李林
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中南大学湘雅医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划湖南省重点学科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及初步应用被引量：17
- 2008年
- 运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28ku特异性scFv大量表达.随后以此为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,以期获得SIEA26～28ku天然分子候选疫苗相关的编码基因.结果显示,所获得的SIEA26～28ku特异性scFv,表达量高,采用该探针初步筛选出相关基因核糖体蛋白S4.SIEA26～28ku特异性scFv的获得,为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选疫苗SIEA26～28ku的编码基因奠定了基础.
- 何卓汪世平肖小芹曾少华刘明社李林周帅锋
- 关键词：日本血吸虫CDNA文库
- 一种简便、快速分离日本血吸虫卵的方法
- 众所周知,血吸虫卵在造成血吸虫病的传播流行方面起着重要的关键作用,是传播日本血吸虫病的唯一因子。血吸虫病防制工作的重点归根到底是如何控制虫卵传染源的问题,有效控制传染源,才能从源头上治理血吸虫病,这是治本之策。无论是控制...
- 周松华汪世平刘心利郭圆圆李庆华李林李乐彭先楚戴橄姚孟辉
- 文献传递
- Sj-UV-致弱尾蚴单链抗体库的构建及筛选
- 2010年
- 目的构建和鉴定日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)紫外线(UV)-照射致弱尾蚴单链抗体(single chain Fv,ScFv)表达文库,并以此作为高通量的库源筛选出针对有潜在保护力的Sj尾蚴66-68 kDa抗原(Schistosoma japonicum cercariae antigen 66-68kDa,SCA66-68kDa)的单链抗体。方法选择最佳紫外灯照射条件,构建UV-致弱尾蚴小鼠模型,通过其血清被动转移实验证实其是否具有抗血吸虫攻击感染的保护效果;随后提取该小鼠脾脏mRNA,利用噬菌体展示技术构建UV-照射致弱尾蚴单链抗体库,并从库容量、多样性等方面进行鉴定;运用直接菌落挖集法以SjSCA66-68kDa筛选该抗体库,获得阳性克隆进行蛋白表达,再与SCA进行反应,验证其与SjSCA66-68kDa反应的特异性。结果构建UV-致弱尾蚴动物模型中的血清转移至小鼠体内得到42.5%的减虫率,显著高于日本血吸虫感染血清转移组的减虫率(28.0%);日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库的库容量测定为1.9×108,重组率为100%;运用抗原直接菌落挖集法筛选共获得6个SCA66-68kDa阳性克隆,经SDS-PAGE、Western-blot分析结果显示可溶性ScFv获得了正确表达,且与相应抗原SjSCA66-68kDa特异性结合,证实成功获得了特异性抗SjSCA66-68kDa单链抗体。结论成功构建了高效日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库,从该库筛选共获得6个阳性克隆,均能诱导表达SjSCA66-68kDa特异性可溶性单链抗体。
- 周帅锋汪世平何卓李林高冬梅
- 关键词：日本血吸虫致弱尾蚴单链抗体
- 日本血吸虫生殖相关抗原31～32kDa分子的质谱分析与鉴定被引量：7
- 2008年
- 目的利用蛋白质组学技术分离、鉴定日本血吸虫天然分子31～32kDa抗原组分。方法收集感染后32d的日本血吸虫成虫,制备成虫蛋白,经一维电泳、固相pH梯度双向凝胶电泳分离,选取31～32kDa附近的蛋白点进行质谱分析鉴定,通过凝胶图像分析软件进行结果比较。结果二维电泳结果显示31～32kDa附近有13个蛋白点,经MALDI-TOF-MS鉴定及分析,发现3个蛋白分子分别与曼氏血吸虫Actine-2、日本血吸虫3-磷酸甘油脱氢酶、曼氏血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶有高度的同源性。结论31～32kDa组分中含有这3个蛋白点,它们与日本血吸虫31～32kDa天然分子中起保护性的有效分子密切相关。同时,它们的发现也为天然分子疫苗向基因工程疫苗的推进奠定了基础。
- 李林汪世平周帅锋胡少敏何卓高冬梅冯明钊
- 关键词：日本血吸虫蛋白质组学二维电泳质谱
- 日本血吸虫尾蚴66～68kD单特异性血清对尾蚴cDNA文库的免疫学筛选被引量：2
- 2008年
- 目的:获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)尾蚴66～68 kD抗原的编码基因,为日本血吸虫疫苗和诊断研究提供材料。方法:以Sj尾蚴66～68 kD抗原免疫家兔获得的单特异性血清为探针,对Sj尾蚴cDNA文库进行免疫筛选,将所获阳性克隆的插入片断进行PCR扩增、琼脂糖电泳初步鉴定,并挑选出4个强阳性克隆进行测序,通过互联网NCBI/BLAST进行核苷酸序列分析。结果:共获得21个持续阳性克隆,其中10个阳性克隆初步鉴定显示为单一扩增条带,且插入的cDNA片段大小分布于0.5～3.0 kb之间;4个强阳性克隆分别与日本血吸虫SJCHGC05187,SJCHGC05173,SJCHGC06989,SJCHGC01894显著同源。结论:获得了4种日本血吸虫相关的编码基因。
- 秦永华周帅锋汪世平高冬梅余路新李林
- 关键词：日本血吸虫尾蚴CDNA文库免疫筛选
- 抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26～28kDa单链抗体与EGFP的融合表达及靶向性研究被引量：3
- 2008年
- 目的体外观察抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26-28kDa单链抗体与日本血吸虫各阶段的靶向部位，探讨单链抗体在抗血吸虫病疫苗研究中的应用价值。方法扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因．克隆至PET32a／SIEA26～28kDa-scFv质粒，构建PET32a／EGFP-scFv质粒。转化至感受态E．coli BL21（DE3）中。并诱导表达单链抗体融合蛋白。分析单链抗体融合蛋白与SIEA26～28kDa的结合特异性。单链抗体融合蛋白与日本血吸虫成虫、虫卵切片孵育，荧光显微镜下观测GFP信号。确定特异性单链抗体的靶向性。结果重组质粒PET32a／EGFP-scFv构建成功．Trx-EGFP-scFv融合蛋白高效表达．与SIEA26-28kDa特异性结合。GFP信号主要集中在未成熟卵卵胚．雌虫卵巢、卵黄腺及与生殖系统邻近的肠腔组织。结论SIEA26-28kDa单链抗体与血吸虫未成熟卵胚胎及雌虫生殖系统具有较强的靶向性，具有潜在抗卵胚发育、抗雌虫生殖作用，为SIEA26-28kDa单链抗体在抗日本血吸虫病疫苗免疫靶向方面的研究奠定了基础。
- 何卓汪世平周帅锋秦永华高冬梅汪希雅李林余路新徐绍锐
- 关键词：日本血吸虫靶向性
