张佳
- 作品数:4 被引量:14H指数:2
- 供职机构:温州医学院检验医学院更多>>
- 发文基金:浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目浙江省公益性技术应用研究计划项目浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 甲型副伤寒杆菌pagC基因分布及其重组表达产物免疫保护作用被引量:4
- 2013年
- 目的:了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性,确定甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核重组表达产物rPagC免疫原性和保护作用。方法:采用PCR及其产物测序了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性。构建甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯表达的rPagC。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测rPagC表达情况及其产量。采用免疫扩散法、ELISA和Western Blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rPagC对甲型副伤寒杆菌感染的免疫保护效果,微量肥达试验检测rPagC免疫小鼠血清凝集伤寒和副伤寒沙门菌的效果。结果:所有被检测的甲型副伤寒沙门菌临床菌株均携带pagC基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.1%~100%和98.4%~100%。所构建的原核表达系统能高效表达rPagC。rPagC免疫家兔可产生高效价抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号。ELISA结果显示,97.1%(66/68)甲型副伤寒患者血清标本rPagC抗体阳性。100μg和200μg rPagC对感染小鼠的免疫保护率分别为73.3%(11/15)和86.7%(13/15)。rPagC免疫小鼠血清对甲型副伤寒沙门菌和伤寒沙门菌H抗原凝集效价高达1∶10~1∶40。结论:pagC基因在甲型副伤寒沙门菌株中分布广泛。rPagC有良好的免疫原性及较强的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。
- 张佳范欣丽葛玉梅严杰孙爱华
- 关键词:免疫保护性
- 结核分枝杆菌CysA2抗原的基因克隆、表达及在血清诊断中的应用
- 2013年
- 目的克隆并构建结核分枝杆菌CysA2基因原核表达系统,建立基于rCysA2的ELISA并检测rCysA2-ELISA在肺结核患者血清学诊断中的敏感性和特异性。方法采用PCR扩增CysA2基因,构建CysA2基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rCysA2表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rCysA2,免疫印迹鉴定rCysA2的免疫反应性。以rCysA2为包被抗原,建立rCysA2-ELISA并用于检测132例血清抗体,其中涂片阳性和阴性肺结核患者血清分别占96例和36例,非肺结核肺部疾病病人血清抗体30例,健康对照血清50例。结果克隆的CysA2基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rCysA2表达量为细菌总蛋白的25.4%。提纯的rCysA2在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。rCysA2-ELISA检测涂片阳性和涂片阴性的肺结核患者血清抗体检出率分别为63.5%和61.1%,50例健康对照全部阴性、30例非肺结核肺部疾病患者1例呈现阳性,此方法的灵敏度为62.9%(83/132),特异性为98.8%(79/80)。结论本研究成功地克隆并构建了结核分枝杆菌CysA2基因及其原核表达系统。以rCysA2为包被抗原的rCysA2-ELISA方法有较高的灵敏度和很好的特异性,能有效检测涂片阴性患者血清抗体,rCysA2有望成为结核病血清诊断的有效候选抗原之一。
- 吴华军张佳皱洪兴王宇军孙爱华
- 关键词:结核分枝杆菌酶联免疫吸附试验血清学检测
- 浙江省嘉兴地区健康和宫颈病变妇女人乳头瘤病毒感染情况分析被引量:9
- 2014年
- 目的 分析浙江省嘉兴地区宫颈病变及宫颈细胞学正常的妇女宫颈部位人乳头瘤病毒(HPV)感染率及基因型分布特点.方法 收集嘉兴地区4家医院经液基细胞学检查诊断为宫颈病患者426例,并选择液基细胞学检查宫颈细胞学正常的3134例同期健康体检妇女为对照,采用导流杂交法(HybriMax)对所有研究对象进行26种HPV基因型分型检测,比较有病变者与无病变者之间HPV感染率及其26种基因型的检出情况.结果 HPV DNA阳性检出率宫颈病变组(26.29%)明显高于健康体检组(11.35%)(P<0.01).HPV重叠感染率宫颈病变组(25.89%)明显高于宫颈细胞学正常的健康体检妇女(4.78%)(P<0.01).宫颈炎患者和CIN患者分别分离到的16种HPV高危型(HR-HPV) 63株(76.83%)和15种59株(83.10%) HR-HPV,CIN患者HR-HPV毒株感染率高于宫颈炎患者,但差异无统计学意义(P>0.05).宫颈炎患者HR-HPV构成比居前五位的分别是HPV16、33、58和18、52;CIN患者HR-HPV构成比居前五位的分别是HPV16、52和33、58、68.结论 本地区宫颈病变妇女宫颈部位HPV感染率及重叠感染情况明显高于宫颈细胞学正常的妇女,重叠感染与宫颈疾病发生相关,HPV-16、58、33和52是本地区宫颈病变妇女主要感染的高危型HPV.
- 俞春松江敏敏刘小香孙颜红孙爱华蒋锦琴张佳
- 关键词:乳头状瘤病毒宫颈疾病宫颈炎宫颈上皮内瘤样病变
- 甲型副伤寒杆菌外膜蛋白X基因分布及其重组表达产物免疫保护作用的研究被引量:1
- 2013年
- 目的了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株外膜蛋白(ompX)基因分布、序列保守性及其产物免疫原性和免疫保护性。方法采用PCR扩增甲型副伤寒沙门菌临床菌株ompX基因。利用大肠埃希菌表达系统表达rOmpX,产物采用Ni-NTA亲和层析法提纯。采用免疫扩散法、ELISA和Westemblot鉴定rOmpX抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rOmpX对甲型副伤寒沙门菌感染的免疫保护作用,微量肥达试验检测rOmpX免疫小鼠血清抗体凝集伤寒和副伤寒沙门菌效价。结果所有甲型副伤寒沙门菌临床菌株均有ompX基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.2%~100.0%和98.4%。100.0%。rOmpX免疫家兔可产生高效价抗体,利用该抗体与甲型副伤寒患者血清标本进行ELISA试验,95.6%(65/68)的标本呈阳性。100μg和200ggrOmpX对感染小鼠的免疫保护率分别为93.3%(14/15)和100.O%(15/15)。rOmpX免疫小鼠血清对甲型副伤寒和伤寒沙门菌H抗原凝集效价为1:10~1:40。结论ompX基因重组表达产物可作为甲型副伤寒沙门菌基因工程疫苗候选抗原。
- 李明雷方海俊范兴丽张佳严杰孙爱华
- 关键词:甲型副伤寒杆菌免疫原性