朱前明 作品数:12 被引量:10 H指数:2 供职机构: 江苏省农业科学院 更多>> 发文基金: 江苏省农业科技自主创新基金 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 自动化与计算机技术 更多>>
猪卵母细胞体外发育系统的优化及转基因体细胞核移植系统的建立 被引量:1 2012年 为改善猪卵母细胞体外发育系统,依次对卵母细胞体外成熟期激素处理、成熟后胚胎激活方式、激活后胚胎培养液选取进行优化,并将优化后系统应用于转基因体细胞核移植。结果显示,优化后的系统为:成熟前24.0 h添加10.0 IU/ml孕马血清促性腺激素(PMSG)和10.0 IU/ml人绒毛膜促性腺激素(hCG),激活方式为电脉冲(1.2 kV/cm,30μs)联合细胞松弛素B处理(5μg/ml,3.0 h),胚胎培养液为PZM3。在此系统下,卵母细胞成熟率达80.9%,卵裂率达92.8%,囊胚率达53.7%,将此系统应用于转EGFP基因胎儿成纤维细胞核移植,囊胚率达18.3%。以上结果表明,此系统可用于猪卵母细胞体外发育及转基因体细胞核移植。 王慧利 孟春花 张庆晓 李静心 苏磊 贺强 朱前明 曹少先关键词:卵母细胞 体外发育 体细胞核移植 猪APOBEC3F基因外显子8单核苷酸多态性与PRRSV易感性的关联性分析 为研究猪载脂蛋白B mRNA 编辑酶催化多肽3F(APOBEC3F)基因多态性及其对猪PRRSV易感性的影响,本文对猪APOBEC3F基因外显子3、4、8和内含子3序列进行扩增和测序,筛选多态性位点,分析其与PRRSV易... 朱前明 孟春花 茆达干 王慧利 李静心 王婧 王亚磊 曹少先关键词:PCR-RFLP PRRSV 易感性 猪APOBEC3F基因真核表达载体的构建及其在MARC145细胞中的表达定位 被引量:2 2015年 载脂蛋白B m RNA编辑酶催化多肽3F(APOBEC3F)属固有免疫系统中的重要成员,对人免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)等多种病毒的复制具有广泛的抑制作用。为构建APOBEC3F基因的真核表达载体,并检测其在体外培养的MARC145细胞中的表达情况,通过RT-PCR从猪脾脏组织扩增APOBEC3F基因,定向克隆到表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体p EGFP-CMV中,构建p EGFP-APOBEC3F。PCR扩增及测序显示,APOBEC3F插入载体位置、方向及序列均正确。p EGFP-APOBEC3F经脂质体介导法转染MARC145细胞,转染后24 h APOBEC3F m RNA的水平升至最高。细胞免疫化学法检测发现APOBEC3F蛋白主要在MARC145细胞质中表达。研究结果为体外研究猪APOBEC3F基因在抗猪蓝耳病中的作用奠定了基础。 孟春花 王春玲 李静心 李隐侠 朱前明 曹少先关键词:真核表达载体 转染 荧光定量PCR 脂质体 基于猪肺泡巨噬细胞的PRRSV抗性模型的建立 本文旨在探索高致病性PRRSV-NJGC株在原代PAM中的增殖规律及其对蓝耳病受体Sn、细胞因子、Toll样受体3(TLR3)表达的影响,建立PRRS的体外抗性模型。 孟春花 苏磊 贺强 朱前明 李静心 曹少先 刘铁铮关键词:猪繁殖与呼吸综合征 免疫反应 靶细胞 猪APOBEC3F基因外显子8单核苷酸的多态性及其与猪繁殖和呼吸综合征病毒易感性的关联性 被引量:1 2014年 为了研究猪载脂蛋白质B mRNA编辑酶催化多肽3F(APOBEC3F)基因的多态性及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)易感性的影响,对猪APOBEC3F基因外显子3、4、8和内含子3序列进行扩增和测序,筛选多态性位点,分析其与PRRSV易感性的相关性。