朱森林
- 作品数：19 被引量：72H指数：7
- 供职机构：中山医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金卫生部临床学科重点项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 携带幽门螺杆菌hpaA基因减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建被引量：1
- 2001年
- 目的：构建携带幽门螺杆菌（Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ） ｈｐａＡ基因的重组活减毒鼠伤寒沙门疫苗菌。方法：用分子生物学方 法将ｈｐａＡ基因克隆人原核表达质粒ｐＴｒｃ９９Ａ，并进行核苷酸测序，重组质粒经鉴定后再导入活减毒鼠伤寒沙门菌 ＳＬ３２６１，提取重组疫苗菌质粒，聚合酶链反应（ＰＣＲ）和酶切鉴定，筛选目的克隆。结果：经ＰＣＲ和酶切证实，构建了 携带ｈｐａＡ基因（５６０ ｂｐ）的重组原核表达质粒ｐＴｒｃ９９Ａ－ｈｐａＡ，并将后者成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌ＳＬ３２６１。结 论：构建并鉴定了携带Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ ｈｐａＡ基因的重组活减毒鼠伤寒沙门疫苗苗，为探索制备Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ口服组份活疫 苗奠定了基础。
- 朱森林陈旻湖廖文俊陈洁胡品津
- 关键词：幽门螺杆菌基因减毒疫苗基因重组HPAA基因
- 幽门螺杆菌全长hpaA基因克隆和在大肠杆菌中高效表达
- 2001年
- 为了构建幽门螺杆菌 (H .pylori)全长hpaA基因表达质粒 ,在大肠杆菌中表达重组HpaA(reHpaA)蛋白 ,我们用PCR扩增全长hpaA基因 ,经适当的酶切 连接反应将其连入原核表达质粒pTrc99A ,反应产物转化大肠杆菌JM10 5 ,用Amp(+)培养基筛选 ,提取重组菌质粒 ,PCR和酶切鉴定 ,筛选阳性克隆 ,并用重组菌质粒进行hpaA基因测序。阳性克隆经IPTG诱导培养 ,用SDS PAGE电泳和Westernblot进行reHpaA表达分析和鉴定 ,用薄层扫描分析reHpaA含量。结果显示 ,重组质粒pTrc99A hpaA经PCR和酶切后均产生 783bphpaA基因。重组菌能表达约30kDreHpaA蛋白 ,含量占全菌体蛋白量的 5 1 99% ,Westernblot证实其有免疫反应性。重组H .pyloriHpaA表达质粒的成功构建及在大肠杆菌中高效表达的实现 ,为探索制备H .
- 朱森林陈旻湖陈洁李国庆胡品津陈为
- 关键词：幽门螺杆菌HPAA基因大肠杆菌
- 含幽门螺杆菌hpaA重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建和鉴定
- 目的:构建携带幽门螺杆菌(H.pylori)hpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗.方法:用PCR扩增H.pylori hpaA基因,再将hpaA基因克隆入原核表达质粒pTrc99A,并对重组质粒pTrc99A-hpaA中h...
- 朱森林陈旻湖廖文俊陈洁陈为胡品津
- 文献传递
- 大肠杆菌不耐热内毒素(LT)加幽门螺杆菌抗原经口免疫对小鼠幽门螺杆菌感染的免疫保护作用
- 目的:研究以大肠杆菌不耐热内毒素(LT)作为粘膜免疫佐剂加幽门螺杆菌(Hpylori,HP)抗原经口免疫对小鼠Hp感染的免疫保护作用.方法:以Ⅱ级Balb/c小鼠(雌性,8周龄)为动物模型,以IIP11637菌株制备超声...
