张南 作品数:13 被引量:14 H指数:4 供职机构: 第二军医大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 “九五”国家科技攻关计划 上海市基础研究重大(重点)项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
胰十二指肠同源盒基因-1逆转录病毒表达载体的构建及其在肝干细胞中的稳定表达 2006年 目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR方法克隆PDX-1基因全长,将其构建到pMSCVpuro逆转录病毒载体中获得pMSCV PDX-1 puro载体。将该载体导入Phoenix包装细胞系,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67细胞系。结果:成功构建了pMSCV PDX-1 puro载体,并转染PT67细胞。利用PT67细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝干细胞LEPCs,获得稳定表达PDX-1基因的LEPCs(LEPCs PDX-1)。结论:PDX-1逆转录病毒表达载体的成功构建和稳定表达PDX-1的肝干细胞系的获得为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化奠定了基础。 金彩霞 李文林 朱吉 田棣 张南 胡以平关键词:逆转录病毒科 干细胞 HBV转基因在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU3小鼠基因组中的整合分析 被引量:4 2005年 目的:分析HBV转基因在乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系基因组中的整合特征.方法:以F6~F17代乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、Southern印迹和DNA测序的方法,分析HBV转基因在该品系转基因小鼠基因组中的整合特征.结果:PCR分析显示,F6~F17代乙肝转基因小鼠基因组中均已稳定整合了相同拷贝数的HBV转基因,整合的HBV DNA可通过生殖系在世代间稳定遗传.整合在转基因小鼠基因组中的HBV DNA含有HBVpres、s、c、x基因,Southern印迹证实HBV转基因含有全长HBV基因组DNA,DNA测序结果表明,该品系转基因小鼠所整合的转基因为adr亚型的HBV DNA.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠基因组中均整合有adr亚型的全长HBV基因组DNA,从DNA水平证实该转基因小鼠品系已具备了乙肝实验动物模型的基本条件. 訾晓渊 张南 巴月 张树忠 姚玉成 熊俊 李建秀 王新民 胡以平关键词:病毒 乙型肝炎 转基因 HBV病毒蛋白在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU小鼠中的表达 被引量:4 2005年 目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和组织中病毒蛋白的表达及其特征.方法:以138只F6~F17代C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系的转基因小鼠为研究对象,采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法分析病毒蛋白在转基因小鼠中的表达.结果:转基因小鼠血清中HBsAg和HBeAg的阳性率分别为55.18%和25.00%,血清中HBsAg的出现时间多在3个月龄之前(占93.33%),且持续时间在9个月以上(占95.56%),个体之间具有一定差异.转基因小鼠肝组织中至少可检测到一种病毒蛋白,HBsAg、HBcAg和X蛋白的检出率分别为85.82%、58.24%和49.61%.HBsAg分布于肝细胞质中,HBcAg和X蛋白既可分布于肝细胞核中,也可分布干肝细胞质中.HBsAg的表达具有细胞特异性(门管区周围的肝细胞)和组织特异性(肝和肾),X蛋白除在肝脏和肾脏中表达外,还可在脑组织中表达.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和肝肾等组织中有病毒蛋白的表达,病毒蛋白的分布具有组织细胞特异性和个体差异. 訾晓渊 巴月 熊俊 张树忠 姚玉成 张南 李建秀 王新民 马凤云 叶煦亭 丛文铭 胡以平关键词:肝炎病毒 乙型 小鼠 病毒蛋白质类 C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达模式分析 2005年 目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠的月龄、性别和遗传背景与其血清和肝组织中HBsAg表达模式的关系.方法:采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法检测转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达,统计学方法分析转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达与小鼠的月龄、性别、遗传背景的相关性.结果:转基因小鼠在出生后1~3个月时,血清中HBsAg的表达较低或甚至不表达,8个月龄左右时最高,此后逐渐降低,但肝组织中HBsAg的表达相对稳定在较高水平,能真实反映转基因小鼠中HBsAg的表达.雄性小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达量高于雌性小鼠(P<0.05).转基因小鼠与C57BL/6品系、DAB品系和129s品系正常小鼠交配后的子代,其血清和肝组织中HBsAg表达量均未发生变化.血清阳性的小鼠中肝组织HBsAg阳性率为94.05%,两者呈正相关关系(r=0.257,P<0.01).结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达具有发育调节和性别差异. 訾晓渊 熊俊 张南 张树忠 巴月 姚玉成 李建秀 王新民 马凤云 胡以平关键词:小鼠 转基因 HBSAG C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU转基因小鼠肝脏的组织病理学观察 被引量:4 2005年 目的:研究乙型肝炎转基因小鼠品系C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU肝脏的组织学及免疫病理学特征。