吴昱彤
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人乳腺癌全套抗体可变区基因的扩增与克隆被引量：3
- 2004年
- 目的 扩增人乳腺癌抗体全套可变区基因 ,将其克隆到T载体来构建T载体文库。方法 收集乳腺癌患者外周转移淋巴结 30例 ,TRIzol法提取总RNA、纯化mRNA ,行RT PCR扩增 ,制备T载体 ,用于PCR产物的克隆。结果 总RNA纯度高 ,完整性好 ,mRNA获得率为 1%。经RT PCR ,VH、Vλ、Vκ的每一条 5 '端引物均与其相应的 3'端引物成功地扩增出了可变区基因片段 ,轻、重链T载体库分别为 1.7× 10 8和 3.5× 10 8。结论 所采用的引物能够10 0 %扩增目的片段 ,T载体过渡能显著提高克隆效率 ,为噬菌体抗体库的构建和筛选奠定了基础。
- 吕勇刚窦科峰吴昱彤赵爱志刘杰陈刚陶开山药立波
- 关键词：聚合酶链式反应乳腺癌抗体基因T载体
- 建立崭新的病案管理模式实现信息资料的现代化、规范化管理
- 2001年
- 20世纪科学技术的进步改变了人类的工作方式,信息技术的发展对病案产生了巨大影响并冲击了滞后的管理方式.建立崭新的病案管理模式在医、教、研诸方面的作用越来越显著,病案信息资料的价值越来越得到认可,病案管理已成为实现医院管理的重要组成部分.……
- 马玉荣吴昱彤
- T载体在噬菌体单链抗体库中的应用被引量：2
- 2004年
- 目的 将T载体用于提高PCR产物的克隆效率，以构建大库容量的噬菌体单链抗体库。方法 用传统的直接酶切的方法处理抗体轻链，直接连到经相同酶切的表达载体构建轻链抗体库；同时制备T载体，将抗体轻链克隆于T载体建成T载体克隆文库。然后再把轻链从T载体上切下来克隆到噬粒表达载体pDAN5，构建轻链抗体库。比较两种方法的效率。结果 制备的T载体质量较好，可以满足建库所需，轻链T载体库为28×10^8，经过T载体过渡比直接酶切连接效率要高出将近1000倍。结论 T载体的应用较好的解决了PCR产物克隆困难的问题。能够用于大容量噬菌体单链抗体库的构建。
- 吕勇刚窦科峰赵爱志韩月恒刘杰陈刚陶开山吴昱彤药立波
- 关键词：噬菌体单链抗体库T载体克隆PCR酶切法
- 大容量人乳腺癌单链抗体库的构建与初步鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的利用细胞内重组技术构建大容量人乳腺癌单链抗体(scFv)库。方法收集30例乳腺癌外周转移淋巴结,依次提取总RNA、mRNA,RT-PCR扩增全套可变区基因(VL、VH),各自克隆到T载体,构建T载体库。然后从T载体上酶切VL、VH分步克隆到噬粒载体pDAN5,经电转化TG1得到初级库。辅助性噬菌体感染初级库,使噬菌体抗体表面呈现。提纯噬菌体抗体,滴定浓度后感染大肠杆菌BS1365进行细胞内重组。噬菌体挽救后再次提纯滴定噬菌体,感染大肠杆菌DH5αF',得到次级库,并测序验证。结果VH、VLT载体库分别为3.5×108和1.7×108,初级库库容量2.5×109。次级库库容量为2.5×1011。结论所采用的引物能够高效扩增目的片段,T载体的应用能够提高抗体基因的克隆效率,细胞内重组将进一步扩大库容量及增加其多样性,这种基于RT-PCR、T载体过渡、细胞内重组的路线能够构建大容量抗体库。
- 吕勇刚窦科峰吴昱彤赵爱志陶开山韩月恒杨雁灵刘杰陈刚药立波
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体乳腺癌
