孙亮
- 作品数：9 被引量：30H指数：4
- 供职机构：锦州市中心医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金中国博士后科学基金辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 改良法体外培养大鼠成肌细胞的实验研究被引量：12
- 2007年
- 目的：探索一种新型体外分离培养新生大鼠骨骼肌成肌细胞的途径。方法：取新生Wistar大鼠的四肢骨骼肌适量。采用混合酶一步消化分离获取成肌细胞，将差速贴壁法和胰酶消化法相结合进行纯化，观察分离纯化成肌细胞的形态学特点、生长状况，绘制细胞生长曲线，利用扫描电镜观察成肌细胞表面结构并进行结蛋白免疫细胞化学特异性鉴定。结果：采用改良方法分离成肌细胞产量高、耗时短；在培养过程中双重纯化获取的细胞生长状态良好，接种后3～5d增殖达高峰；在扫描电镜下可观察到成肌细胞膜表面有微绒毛突起；体外培养的成肌细胞中94％的细胞胞质呈结蛋白抗体染色强阳性。结论：改良方法分离纯化大鼠骨骼肌成肌细胞效果理想，是成肌细胞体外培养的有效途径之一。
- 张力范明王伟陈晓萍刘淑红孙亮
- 关键词：成肌细胞体外培养分离纯化改良法
- 睫状神经营养因子和丹参注射液体外诱导肌源性干细胞向神经元样细胞的分化被引量：4
- 2009年
- 背景:在干细胞异体移植时神经细胞的低存活率成为异体细胞移植失败的主要诱因。核因子κB是细胞信号传导的主要转录因子之一,参与细胞的增殖和分化过程。目的:观察睫状神经营养因子和丹参注射液联合诱导肌源性干细胞向神经元样细胞的分化情况,以及分化过程中核因子κB的表达。设计、时间及地点:细胞学基因水平实验,于2008-03/05在辽宁医学院附属第二医院口腔科学实验室完成。材料:新生7d龄SD乳鼠10只,由辽宁医学院实验动物中心提供。睫状神经营养因子为Sigma公司产品,丹参注射液购自正大青春宝药业有限公司。方法:体外分离培养鼠肌源性干细胞,差速贴壁法和酶消化法纯化后接种于6孔板内,诱导组用含睫状神经营养因子的DMEM预诱导24h,更换培养液,洗涤3次,再加入含丹参注射液的无血清DMEM诱导5h;对照组使用无血清DMEM培养基处理。主要观察指标:RT-PCR及Western blotting法检测神经丝蛋白、核因子κB抑制蛋白的表达。结果:诱导前肌源性干细胞未见神经丝蛋白表达,诱导后的神经元样细胞神经丝蛋白呈阳性表达。凝胶电泳及Western blot检测结果显示,与诱导前比较,诱导后对照组核因子κB抑制蛋白的表达无明显变化,诱导组核因子κB抑制蛋白的表达明显下降。结论:睫状神经营养因子和丹参注射液可联合诱导肌源性干细胞分化为神经元样细胞,分化过程中核因子κB的活化被抑制。
- 曾祥一王伟孙亮张力曾令达
- 关键词：肌源性干细胞神经元睫状神经营养因子丹参注射液核因子ΚB
- 蛋壳技术在胸腰椎爆裂骨折手术治疗中应用的临床研究被引量：5
- 2009年
- 目的:探讨"蛋壳技术"在腰胸椎爆裂骨折后路手术治疗中的应用及疗效。方法:对近10年来所治疗的21例病人的临床资料及治疗结果进行回顾性分析。结果:21例病人中13例在骨折复位内固定后常规行传统横突根部植骨融合,术后2～3年平均1.8年取出内固定。随诊3～10年平均6年,复查X光平片,其中6例病人在内固定物取出后3～12个月平均7个月,骨折椎体高度出现不同程度丢失,同时伴有相应阶段的后突畸形,出现长期腰背部疼痛。另外8例病人在进行传统横突根部植骨融合后应用"蛋壳技术"进行骨折椎体内植骨,愈后取出内固定,随诊3～10年,复查X光平片,骨折椎体高度无丢失,无后凸畸形出现。结论:在胸腰椎爆裂骨折后路手术治疗中,应用"蛋壳技术"进行骨折椎体内植骨弥补了传统的横突根部植骨的不足,解决了后路手术无法解决的椎体植骨问题,避免了愈后并发症的出现。
- 曾祥一刘元禄王伟孙亮张力
- 关键词：蛋壳技术胸腰椎爆裂骨折椎体高度后突畸形
- 体外诱导大鼠成肌细胞转化为成骨前体细胞的实验研究被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨大鼠成肌细胞体外能否转化为成骨前体细胞。方法:从新生大鼠骨骼肌分离单细胞,体外培养,运用差速贴壁法和(或)酶消化法纯化细胞,培养至第3代时,加入含重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)的培养液进行诱导,3周后对诱导细胞进行鉴定,其指标包括:细胞形态、碱性磷酸酶染色及其活性、Ⅰ型胶原免疫组化染色和钙结节染色,实验数据采用SAS9.1.3软件包进行统计学分析。结果:成肌细胞诱导后,细胞增殖减缓,相邻细胞聚集呈层状排列,诱导7d可见胞浆有少量不透光结节,诱导2周结节增多,3周时胞浆内可见大量不透光结节,对照组成肌细胞融合成有收缩性的肌管。诱导后的成肌细胞碱性磷酸酶活性随时间延长而增强,诱导3周时碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原和钙结节染色均呈阳性表达。结论:大鼠成肌细胞在体外一定条件下诱导后能够转化为成骨前体细胞。
