冯力
- 作品数：191 被引量：838H指数：18
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 血红蛋白β亚基对猪流行性腹泻病毒增殖抑制作用的研究被引量：2
- 2016年
- 本实验室前期蛋白质组学研究结果显示,猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)后,导致血红蛋白β亚基(HBB)的表达量升高。为进一步从蛋白水平验证前期的实验结果并研究HBB对PEDV增殖作用的影响,本研究将PEDV感染Vero-E6细胞,感染24 h后经western blot检测结果表明,PEDV感染能够促进HBB的表达。进一步采用RT-PCR从Vero-E6细胞总RNA中扩增HBB基因并将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,构建HBB真核表达重组质粒pCAGGS-HBB,并将其转染至Vero-E6细胞。经western blot检测结果表明,HBB在Vero-E6细胞中获得高效表达。在HBB过表达后感染PEDV,经western blot、TCID_(50)及荧光定量PCR检测结果表明,过表达HBB能够显著抑制PEDV的增殖。本研究对于进一步阐明HBB对PEDV增殖作用的影响机制提供了实验依据。
- 徐云飞郭龙军张健时洪艳冯力任慧英王玉娥
- 关键词：猪流行性腹泻病毒病毒增殖
- 猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究被引量：2
- 2024年
- 为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞,24 h后以SADS-CoV感染,24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见,与阴性对照组细胞相比,感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV(MOI 0.1)感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高,LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势,而p62蛋白表达水平则显著降低(P<0.05),表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响,本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染,于感染后不同时间收获细胞,通过western blot和病毒滴度(TCID_(50))测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与仅感染病毒的对照组相比,采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)均显著降低(P<0.05),而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)则均显著升高(P<0.05)。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA(siATG5-1/2/3),将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染,24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与未转染siATG5的3组阴性细胞相比,转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低(P<0.05)。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制,该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及�
- 曾苗苗刘大凯张记宇张燎原冯廷帅杨小曼时洪艳张鑫陈建飞石达冯力
- 关键词：病毒复制
- 猪流行性腹泻病毒S蛋白受体结合域的分析被引量：5
- 2009年
- 以猪流行性腹泻病毒(PEDV)可溶性的猪氨基肽酶N受体为靶蛋白对PEDV S1基因特异性肽库进行3轮生物淘选,然后对30个淘选的噬菌体克隆进行测序。序列分析发现,2个噬菌体克隆展示无义氨基酸序列,其余28个噬菌体克隆展示的氨基酸序列位于PEDV S蛋白的第249-529位氨基酸区域,这个区域被命名为MRR。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对MRR基因进行真核表达。Western blot结果表明,表达的MRR重组蛋白能够与兔抗PEDV多克隆抗体反应。
- 孙东波陈建飞时洪艳申识川吕茂杰范秀萍陈洪岩冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S蛋白
- 我国猪主要腹泻性疾病的现状与综合防制概况被引量：4
- 2002年
- 佟有恩冯力等
- 关键词：腹泻性疾病综合防制
- 猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻二联疫苗及其应用被引量：2
- 2004年
- 冯力王文富李赞
- 关键词：传染性胃肠炎流行性腹泻二联疫苗
- ASFV流行大背景下的猪场生物安全--全面系统思维与执行力
- 冯力
- 猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白全长的原核表达及其反应原性分析
- 根据猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白的基因组序列，设计一对引物，采用RT-PCR方法扩增出M基因，将其克隆至原核表达载体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M，经测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3)，并进行I...
- 张志榜陈建飞时洪艳陈小金冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒跨膜蛋白原核表达免疫印迹
- 文献传递
- 猪NLRC5基因启动子克隆及生物信息学分析
- 2021年
- 为了构建猪NLR家族含CARD结构域5(NOD-like receptor family caspase recruitment domain family domain-containing 5,NLRC5)基因启动子双荧光素酶报告质粒,确认其活性,进而探索其转录调控机制,试验采用PCR方法从猪睾丸细胞(swine testicular cell,ST细胞)中扩增出猪NLRC5基因启动子,将其与pGL3-Basic载体连接,测序正确后将猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒转染至ST细胞中,通过双荧光素酶报告检测试剂盒检测荧光素酶的表达活性,并使用生物信息学软件预测该基因启动子区域的CpG岛、调控元件及转录因子结合位点。结果表明:试验成功构建猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒,该质粒的相对荧光素酶活性极显著高于pGL3-Basic载体(P<0.01)。NLRC5基因启动子区域中存在2个CpG岛,TATA box、CCAAT box和GC box等多种调控元件,以及IRF1、IRF3、STAT1、STAT3、STAT4和NF-κB转录因子结合位点。说明猪NLRC5基因的表达可能受甲基化的影响,同时也可能受顺式作用元件以及干扰素和NF-κB相关转录因子的调控。
- 刘翔尹灵丹薛美李亮赵立媛蒋成凡王文哲冯力刘平黄
- 关键词：转录因子结合位点生物信息学
- IFITMs在猪肠道冠状病毒感染中的作用
- 研究背景和目的 :病毒感染后细胞产生的干扰素诱导激活一系列基因统称为干扰素激活基因(IFN-stimulated genes,ISGs),其中包括宿主的病毒限制因子,如最近发现的细胞限制因子-干扰素诱导跨膜蛋白(Inte...
- 刘平黄冯力符芳应兰石达
- 文献传递
- 猪流行性腹泻病毒M蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：10
- 2011年
- 为制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗M蛋白单克隆抗体(MAb),本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BALB/c小鼠;以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,得到一株稳定分泌抗M蛋白MAb。MAb亚类鉴定为IgG2b型,轻链为κ链,杂交瘤细胞培养上清和诱导的小鼠腹水抗体效价分别为1∶3000和1∶2×105。Westernblot试验表明该MAb能够识别重组及天然的PEDVM蛋白。间接免疫荧光试验表明该MAb能够与PEDV感染的VeroE6细胞产生特异性免疫荧光。
- 张志榜陈建飞时洪艳杨斌石达陈小金冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒M蛋白单克隆抗体
