李正丰
- 作品数：15 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 商品疫苗对FMDVO／YNGM／97株的免疫效果评价
- 2008年
- 利用血清学方法对我国流行毒株O/YNGM/97进行鉴定,并对其生物学特性和免疫学特性进行了研究。结果显示,该流行毒株为O型口蹄疫病毒(FMDV),其对乳鼠和BHK21细胞的适应性比较好,致病性较强,LD50和TCID50分别为10-6.33/0.2 mL和10-4.75/0.05 mL。VP1基因序列的比较结果显示,O/YNGM/97株与国外FMDV参考毒株O/TAI/1/92的同源性为91.4%,与国内疫苗毒株OZ/93、OA/58和OY/80的同源性分别为79.2%、83.6%和78.9%。用商品疫苗OZ株、OY株口蹄疫O型灭活疫苗和牛羊口蹄疫O-Asia1型双价灭活疫苗免疫的小鼠均可产生较高的免疫抗体,并对流行毒株O/YNGM/97的攻击具有较好的保护性。说明,使用现有商品疫苗完全可以预防该毒株在我国的流行。
- 王占伟刘力宽陈笑娟余四九王永录方玉珍潘丽蒋守田张维德杜进鑫张淑刚张中旺李正丰张昱吕建亮
- 关键词：口蹄疫疫苗流行毒株免疫抗体BALB/C小鼠
- 口蹄疫病毒株AF72 VP1的结构构建与B细胞表位预测被引量：5
- 2008年
- 以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增目的基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,用凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结果确定AF72 VP1的核苷酸序列,利用同源建模的方法建立AF72 VP1结构蛋白的3D结构,在此基础上,综合亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数预测AF72 VP1结构蛋白的B细胞抗原表位。结果显示,VP1结构蛋白呈现较规则的空间构象,其中5-11、24-30、43-47、82-87、132-147和196-203氨基酸区段是AF72 VP1结构蛋白可能的B细胞抗原表位区域,该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供很有价值的参考信息。
- 张昱王永录张永光潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮张中旺张淑刚李正丰杜进鑫
- 关键词：口蹄疫病毒B细胞表位
- 口蹄疫病毒抗原保护剂的研究被引量：5
- 2009年
- [目的]研究几种(海藻糖、蔗糖、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲、明胶、L-精氨酸、抗坏血酸)保护剂,为口蹄疫抗原保护剂配方的形成提供参考。[方法]用三因素、三水平、双重复正交试验方法筛选出了对口蹄疫病毒(FMDV)抗原保护效果最好的I(4#)保护剂配方,以加保护剂A(已申请专利)的病毒为对照,比较其在不同条件下的TCID50和146s抗原的含量。[结果]通过方差分析4#保护剂保存病毒测得TCID50极显著的高于1、3、5、6、7、8号,显著高于2、9。将4#保护剂加入被保存的病毒抗原中,分别于4℃下保存90、120、150 d,其logTCID50分别为5.3、5.0和4.5,而加保护剂A(已申请专利)的对照病毒则为5.0、4.5和4.3;在37℃下保存40、50和60 h,其logT-CID50分别为4.5、2.5和1.0;而加保护剂A的对照病毒则为3.5、1.5和0.5,为了进一步验证保护剂对FMDV抗原的保护性能,进行了FMDV146s抗原含量的测定。分别于4℃下保存150 d,37℃下保存40 h,测得结果分别为0.796、0.462μg/ml,而加保护剂A的对照病毒则为0.602、0.307μg/ml。[结论]该复合配方保护剂I(4#)对FMDV有效抗原的保护作用优于保护剂A,尤其是病毒保护剂对提高FMDV的冷冻保存时间和耐热效能作用明显。
- 李正丰王永录贾宁张永光方玉珍蒋守田潘丽刘力宽吕建亮张淑刚杜进鑫张昱张中旺周鹏
- 关键词：口蹄疫病毒抗原保护剂
- 口蹄疫A型病毒AF/72株标准乳鼠组织毒的研制
- 2009年
- 用口蹄疫A型病毒AF/72株的第3代乳鼠组织毒,通过乳鼠适应至6代,获得该毒株的乳鼠组织毒AF/72/MF6,经测定其LD50为10-8.0.mL-1;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其它6株口蹄疫A型病毒株比对,同源性大于85%;经无菌检验和外源病毒检验,纯净性达到兽用生物制品标准要求;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且经乳鼠中和试验证实该毒仅能被口蹄疫A型标准血清中和,具有型特异性;经紫外分光光度法测定其146S含量,均值为189 ng.mL-1,远大于22 ng.mL-1的国际标准。综合纯净性检验、特异性检验和146S含量测定结果,可确定AF/72/MF6为口蹄疫A型病毒AF/72株乳鼠组织毒的标准毒。
- 杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮潘丽刘力宽张淑刚李正丰张昱张中旺
- 关键词：FMD
- 口蹄疫病毒3D聚合酶B细胞表位的筛选鉴定被引量：2
- 2009年