- 张玉强王伟范明刘淑红张力孙亮
- 关键词：成肌细胞骨形态发生蛋白质类骨诱导碱性磷酸酶
- 透明质酸凝胶在成肌细胞体外培养中的应用被引量：3
- 2007年
- 目的探讨透明质酸凝胶与成肌细胞的生物相容性,为成肌细胞组织工程研究提供新型载体。方法将体外培养的成肌细胞接种于含透明质酸凝胶的培养液中常规培养,通过倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态,描绘细胞生长曲线,并进行免疫细胞组化鉴定。结果透明质酸凝胶组与对照组成肌细胞体外培养生长曲线相似,均成desmin阳性,透明质酸凝胶组亲水性和吸附力优于对照组。扫描电镜下透明质酸呈三维框架结构,有利于成肌细胞附着。结论透明质酸凝胶是成肌细胞良好的载体材料。
- 王伟范明张力刘淑红孙亮
- 关键词：透明质酸成肌细胞体外培养
- p44/p42激酶磷酸化在丹参注射液定向诱导成肌细胞分化为神经元样细胞过程中的作用
- 2009年
- 背景:睫状神经因子通过细胞表面的受体可以使成肌细胞去分化而转变为多能性干细胞,而p44/p42激酶可以进一步激活睫状神经因子下游基因的表达,与细胞去分化密切相关。目的:观察丹参注射液诱导成肌细胞分化成神经元的细胞模型中p42/p44激酶磷酸化的情况。设计、时间及地点:细胞分子水平实验,于2008-03/06在辽宁医学院附属第二医院口腔科学实验室完成。材料:清洁级新生1周SD大鼠1只,由辽宁医学院实验动物中心提供。丹参注射液为四川三精升和制药有限公司产品,批号080717,主要成分为丹参。睫状神经营养因子为Sigma产品。方法:体外分离培养大鼠成肌细胞,传至第5代接种于6孔板内,诱导组使用50μg/L睫状神经因子预诱导72h,再更换含复方丹参注射液的无血清DMEM培养基诱导10h;对照组使用不含复方丹参注射液的无血清DMEM培养基处理。取诱导后的成肌细胞,加入p44/p42激酶抑制剂PD98059进行干预处理。主要观察指标:Western blotting法检测诱导后成肌细胞蛋白标记物MyoD,Myf5的表达,神经元蛋白标记物酪氨酸羟化酶、神经丝的表达,以及p44/p42激酶在成肌细胞蛋白标记物下调过程中的作用。结果:与未诱导的对照组比较,培养的成肌细胞经睫状神经因子预诱导、再加入丹参注射液诱导的过程中,成肌细胞蛋白标记物MyoD,Myf5的表达均明显下调;而诱导后期神经元特异蛋白标记物酪氨酸羟化酶、神经丝的表达增高。丹参诱导后成肌细胞p44/p42激酶发生磷酸化,同时MyoD和Myf5的表达量下调;在p44/p42激酶抑制剂PD98059存在情况下,p44/p42激酶磷酸化及MyoD,Myf5表达量下调均被抑制。结论:经睫状神经因子预诱导后逐渐去分化的成肌细胞,在丹参注射液的诱导下能够成功分化为表达神经元特异蛋白标记物的神经元样细胞,p44/p42激酶通过磷酸化参与了成肌细胞的再分化过程。
- 曾祥一王伟孙亮张力曾令达
- 关键词：成肌细胞丹参注射液
- 神经营养素家族与周围神经再生的研究进展被引量：5
- 2006年
- 张力王伟孙亮
- 关键词：周围神经再生神经再生修复环境因素
- 多节段颈椎间盘突出症手术治疗的临床研究
- 2009年
- 目的:探讨多节段颈椎间盘突出术式选择的基本原则和方法。方法:根据每个病人影像学改变的特点分别采用椎体次全切减压、植骨钛板内固定;后路单开门椎管扩大成形术;以及前后路联合手术等多种方法进行治疗。病人术后辅以中药治疗。经术后随访观察,对其疗效进行JOA评分总结分析。结果:采用不同的方法对36例不同类型的颈椎病进行手术治疗,经过平均2年6个月的随访,JOA评分优良率达到92%,效果显著。结论:手术方法的选择是取得颈椎病良好疗效的关键。对多节段颈椎间盘突出、椎间盘退变、后纵韧带骨化等退变性椎管狭窄引起的脊髓型颈椎病,应根据病人的影像学改变、是否为发育性椎管狭窄、是否存在椎体退行性节段不稳、椎管狭窄的范围来制定不同的治疗方案。值得注意的是对于伴有发育性椎管狭窄的病例必须结合后路椎管扩大成形减压;而存在椎体退行性节段不稳的病例则必须进行前或后路的内固定。
- 曾祥一刘元禄王伟孙亮张力
- 成体干细胞分化的影响因素被引量：4
- 2006年
- 成体干细胞(AS)分化的调控机制,多认为与微环境密切相关。其内源性调控包括干细胞内的一些结构蛋白和多肽因子调控的不对称分裂以及端粒体的长度。外源性调控主要为转化生长因子调节干细胞的增殖和分化;膜蛋白介导的细胞间相互作用,细胞膜表面分子在干细胞和周围细胞间传递信号;细胞外基质对AS细胞的调控,整合素家族介导AS细胞与细胞外基质粘附,通过激活生长因子受体,从而影响AS细胞的分布和分化方向。影响AS细胞分化的微环境,包括细胞所处的三维空间结构和相应的多维分化信号。
- 孙亮王伟
- 关键词：干细胞分化成体干细胞细胞间相互作用转化生长因子生长因子受体