方法:以168只SPF级乙肝转基因小鼠及15只正常C57BL/6小鼠为研究对象,取肝组织连续切片,常规H E染色,并选取20 例有明显单个核细胞肝内浸润的肝标本,免疫组化原位鉴定白细胞分化抗原的肝内分布。结果:37.5%的转基因小鼠肝脏出现人慢性轻度乙型肝炎样的病理改变,病变率随月龄增大显著增高;32.7%有更轻微的非特异性炎症反应;肝内浸润的单个核细胞多数为CD3+、CD4+细胞,未发现CD57+、CD8+细胞浸润。结论:乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU肝脏可出现不同程度的病理改变,与人慢性轻度乙肝组织学相类似。 徐军 訾晓渊 余宏宇 何金 刘惠敏 姚玉成 李建秀 张南 巴月 胡以平关键词:乙型 小鼠 转基因 病理学 HBV preS2-S DNA免疫诱导小鼠体液免疫应答 2005年 目的:构建HBV表面抗原preS2 S 基因表达质粒,并探讨其在小鼠体内的表达及诱导体液免疫应答的能力。方法:采用PCR方法,以PBR322 HBV2.0(adr亚型)质粒DNA为模板获得HBV preS2 S 基因,并将其重组进入pcDNA3.0表达载体中,转染7721细胞系进行稳定表达;以此重组质粒免疫小鼠,ELISA方法检测免疫小鼠抗HBs抗体浓度。结果:构建了HBV preS2 S 基因的表达质粒pcDNAS2 S,该表达质粒可在7721 细胞中稳定高效表达;免疫接种小鼠2 周后抗HBs抗体浓度明显升高,接种后第4周布比卡因处理组小鼠抗HBs抗体的浓度达到峰值161.4 mIU/ml,布比卡因非处理组第5周抗HBs抗体的浓度可达133.7 mIU/ml。结论:所构建的pcDNAS2 S表达质粒能有效表达并诱导小鼠体液免疫应答。 巴月 訾晓渊 张南 熊俊 张树忠 李文林 李建秀 吴逸明 胡以平关键词:肝炎病毒 乙型 抗体生成 乙肝病毒X蛋白诱导HeLa细胞和转基因小鼠肝细胞凋亡的研究 被引量:4 2007年 背景与目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白在细胞凋亡中的作用。材料与方法:采用基因重组技术构建乙型肝炎病毒x基因的真核表达载体pcDNA3-HBx。脂质体FuGE NE6转染HeLa细胞,并用蛋白印迹检测pcDNA3-HBx在HeLa细胞中的表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:成功构建了可在真核细胞中稳定表达X蛋白的HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。稳定转染pcDNA3-HBx DNA的HeLa-Xs细胞的凋亡率为9.8%,较空白HeLa细胞的凋亡率(0.4%)以及对照细胞HeLa-Vs细胞的凋亡率(1.3%)高;两只转基因小鼠肝细胞的细胞凋亡率分别为54.4%和40.4%,较正常小鼠肝细胞的细胞凋亡率(6.8%)明显增高。结论:X蛋白可在体外和体内诱导细胞凋亡。 张南 訾晓渊 熊俊 姚玉成 李文林 巴月 朱海英 李建秀 王新民 胡以平关键词:乙型肝炎病毒 X蛋白 转基因小鼠 乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠病毒蛋白表达模式的研究 本课题通过对我们实验室建立的全基因组乙肝转基因小鼠C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU“3号”品系在不同发育阶段的病毒转录水平、病毒蛋白表达水平、肝脏病理学变化和体液免疫对肝细胞损伤作用的研究,得出以下结论:该品... 张南关键词:乙型肝炎病毒 转基因技术 蛋白表达 病理学 文献传递 胰十二指肠同源盒基因-1启动子在肝干细胞分化研究中的应用 2006年 背景与目的利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。材料与方法通过PCR从小鼠基因组中克隆胰十二指肠同源盒基因-1(Pancreaticduodenalhomeobox-1,PDX-1)启动子片段,构建PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体(pPDX-1EGFP),并利用报告载体标记的肝原始细胞系(Liverepithelialprogenitorcells,LEPCs)观察肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。结果获得PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体及报告载体标记的LEPCs。结论pPDX-1EGFP报告载体的成功构建为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化提供了简捷的分子工具。 金彩霞 李文林 朱吉 张南 田棣 胡以平关键词:肝干细胞 转分化 绿色荧光蛋白 Hes1基因诱导小鼠肝原始细胞分化为胆管上皮细胞(英文) 被引量:1 2008年 背景与目的:采用体外获得性表达外源发状分裂相关增强子-1(hairy and enhancer of split1,Hes1)基因的方法,探讨Hes1在肝干细胞分化以及胆管上皮细胞发育中的作用。材料与方法:通过PCR方法从小鼠基因组中克隆Hes1基因片段,构建表达载体pEGFP-C1-Hes1和pcDNA3.1-Hes1,将2种表达载体分别转染肝原始细胞系(LEPCs),应用RT_PCR和Real-timePCR技术检测胆管细胞分子标志物CK19、GGT,胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β,肝细胞分子标志物GS、BGP和肝卵圆细胞的分子标志物Thy-1的表达,并在荧光显微镜下观察EGFP标记的LEPCs细胞系荧光强度的变化。结果:成功构建表达载体pEGFP-C1-Hes1和pcDNA3.1-Hes1。RT-PCR和Real_timePCR检测均表明胆管细胞分子标志CK19、GGT表达量上调;胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β表达上调;肝细胞分子标志GS、BGP表达量下调;卵圆细胞的分子标志Thy-1表达量下调;LEPCs细胞系绿色荧光增强。结论:初步证明小鼠肝原始细胞经Hes1的表达诱导后可向胆管上皮细胞方向分化,推测Hes1为胆管上皮细胞分化的转录调控因子。 田棣 李文林 攸璞 金彩霞 朱吉 张南 胡以平关键词:HES1 分化 胆管上皮细胞