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金黄色葡萄球菌诱导小肠上皮细胞炎性反应及凋亡作用的观察被引量：3: 2011年; 目的观察研究小肠上皮细胞Caco-2细胞对金黄色葡萄球菌感染的反应。方法采用细胞内菌落技术法推算Caco-2细胞内吞金黄色葡萄球菌的能力,采用Realtime-PCR法检测Caco-2细胞NOD2基因在金黄色葡萄球菌感染时的表达情况,采用ELISA、流式细胞术等方法观察Caco-2细胞在金黄色葡萄球菌感染时细胞因子分泌水平,核转录因子(nuclear factorκB,NF-κB)活化水平和细胞凋亡发生率。结果 Caco-2细胞能够内吞金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌感染可引起Caco-2细胞内NOD2表达增高,NF-κB活化水平增高,分泌细胞因子水平升高,Caco-2细胞发生凋亡,且凋亡率随感染后时间延长增高。结论金黄色葡萄球菌能够激活Caco-2细胞的免疫反应,细胞内模式识别受体NOD2在识别细胞内细菌、信号传导、核转录因子激活中发挥关键作用。; 谢旭华王丽丽龚凤云夏超宋莹申爱霞宋建新; 关键词：金黄色葡萄球菌 CACO-2细胞核转录因子

姜黄素联合吉西他滨对胰腺癌细胞体外增殖、凋亡及肿瘤干细胞表型特征的影响被引量：13: 2015年; 目的研究联合使用姜黄素及吉西他滨对胰腺癌细胞增殖、凋亡及肿瘤干细胞表型特征的影响,初步评价姜黄素治疗胰腺癌的临床应用前景。方法采用恶性程度、分化程度不同的胰腺癌细胞系panc03.27、Capan-2及PANC-1细胞,分为DMSO处理组、单纯吉西他滨处理组、单纯姜黄素处理组以及吉西他滨联合姜黄素处理组,采用CCK8(Cell Counting Kit-8)试剂盒测定细胞增殖力的改变;同时采用FITC Annexin V凋亡检测试剂盒分析不同处理组之间细胞凋亡率的差异,利用Western blot检测胰腺癌干性基因Notch1及Oct4的表达改变。结果 Panc03.27细胞中与单纯使用吉西他滨比较,联合使用姜黄素组细胞活力由(46.70±3.49)%下降为(35.53±1.84)%(P=0.047),细胞凋亡率由(5.01±0.75)%上升至(13.11±0.89)%(P<0.01),Notch1及Oct4表达明显下调(均P<0.01);Capan-2细胞中与单纯使用吉西他滨比较,联合使用姜黄素组细胞活力由(47.13±2.39)%下降至(5.36±0.25)%(P<0.01),细胞凋亡率由(13.02±1.79)%上升至(20.11±1.11)%(P<0.01),而Notch1及Oct4表达未见明显差异;PANC-1细胞中与单纯使用吉西他滨比联合使用姜黄素组细胞活力由(82.59±5.69)%下降至(7.33±0.25)%(P<0.01),细胞凋亡率由(6.77±2.03)%上升至(25.08±3.14)%(P<0.01),Notch1及Oct4表达明显下调(P<0.05)。结论姜黄素可协同吉西他滨抑制胰腺癌细胞的增殖、诱导细胞的凋亡及抑制肿瘤干细胞表型特征。; 许琮夏超李德民常莹赵秋; 关键词：胰腺癌姜黄素吉西他滨

阿奇霉素对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵及耐药性的影响被引量：10: 2012年; 目的探讨阿奇霉素对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵的影响,为指导临床合理选择抗生素提供依据。方法排泵抑制剂(苯丙氨酸-精氨酸-β-萘酰胺PAβN)干预铜绿假单胞菌后,采用微量肉汤稀释法测定常见药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值的变化,筛选主动外排表型阳性菌株。PCR扩增主动外排表型阳性菌株oprM、mexB和mexR;real-time PCR检测主动外排表型阳性菌株mexB的mRNA水平;对主动外排表型阳性菌株进行mexR基因测序分析。在阿奇霉素作用下,观察铜绿假单胞菌的mexB基因表达及对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星和美罗培南的MIC值变化。结果从20个临床多重耐药的铜绿假单胞菌菌株中筛选出8株主动外排表型阳性菌。检测表明这8株菌oprM、mexB和mexR均呈阳性,mexB的mRNA水平均较PAO1显著增高。对8株MexAB-OprM高表达菌mexR基因进行测序,发现菌株PAO03的mexR基因存在突变。阿奇霉素可显著降低mexR基因未突变MexAB-OprM高表达菌株的mexB基因的表达和对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星和美罗培南的MIC值,而对菌株PAO03和nalB突变株(mexR基因突变MexAB-OprM高表达菌株)无显著影响。结论阿奇霉素可抑制铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵的表达,提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性。; 夏超谢旭华王丽丽龚凤云宋莹宋建新; 关键词：铜绿假单胞菌外排泵抑制剂阿奇霉素 MEXAB-OPRM