测序结果发现内含子3的16 bp处发生1个A/G突变和外显子8的5 bp处发生1个G/A突变。针对外显子8的5 bp处发生1个G/A突变建立PCR-RFLP方法,检测9个猪种群共193个样本,发现在定远猪和梅山猪中有GG、GA和AA 3种基因型,在二花脸猪中有GG和GA 2种基因型,其他群体均为GG型。AA基因型猪肺泡巨噬细胞中PRRSV拷贝数在接毒后12 h显著高于GG基因型,极显著高于GA基因型。表明APOBEC3F基因外显子8与PRRSV抗性相关,外显子8的5 bp处G等位基因更有利于抵抗PRRSV的感染。 朱前明 孟春花 茆达干 王慧利 李静心 王婧 王亚磊 曹少先关键词:基因多态性 猪繁殖与呼吸综合征病毒 易感性 竹叶黄酮对小鼠肝脏和肌肉中部分矿物质元素含量的影响 昆明种小鼠64只,随机分成4组,雌雄分笼。分别在饮水中添加竹叶黄酮0(对照组)、200、600、和1000 mg/kg。试验期30天,试验结束时肝脏和腿肌采样,采用原子吸收分光光度法测定其Ca、Mg、Fe、Zn、K元素的... 吕锦芳 宁康健 薛艳梅 马军 朱前明文献传递 猪卵母细胞体外成熟及胚胎体外发育系统的优化 本研究通过优化猪卵母细胞体外成熟期间的激素添加方式及孤雌胚胎的激活方案,以期建立比较完善的猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育系统,并将其应用于转基因体细胞核移植胚胎的体外发育。 王慧利 孟春花 张庆晓 李静心 苏磊 贺强 朱前明 曹少先关键词:胚胎工程 猪卵母细胞 孤雌激活 胚胎发育 小鼠卵母细胞减数分裂期间组蛋白乙酰化及其对卵母细胞成熟质量的影响 被引量:1 2014年 为了解卵母细胞减数分裂期间组蛋白乙酰化规律,以组蛋白H4K12的乙酰化为标记,利用免疫荧光技术,研究了小鼠卵母细胞减数分裂期间组蛋白乙酰化的变化规律及其对卵母细胞成熟质量的影响。结果表明:小鼠生发泡期卵母细胞中组蛋白高度乙酰化,在第1及第2次减数分裂中期则发生去乙酰化;II型组蛋白去乙酰基酶(HDACs)负责调控减数分裂过程中的组蛋白乙酰化;减数分裂过程中存在组蛋白乙酰化/去乙酰化的动态变化;特异性抑制II型HDACs不影响卵母细胞成熟、纺锤体形态和染色体排列,但广谱性抑制HDACs后会导致卵母细胞染色体排列发生改变。 王婧 李静心 孟春花 朱前明 刘勇 曹少先 王慧利关键词:卵母细胞 组蛋白乙酰化 纺锤体 染色体 竹叶黄酮对小鼠肝脏和肌肉中部分矿物质元素含量的影响 被引量:1 2012年 昆明种小鼠64只,随机分成4组,雌雄分笼。分别在饮水中添加竹叶黄酮0(对照组)、200、600、和1000 mg/kg。试验期30天,试验结束时肝脏和腿肌采样,采用原子吸收分光光度法测定其Ca、Mg、Fe、Zn、K元素的含量,观察竹叶黄酮对小鼠肝脏和肌肉中部分矿物质元素含量的影响。研究发现,与对照组比较,高剂量组雌、雄鼠肝脏中Mg元素含量极显著下降(P<0.01), 吕锦芳 宁康健 薛艳梅 马军 朱前明关键词:竹叶黄酮 腿肌 试验期 雌鼠 血清及山羊卵丘细胞共培养对猪胚胎体外发育的促进作用 2014年 为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后添加10%胎牛血清培养至第6天,体外发育能力得到显著改善,卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率、囊胚细胞数分别达到95.1%、56.5%、27.3%、79.3;在此基础上,利用山羊卵丘细胞与猪胚胎进行共培养,将囊胚孵化率进一步提高至36.6%,初步建立了一套高效稳定的猪胚胎体外发育系统。 王慧利 李静心 王婧 孟春花 朱前明 张俊 钱勇 曹少先关键词:猪胚胎 体外发育 血清 共培养