李雪玲
- 作品数：36 被引量：47H指数：4
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 脂类对大鼠胎儿神经干细胞生长和增殖的影响
- 2002年
- 从14.5～16.5d的大鼠胚胎分离神经干细胞,培养于添加相应成分以及表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的DMEM/F12培养液中。通过神经干细胞球直接计数和3H胸苷掺入两种方法研究脂类对大鼠胎儿神经干细胞(rFNSCs)生长和增殖的影响,结果显示,脂类不但可以增加神经干细胞的数量,而且可以增加3H胸苷掺入率,表明脂类对大鼠胎儿神经干细胞的生长和增殖有一定的促进作用,可以作为神经干细胞培养的添加成分。
- 李雪玲扈廷茂扎拉嘎胡于海泉John R.Morrison
- 关键词：脂类胎儿神经干细胞增殖
- 一种提高牛胚胎干细胞多能性的方法
- 本发明提供一种提高牛胚胎干细胞多能性的方法，包括向牛胚胎干细胞体外培养体系中添加终浓度为10‑40μg/mL的抗肿瘤药物naringenin进行维持培养。通过多能性检测，结果表明naringenin可显著增强牛胚胎干细胞...
- 李雪玲李琛韩雪洁相金柱岳永莉
- 文献传递
- 大鼠胎脑神经干细胞的分离和培养被引量：1
- 2004年
- 从胚龄14.5～16.5d(E14.5～16.5)的大鼠胎脑组织获得大鼠胎脑神经干细胞(ratfe-talneuralstemcells,rFNSCs),培养于含有碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)的无血清培养液DMEM/F12中,用3[H]胸苷掺入试验检测EGF和bFGF对大鼠胚胎神经干细胞分裂和增殖的影响.BrdU结合反应和nestin免疫组化检测显示培养细胞在早期时代约90%以上具有分裂增殖能力并显示nestin阳性,而且这些细胞在培养过程中可以分化神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,证明分离培养的是神经干细胞,可用于移植、定向分化和基因转移的研究.
- 李雪玲扈廷茂苏慧敏陈明杰于海泉John R.Morrision
- 关键词：表皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子
- 大鼠胎脑神经干细胞HPRT基因的敲除被引量：1
- 2004年
- 根据已知大鼠次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HypoxanthineGuaninePhosphoribosylTransferase ,HPRT)基因的外显子序列 ,从大鼠HPRT基因组DNA序列的细菌人工染色体 (BacterialArtificialChromosome ,BAC)中用酶切和PCR方法分别分离得到用于构建基因敲除载体的 3 0kb的 5′长臂 (LongArm ,LA)和 1 7kb的 3′短臂 (ShortArm ,SA) ,并分别克隆到pSL1180和pCR2 1中。进一步构建大鼠HPRT基因打靶载体———pKO HPRT ,经酶切鉴定后的大鼠HPRT基因敲除载体用NotⅠ酶切使其线性化 ,经溴乙锭、正丁醇、酚、酚 /氯仿提纯后 ,将终浓度调至 1μg μl。在FuGene 6转染试剂的作用下转染培养 2 4h的第二代大鼠胎脑神经干细胞 (RatFetalNeuralStemCells,rFNSCs)。转染后的细胞用 80 μg mlG4 18和 0 2 μmol L的Ganc全培养液筛选 ,2w后将存活细胞进行悬浮培养 ,使细胞形成球形物 ,挑选单个的球形物进行单克隆增殖 ,其中一部分细胞 (约 2～ 3× 10 3)用裂解液处理 ,取上清用于PCR检测 ,大部分细胞 (5× 10 7)用于DNA和RNA的提取 ,进行Southernbolt和RT PCR检测 ,剩余细胞冷冻保存。最后 1次实验共分离培养了 32个rFNSCs单克隆 ,其中 3个单克隆 (9 3% )经PCR、Southernbolt和RT