NOD2在巨噬细胞对金黄葡萄球菌的炎性反应中的作用研究被引量：4: 2011年; 目的通过观察对比巨噬细胞NOD2基因沉默前后对金黄葡萄球菌感染的免疫应答,了解NOD2基因在金黄葡萄球菌感染巨噬细胞过程中所起的作用.方法采用real-time RT-PCR的方法检测巨噬细胞NOD2基因在金黄葡萄球菌感染时的表达情况,合成针对NOD2的siRNA并干扰巨噬细胞.采用ELISA、流式细胞术等方法观察NOD2基因沉默对其在金黄葡萄球菌感染时的吞噬能力、细胞因子分泌水平、核转录因子（NF-κB）活化水平、细胞凋亡的影响.结果金黄葡萄球菌感染巨噬细胞可引起细胞内NOD2表达增高.巨噬细胞NOD2基因沉默可导致其吞噬金黄葡萄球菌的能力降低,分泌细胞因子水平降低,NF-κB激活不足.金黄葡萄球菌可以引起巨噬细胞发生凋亡,凋亡率随时间延长而升高.结论在金黄葡萄球菌感染巨噬细胞的过程中,位于细胞内的模式识别受体NOD2在病原体识别、信号转导、NF-κB激活中发挥关键作用.; 谢旭华王丽丽龚风云夏超宋莹宋建新; 关键词：金黄葡萄球菌巨噬细胞核转录因子

pvdQ基因对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响被引量：2: 2011年; 目的观察pvdQ(PA2385)基因对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响。方法构建pvdQ基因表达质粒pME6032-pvdQ,鉴定后,采用电穿孔法将其转入PAO1野生株中,构建pvdQ高表达株。同时将空质粒pME6032采用电穿孔法转入PAO1野生株中,构建pME6032空质粒株,采用Real-time PCR检测各株pvdQ mRNA的表达。采用结晶紫染色法,观察PAO1野生株、pvdQ高表达株和pvdQ突变株培养24、48和72 h时生物膜的生长情况。结果 Real-time PCR证实成功构建pvdQ高表达株。结晶紫染色的结果显示:培养24h时PAO1野生株、pvdQ高表达株和pvdQ突变株形成的生物膜厚度差异无统计学意义(P>0.05);培养48 h和72h时与PAO1野生株比较,pvdQ高表达株生物膜明显变薄(P<0.05),pvdQ突变株生物膜明显增厚(P<0.05)。结论铜绿假单胞菌PAO1野生株、pvdQ突变株和pvdQ高表达株体外形成生物膜的能力有显著性差异,pvdQ基因可能影响铜绿假单胞菌体外形成生物膜的能力。; 王丽丽龚凤云谢旭华夏超陈佳宋莹申爱霞邢铭友许东宋建新; 关键词：铜绿假单胞菌群体感应系统生物膜

盐霉素对胰腺癌细胞体外增殖及迁移能力的影响被引量：1: 2015年; 目的:观察盐霉素对胰腺癌C a p a n-2及PA N C-1细胞增殖及迁徙能力的影响,探讨其抑制细胞迁移能力的可能作用机制.方法:以1、2、4、8、10、20、40、60、80?m o l/L不同浓度的盐霉素处理C a p a n-2及PA N C-1细胞24 h后,利用C C K8检测细胞增殖并得出半数抑制率的药物浓度(50%inhibitory concentration of a substance,I C50).利用Tr a n s w e l l实验检测细胞迁移能力的改变,进一步分别利用Western blot及Real-time PCR检测上皮间质转化(epithelialm e s e n c h y m a l t r a n s i t i o n,E M T)关键分子E-cadherin及Vimentin的表达变化.结果:盐霉素呈浓度依赖性抑制Capan-2及PA N C-1细胞的增殖,其I C50分别为20及10?mol/L.Transwell细胞迁移实验发现盐霉素可明显抑制细胞的迁移能力(P值均<0.05),Western blot实验发现E-cadherin表达上调而Vimentin表达下调,进而Real-time PCR检测后发现Capan-2细胞在DMSO对照组作用及盐霉素处理后E-cadherin基因m RNA的相对表达量分别为1.2140±0.0988 vs 3.7920±0.0733,而Vimentin基因m RNA的相对表达量分别为0.9998±0.0332 vs 0.2756±0.1250;PANC-1细胞在DMSO对照组作用及盐霉素处理后E-cadherin基因m RNA的相对表达量分别为0.1210±0.1130 vs 0.5790±0.2230而Vi m e n t i n基因的m R N A相对表达量分别为3.9820±0.2670 vs 1.6920±0.0130,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论:盐霉素可以抑制胰腺癌细胞体外增殖及迁徙能力,可能通过抑制EMT发生过程抑制细胞的转移能力.; 许琮夏超张淑娟覃华李德民赵秋; 关键词：胰腺肿瘤盐霉素细胞增殖细胞迁徙