- 以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增3D聚合酶基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对获得AF723D聚合酶的核苷酸序列和推导氨基酸序列,综合分析3D聚合酶的亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数,预测其潜在B细胞抗原表位并人工合成表位肽段,利用间接ELISA对潜在表位进行筛选鉴定,结果显示,表位3D2和3D4为病毒株AF72 3D聚合酶的优势B细胞表位,该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究奠定基础。
- 张昱王永录张永光潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮张中旺张淑刚李正丰杜进鑫
- 关键词：口蹄疫病毒间接ELISAB细胞表位
- 口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清的研制被引量：2
- 2009年
- [目的]研制口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清,筛选对实际防疫更具针对性的A型FMD标准血清,为研发安全高效优质的A型FMD疫苗提供实物支撑。[方法]用国家口蹄疫参考实验室提供的口蹄疫A型病毒AF/72株的第12代细胞毒AF/72/MF6-BF12,经测定并经Kaber法计算其TCID50为10-8.0/ml;经紫外分光光度法测定其146 S含量,均值为189.0 ng/ml,远大于22.0 ng/ml的国际标准。将此细胞毒与弗氏佐剂联合制成灭活疫苗免疫豚鼠后分离得到血清。[结果]经物理性状检验、无菌检验和外源病毒检验,纯净性符合兽用生物制品标准要求;参照国际标准血清的抗体效价测定方法ELISA和微量细胞中和试验检测了此血清的抗体滴度,原血清,强阳性血清和弱阳性血清的中和效价均远小于1∶45,符合标准的要求。[结论]对比国际口蹄疫参考血清的抗体滴度确定强阳性血清为口蹄疫A型病毒AF/72株的参考血清,为以后筛选抗原谱广的制苗毒株提供实物支撑。
- 杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮潘丽刘力宽张淑刚李正丰张昱张中旺
- 关键词：FMD疫苗
- 保护剂及其在口蹄疫疫苗中的研究进展被引量：4
- 2009年
- 保护剂在动物疫苗中具有重要的作用,直接影响疫苗的质量。以保护剂为核心介绍了在疫苗保存前病毒抗原和保护剂的准备,保护剂的选用原则,分类、作用机理,着重讨论了保护剂在口蹄疫疫苗中的研究进展以及当前存在的问题,并对其应用前景提出展望。
- 李正丰王永录
- 关键词：保护剂口蹄疫疫苗
- 口蹄疫病毒株AF72 VP3的结构模拟与分析被引量：3
- 2009年
- 以口蹄疫病毒株AF72RNA为模板，反转录并扩增目的基因，PCR纯化产物与pGEMT—Easy载体连接并转化JM109菌株，用凝胶电泳、PCR和SpeI／SphI双酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结果确定AF72VP3的核苷酸序列，利用同源建模的方法建立AF72VP3结构蛋白的3D结构，在此基础上，综合亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数预测AF72VP3结构蛋白的B细胞抗原表位。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无差异的（P〉0．05）；而它们在氨基酸水平上的变异率差异显著（P〈0．05）。该毒株与20株源于GenBank中的VP3氨基酸序列比对发现其保守区主要位于第1～24、24～35、36～42、45～56、65～122、124～172、177～210、211～219位。AF72VP3结构蛋白三维空间结构可分为A、B和c3个结构区域，蛋白呈现较规则的空间构象，其中18～23、30～44、60～75、113～124、130～142、193～220氨基酸区段是AF72VP3结构蛋白可能的B细胞抗原表位区域，该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供更有价值的参考信息。
- 陈启伟王永录张永光潘丽方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺张昱张淑刚杜进鑫李正丰王刚
- 关键词：口蹄疫病毒B细胞表位
- 口蹄疫疫苗保存技术研究
- 保护剂在动物疫苗中具有重要的作用，直接影响疫苗的质量。目前，动物疫苗中，灭活疫苗占相当大的比例，国内外广泛使用的口蹄疫（FMD）疫苗均系油乳剂灭活疫苗。国内常用的保护剂主要为牛奶、蔗糖、明胶等，组方简单，保护功能差。加上...
- 李正丰
- 关键词：动物疫苗口蹄疫疫苗保护剂生物学特性免疫抗体
- 文献传递
- 口蹄疫病毒AF72株3D聚合酶的三维结构模拟和功能分析被引量：7
- 2008年
- 为了研究口蹄疫病毒(FMDV)3D聚合酶的结构和功能,以A型FMDV AF72株RNA为模板,反转录并扩增目的基因,将PCR纯化产物与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,并与GenBank中登录的其他4株FMDV完整参考序列进行比较,以确定AF72株3D聚合酶的核苷酸和氨基酸序列的保守区域,然后利用同源建模的方法建立AF72株3D聚合酶的三维结构。结果显示,3D聚合酶含有孔状活性区域。拉马钱德兰图证明,构建的3D聚合酶的空间结构是合理的。
- 张昱王永录张永光潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮张中旺张淑刚李正丰杜进鑫
- 关键词：口蹄疫病毒活性位点
