唐先业
- 作品数：3 被引量：11H指数：1
- 供职机构：第二军医大学长征医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TGF-β3和BMP-7腺病毒共转染兔骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化的研究被引量：9
- 2014年
- 目的 :探讨利用转基因技术构建的转化生长因子β3(transforming growth factor beta 3,TGF-β3)和骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)重组腺病毒转染兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchyme stem cells,BMSCs),诱导其向类髓核细胞分化的可行性。方法 :将培养获得的BMSCs分成5组,A:空白对照组,B:免疫荧光对照组,C:TGF-β3单独转染组,D:BMP-7单独转染组,E:TGF-β3+BMP-7共转染组。利用转基因技术构建的TGF-β3和BMP-7重组腺病毒对BMSCs进行转染,荧光显微镜观察其转染效率,培养14d后,再以Western-Blot方法检测A、C、D、E组细胞TGF-β3和BMP-7蛋白分泌情况,以Realtime PCR方法检测各组蛋白聚糖(ACAN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、Ⅹ型胶原(CollagenⅩ)、SOX9基因表达水平,明确腺病毒转染后兔骨髓间充质干细胞的分化情况。结果:以TGF-β3和BMP-7重组腺病毒转染兔BMSCs后常规DMEM培养基培养14d,细胞形态出现明显变化,圆形及椭圆形细胞明显增多。Western blot方法检测,共转染组TGF-β3和BMP-7蛋白表达水平明显增高。培养14d时,Realtime PCR检测ACAN、CollagenⅠ、CollagenⅡ、SOX9基因的表达水平转染组(C、D、E组)较对照组(A、B组)明显升高(P<0.05),其中CollagenⅠ和SOX9表达单独转染组(C、D组)与共转染组(E组)比较差异无显著性(P>0.05),CollagenⅡ表达共转染组较单独转染组明显增高(P<0.05)。TGF-β3单独转染组和共转染组的CollagenⅩ基因表达较BMP-7单独转染组和对照组明显降低(P<0.05)。结论:转基因技术重组TGF-β3和BMP-7腺病毒可成功转染兔BMSCs,获得TGF-β3和BMP-7蛋白的表达。TGF-β3和BMP-7腺病毒共转染兔BMSCs后,可有效诱导兔BMSCs向类髓核细胞方向分化。
- 康健侯洋周许辉杨立利陈华江唐先业袁文
- 关键词：TGF-Β3BMP-7骨髓间充质干细胞腺病毒
- 全骨髓贴壁法获取组织工程髓核种子细胞的相关研究被引量：1
- 2014年
- 目的明确兔骨髓间充质干细胞的分化能力及分化条件,以TGF-β3和BMP-7诱导兔骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化,为组织工程髓核的构建提供良好的种子细胞。方法利用全骨髓贴壁法分离获取兔骨髓间充质干细胞,并对细胞进行培养和传代,以特定的环境及细胞诱导液进行诱导,促使其向特定的中胚层细胞分化。再将细胞分为四组,A:空白对照组,B:BMP-7诱导组,C:TGF-β3诱导组,D:TGF-β3与BMP-7共同诱导组,诱导21天后对蛋白聚糖、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原和SOX9基因进行realtime-PCR检测。结果全骨髓贴壁法分离获得的原代兔骨髓间充质干细胞生长良好,2周后显微镜下观察细胞间形态较为一致,成纺锤形。细胞传代后生长良好。细胞表面表达CD29、CD105、CD166表面标记物。在成骨诱导培养液、成软骨诱导培养液和脂肪诱导培养液的诱导下,培养21天后,通过特定染色发现兔骨髓间充质干细胞向预定方向分化生长。以TGF-β3和BMP-7生长因子诱导21天后,蛋白聚糖、Ⅱ型胶原和SOX9基因表达C组和D组明显高于A组和B组(P<0.05),X型胶原表达A组和B组明显高于C组和D组(P<0.05),Ⅰ型胶原表达四组之间无明显差异。结论全骨髓贴壁法可以成功分离获得状态良好的兔骨髓间充质干细胞,在成骨诱导培养液、成软骨诱导培养液和脂肪诱导培养液的诱导下,兔骨髓间充质干细胞可向预定的方向分化且生长良好。TGF-β3和BMP-7诱导兔骨髓间充质干细胞后可明显提高其类髓核细胞具有的下游基因表达水平。
- 康健侯洋周许辉杨立利陈华江唐先业袁文
- 关键词：诱导分化骨形态发生蛋白7
- 胸椎黄韧带骨化症外科治疗选择及并发症分析（附54例报告）被引量：1
- 2013年
- 目的探讨胸椎黄韧带骨化症的临床发病特点与治疗方法的选择及如何减少或避免并发症。方法回顾分析54例胸椎黄韧带骨化症患者的临床资料及外科治疗，分析其发病特点及影像学特征性表现与类型，观察各治疗方法的疗效。结果本组患者术后均获得随访，均超过17个月。术后6个月JOA改善率均〈50％，1年内〈70％，2年内各治疗组效果均达到优或良。结论胸椎黄韧带骨化症一旦确诊应积极手术治疗，根据临床和影像学特点选择手术方式。术后6个月内恢复最快，术后2年恢复最佳，各种术式均建议使用内固定。
- 唐先业袁文贾连顺史建刚刘刚康健侯洋
- 关键词：黄韧带骨化症胸椎外科治疗并发症