siHybrids技术沉默铜绿假单胞菌外排泵mexB基因体外效应的初步研究被引量：1: 2011年; 目的初步研究siHybrids技术对铜绿假单胞菌野生菌PA01外排泵mexB基因体外沉默效应。方法针对铜绿假单胞菌野生株PAOI外排泵mexB基因设计并合成3条特异性silly—brids分子和l条阴性对照siHybrids分子。在分子浓度为50nmol／L下，分别以合成的siHybrids分子干扰铜绿假单胞菌野生菌PA01，并设实验组为铜绿假单胞菌野生菌PA01空白对照组，阴性对照组scamble（SC）-001，干预组siHybrids（si）-001、siHybrids（si）-002及siHybrids（si）-003，分别在干预12h及24h后采用real．timePCR法检测各实验组中靶基因mexB基因mRNA的表达水平。进一步采用Mueller-Hinton倍比稀释法检测50nmol／L浓度下，siHybrids分子干预铜绿假单胞菌野生菌PA01前后氯霉素（CP）、红霉素（EM）、左氧氟沙星（L-OFLX）、头孢他啶（CAZ）、美洛培南（MER）的最小抑菌浓度（Mm）值。结果不同siHybrids分子干预PA0112h后，mexB基因mRNA表达量无明显差异性；但干预24h后，mexB基因mRNA表达量：干预组（si-001，si-002，si-003）比空白对照组、阴性对照组（sc-001）有明显下降。对比干预12h、24h后mexB基因mRNA表达量，可以发现空白对照组、阴性对照组（sc-001）mRNA的表达量成上升趋势，而干预组（si-001，si-002，si-003）mexB基因mRNA表达量均呈下降趋势。siHybrids分子在干预铜绿假单胞菌野生菌24h前后的氯霉素（CP）、红霉素（EM）、左氧氟沙星（L—OFLX）、头孢他啶（CAZ）、美洛培南（MER）MIC无明显差异性。结论在mRNA表达水平上，siHybrids分子能体外干预铜绿假单胞菌PA01mexB基因mRNA表达，此种沉默作用呈现时间依赖性，且在24h能有效地发挥干预作用。; 毛艳陈佳许东邢铭友王丽丽谢旭华龚凤云夏超申爱霞宋莹占伟丽宋建新; 关键词：RNAI 铜绿假单胞菌外排泵 REAL-TIME

观察铜绿假单胞菌pvdQ基因对群集游动中抗生素抗性的影响被引量：2: 2011年; 目的探讨铜绿假单胞菌pvdQ（PA2385）基因在群集游动中对几种常用抗生素抗性的影响.方法构建pvdQ基因表达质粒pME6032-pvdQ并鉴定,采用电穿孔法将带有pvdQ基因的质粒转入PAO1中,构建pvdQ高表达株.同时将空质粒pME6032采用电穿孔法转入PAO1中,构建pME6032空质粒株.在不同浓度抗生素中,通过比较群集游动直径的大小,观察PAO1和pvdQ高表达株对抗生素抗性的改变.结果经鉴定成功构建pvdQ高表达株,比较两株菌群集游动直径大小：抗生素浓度成倍增加,但群集游动直径不是成倍下降而是成不规则增加,说明PAO1和pvdQ高表达株均能提高抗生素抗性 pvdQ高表达株对头孢他啶、环丙沙星、美罗培南和多黏菌素B几种抗生素与PAO1相比抗性提高了2～4倍.结论铜绿假单胞菌pvdQ高表达株能够提高抗生素的抗性,说明pvdQ基因在此过程中发挥重要作用,可能通过参与群集细胞的分化来提高抗生素的抗性.; 王丽丽龚凤云谢旭华陈佳宋莹夏超申爱霞邢铭友许东宋建新; 关键词：铜绿假单胞菌抗生素耐药

应用siRNA干扰技术沉默铜绿假单胞菌外排泵基因mexB的蛋白表达: 2011年; 目的观察siRNA干扰质粒转入铜绿假单胞菌后,MexB蛋白表达量的变化.方法针对mexB基因设计合成特异性siRNA分子,与pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建pGPU6/GFP/NeosiRNA重组质粒.构建重组表达质粒pET22b＋/mexB,并转化大肠杆菌BL21（ DE3） plysS,诱导表达MexB蛋白,蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体.siRNA质粒分别电转化铜绿假单胞菌野生株、临床耐药株及mexB基因高表达株,运用Western blot观察转化8、12、24h后MexB蛋白表达量的变化.结果成功构建pGPU6/GFP/Neo-siRNA重组质粒.成功表达铜绿假单胞菌外排泵蛋白MexB,并制备多克隆兔抗.siRNA质粒对铜绿假单胞菌野生株、临床耐药株及mexB基因高表达株的mexB基因均具有良好的沉默效果,而且沉默效果存在时间差异性.结论 siRNA质粒转化3株铜绿假单胞菌后,在8h及12 h时均可观察到MexB蛋白表达量明显减少,而在24 h时MexB蛋白表达量无改变.; 宋莹邢铭友许东龚风云夏超王丽丽谢旭华申爱霞占伟丽宋建新; 关键词：SIRNA WESTERN BLOT 铜绿假单胞菌

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夏超

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