞中四环素对S基因表达的调控。方法:在双表达载体pVITRO3一个启动子后的多克隆位点插入四环素阻抑蛋白基因,用含四环...
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- 文献传递
- 隐匿性乙型肝炎的若干问题被引量：7
- 2006年
- 倪艳周智
- 关键词：肝功能检查聚合酶链反应
- 四环素双表达调控表达载体的构建、鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的:构建在同一载体中可用四环素调控表达目的基因的载体。方法:以pcDNA4TM/TO为模板,用PCR法扩增含四环素调控表达序列的片段TO(位于NdeI和SacII之间),插入pUC118载体中测序,选择测序正确的序列取代pVITRO3载体中相应的片段,构建成pVITRO3-TO。用相同的方法以pcDNA6/TR○c为模板扩增四环素阻遏蛋白基因(TR),经测序证实后插入pVITRO3-TO载体的一个多克隆位点。结果:用PCR成功扩增出四环素调控表达序列片段和四环素阻遏蛋白基因片段,亚克隆后各选2个克隆测序,均找到了序列正确的克隆,经内切酶双切后插入pVITRO3中,完成了目的载体的构建。结论:初步构建了四环素双表达调控表达载体(pVITRO3-TO-TR)。
- 周智倪艳雷宇王蜀强陈压西任红
- 关键词：四环素