- 陈洁陈旻湖朱森林陈为
- 文献传递
- 表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建和鉴定被引量：5
- 2001年
- 目的 构建表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B亚单位 (ureB)基因的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌。方法 用PCR扩增ureB基因 ,经适当酶切 连接反应将其克隆入高效原核表达质粒 pTrc99A ,进行基因测序 ,重组质粒鉴定后再导入减毒鼠伤寒沙门菌SL32 6 1,提取重组疫苗菌质粒 ,PCR和酶切鉴定 ,筛选阳性克隆。重组ureB能在宿主菌中表达 ,用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和薄层扫描进行蛋白分析。重组菌C5 7BL/ 6小鼠喂灌 ,分批 2d和 10d后处死小鼠 ,取脾和末段回肠进行细菌培养 ,挑菌落提质粒鉴定。结果 构建携带ureB的重组原核表达质粒pTrc99A ureB ,并将后者成功转化入减毒鼠伤寒沙门菌SL32 6 1,阳性克隆经PCR和酶切证实。SDS PAGE电泳和薄层扫描分析表明 ,重组菌SL32 6 1(pTrc99A ureB)表达相对分子质量为6 6× 10 3的ureB ,约占菌体蛋白总量的 2 6 %。小鼠重组菌喂灌 2d或 10d后 ,脾和末段回肠均发现携目的基因的菌落。结论 构建表达HpureB的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌 ,为探索制备Hp口服活疫苗奠定了基础。
- 朱森林陈旻湖廖文俊陈洁胡品津
- 关键词：幽门螺杆菌鼠伤寒沙门菌疫苗胃疾病
- 表达幽门螺杆菌hpaA重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建和鉴定被引量：8
- 2001年
- 目的 :构建表达幽门螺杆菌 (H pylori)hpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌。方法 :用基因工程的方法将hpaA基因克隆入原核表达质粒pTrc99A ,并进行了基因测序。重组质粒经鉴定后再导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1,提取重组疫苗菌质粒 ,PCR和酶切鉴定 ,筛选阳性克隆。用SDS PAGE电泳和Westernblot进行HpaA表达和鉴定。结果 :经PCR和酶切证实 ,构建了含hpaA的重组原核表达质粒pTrc99A hpaA ,并将后者成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌。HpaA能在疫苗菌中以二聚体形式表达 ,HpaA量约占全菌体蛋白量的 17% ,Westernblot证实其有免疫原性。结论 :构建了表达H pylorihpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌 ,为探索制备H
- 朱森林陈旻湖廖文俊陈洁胡品津
- 关键词：幽门螺杆菌HPAA基因鼠伤寒沙门氏菌疫苗
- 表达幽门螺杆菌UreA和KatA双价抗原的鼠伤寒菌疫苗株的初步构建被引量：2
- 2000年
- 目的 构建表达幽门螺杆菌 (Hp)尿素酶A亚单位 (UreA)和过氧化氢酶 (KatA)的减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株 ,对研制抗Hp感染重组疫苗的可行性进行探讨。方法 PCR方法从Hp基因组中扩增出ureA和katA片段 ,将其插入pGSTag表达载体中 ,重组质粒再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌。结果 对重组质粒进行限制酶切分析和PCR检测 ,证实两种基因已被克隆入pGSTag ,并转入减毒鼠伤寒沙门氏菌。结论 本研究成功地将表达HpureA和katA融合基因的重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌中 ,构建了UreA/KatA双价口服活疫苗 。
- 廖文俊陈湖朱森林陈洁陈为胡品津
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶疫苗
- 幽门螺杆菌基因工程疫苗及其制备方法
- 本发明涉及一种幽门螺杆菌基因工程疫苗及其制备方法。它为SL3261(pTrc99A－ureB),SL3261(pTrc99A－hpaA),SL3261(pTrc99A－ureB/hpaA),SL3261(pGSTag－u...
- 陈旻湖胡品津朱森林廖文俊
- 文献传递
- 表达幽门螺杆菌UreB减毒鼠伤寒沙门氏菌对小鼠的免疫保护作用被引量：11
- 2001年
- 【目的】构建表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H .pylori)尿素酶B亚单位 (UreB)减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌 ,研究其对小鼠抗H .pylori的免疫保护作用。【方法】用PCR扩增ureB ,将其克隆入高效原核表达质粒 pTrc99A ,进行基因测序 ,重组质粒鉴定后导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westernblot和薄层扫描进行目的蛋白表达分析。C5 7BL/ 6小鼠用重组菌免疫 ,4周后用H .pyloriSS1攻击 ,再 4周后处死小鼠 ,取胃做快速尿素酶试验和H .pylori定量培养 ,对照观察免疫效果。【结果】构建了携带ureB的重组原核表达质粒pTrc99A ureB ,并将它成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1。重组菌SL32 6 1(pTrc99A ureB)表达了约 6 6ku的UreB。与对照组比 ,重组菌免疫组 H .pylori定植水平明显下降 (P <0 0 5 )。【结论】构建了表达H .pyloriUreB的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌 ,该菌株对C5 7BL/ 6有免疫保护作用。
- 朱森林陈旻湖廖文俊陈洁胡品津
- 关键词：沙门氏菌鼠伤寒小鼠幽门螺杆菌
- 幽门螺杆菌基因工程疫苗
- 本发明涉及一种幽门螺杆菌基因工程疫苗。它为SL3261(pTrc99A-ureB)，SL3261(pTrc99A-ureB/hpaA)，SL3261(pGSTag-ureA)，SL3261(pGSTag-katA)和SL...
- 陈旻湖胡品津朱森林廖文俊
- 文献传递