- 李雪玲扈廷茂John R Morrison
- 关键词：基因敲除
- 基因敲除技术在大型家畜中的应用被引量：4
- 2014年
- 基因敲除作为一种重要的生物技术,被广泛应用于当今生物学、医学研究中,并逐渐扩展到农业、畜牧业和兽医学等研究领域。与传统的同源重组介导的基因敲除相比,近几年发展起来的几种新技术包括RNA干扰(RNAi)、锌指核酶技术(ZFNs)、转录激活子类似的效应子核酶技术(TALENs)和成簇的规律间隔性短回文重复序列(CRISPR/(Cas)等,能够在复杂的基因组和RNA水平引入精细的改变或基因沉默。这些技术在大型家畜的疾病防治、性状改良等研究中发挥着积极的促进作用。随着这些技术的不断发展,以及新技术的开发和应用,会有更多的基因敲除手段应用到生产实践中,迅速地推动畜牧业的发展。本文主要针对RNA干扰(RNAi),锌指核酶技术(ZFNs),转录激活子类似的效应子核酶技术(TALENs)3种新兴技术在猪、牛、羊等大型家畜中的应用进行简要论述。
- 赵宇航梁浩刘明秋李雪玲
- 关键词：RNAI家畜
- 第Ⅵ类中间丝蛋白—Nestin被引量：1
- 2003年
- Nestin最早发现于神经上皮干细胞,在肌肉和牙齿组织中也有表达。Nestin在中枢神经系统(central nervous system,CNS)中特异表达于神经前体细胞,其mRNA的减少与神经发育中千细胞的减少相平行,而且在神经系统病变和损伤的组织中有Nestin表达,表明Nestin可以作为研究神经系统发育的一个手段,对神经系统疾病的诊断也有一定的参考价值。
- 李雪玲
- 关键词：NESTIN神经系统发育神经系统疾病
- 一种敲除牛MSTN基因的打靶载体及其应用
- 本发明公开了一种敲除牛肌肉生长抑制素MSTN基因的启动子捕获型打靶载体PIII-MSTN，其可敲除牛MSTN基因第一、二外显子的全部和第三外显子的大部分，敲除的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；PIII-MSTN核...
- 李荣凤赵丽华李雪玲梁浩云亭
- 文献传递
- 一种增强牛胚胎干细胞的多能性和代谢活力的培养体系和培养方法
- 本发明公开了一种增强牛胚胎干细胞的多能性和代谢活力的培养体系和培养方法。涉及细胞生物学和分子生物学技术领域。包括MEF、TeSR<Sup>TM</Sup>‑E5/E6 Basal Medium、TeSR<Sup>TM</...
- 李雪玲许文强张晖郝瑞峰李琛韩雪洁
- 一种牛滋养层干细胞建系方法
- 本发明提供了一种牛滋养层干细胞建系方法，其是在体外条件下，将经过链霉蛋白酶处理去透明带后的牛囊胚接种于经丝裂霉素处理后的小鼠胎儿成纤维细胞和Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞的饲养层中，加入2i小分子抑制剂培养液进行细胞的...
- 李荣凤李雪玲黄翔华乌云毕力格
- 用PCR法构建乳腺特异性表达非乳蛋白基因的研究被引量：1
- 1997年
- 将ＰＣＲ法分别从绵羊和人血基因组ＤＮＡ中扩增出的绵羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５′端调控区８９８ｂｐ的片段和人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４基因（ｈＣＤ１４）成熟肽１２４５ｂｐ的片段连接．连接片段插入ｐＵＣ１９ＥｃｏＲＩ－ＫｐｎＩ位点，构建成ｐＢＬＧ－ｈＣＤ１４质粒．该质粒经ＫｐｎＩ及ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄＩＩ酶切、ＰＣＲ法扩增ＢＬＧ和ｈＣＤ１４分析后，进一步用３２Ｐ－ＢＬＧ探针杂交确证．用ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄＩＩ酶切质粒片段ＢＬＧ－ｈＣＤ１４产生转基因小鼠以检测ＢＬＧ－ｈＣＤ１４在乳腺的表达能力．用免疫杂交法证实在转基因阳性小鼠乳汁中表达了ｈＣＤ１４．
- 郭继彤李雪玲于海泉王达珍张肇英
- 关键词：转基因动物乳腺基因表达
