杨兵
- 作品数：114 被引量：275H指数：9
- 供职机构：北京市农林科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金北京市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程自动化与计算机技术更多>>
- 利用玉米作为生物反应器表达PEDV中和表位抗原蛋白被引量：3
- 2014年
- 以玉米为生物反应器,将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)主要中和抗原表位(core neutralizing epitope,COE)基因导入玉米自交系,获得了高效表达PEDV-COE的转基因玉米稳定株系。首先,根据玉米密码子的偏好性,设计合成优化的COE编码基因,构建了植物表达载体p BAC9036。然后,利用PDS1000/He基因枪转化玉米幼胚,经过愈伤组织诱导、分化再生培养,获得71株转化再生植株,进而通过田间草甘膦抗性筛选,获得2个T1代转基因玉米稳定株系。通过PCR、RT-PCR、间接ELISA和Western blot等鉴定结果显示,COE基因已成功整合到玉米基因组并进行了转录和蛋白表达。并且种子中COE蛋白占可溶性总蛋白的0.122%和0.078%。最后,提取转基因玉米稳定株系的种子可溶性蛋白,与佐剂混合皮下注射免疫小鼠并取可溶性蛋白灌胃免疫小鼠,均可产生针对PEDV抗原的特异性抗体。获得的转基因玉米可有效表达COE蛋白,表达产物具有显著的免疫原性,为进一步研制PEDV-COE转基因玉米疫苗奠定了基础。
- 满坤杨兵薛静覃湘婕周宏专徐福洲许承扬杨凤萍张立全李向龙张晓东王金洛
- 关键词：猪流行性腹泻病毒转基因玉米
- 抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体（PEDV-IgY）及其特性研究
- 猪流行性腹泻病毒（PEDV）分离株在仔猪肠道内增殖后收获小肠组织提纯并浓缩病毒,与弗氏佐剂乳化后免疫待开产蛋鸡;同时将在Vero细胞中适应增殖的PEDV病毒提纯浓缩后作为检测抗原。利用琼脂扩散试验检测免疫鸡的血清抗体和卵...
- 王金洛宋维平徐福洲杨兵赖平安王琴孟燕妮
- 关键词：仔猪腹泻
- 文献传递
- 转基因植物作为生物反应器在畜禽疫苗生产中的应用被引量：5
- 2010年
- 植物生物反应器为人类提供了更为安全的疫苗生产"车间"。与传统疫苗相比,转基因植物疫苗具有更安全、稳定、经济和使用方便等优点。综述了转基因植物在畜禽疫苗应用方面的研究进展,并对存在的问题及解决方法进行了探讨。
- 曾作财张晓东王金洛杨兵李国平
- 关键词：转基因植物生物反应器畜禽疫苗
- 空肠弯曲菌LAMP检测方法的研究
- 空肠弯曲菌是引起人畜肠道感染的一种重要的食源性致病菌。本文选取空肠弯曲菌mapA基因序列,建立空肠弯曲菌LAMP检测方法,并对该方法中的各种影响指标分别进行筛选优化,以获取反应的最佳条件,最后对其特异性和敏感性进行检测。...
- 许紫建杨兵苏霞陈小玲徐福洲
- 关键词：空肠弯曲菌病原鉴定
- 猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白在转基因玉米中的表达被引量：2
- 2012年
- 本研究拟构建携带猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白基因(TGEV-S)的转基因玉米植株并检测其表达情况。首先利用PCR方法自携带TGEV-S基因的重组质粒中扩增2.2kb的S基因片段,然后插入植物表达载体pBAC176中,该表达载体以编码除草剂草甘膦抗性的EPSP基因作为选择标记,目的基因以双增强子的CaMV35S(E35S)及其玉米Hsp70第一内含子为驱动。以授粉后10～12d约0.5～1mm大小的玉米幼胚为受体,用基因枪进行转化,经过愈伤组织诱导、草甘膦抗性筛选和分化再生培养,先后获得74株转化再生植株。利用PCR和Southern blot检测表明,T0代转基因苗有9株检测结果为阳性。T1代转基因玉米株系经PCR检测有14个转基因株系为阳性,初步确定了目的基因在这些转基因玉米中的稳定整合。进而通过间接ELISA分析初步确定目的基因在7个T1代转基因玉米株系获得了表达。研究结果为进一步研究表达TGEV-S转基因玉米的生物学活性奠定了基础。
- 曾作财许承扬张晓东王金洛杨兵李国平
- 鸡传染性贫血病毒突变株细胞周期及凋亡检测的研究
- 前言鸡传染性贫血病毒(CAV)于1979年由日本学者Yuasa等首次报道,我国于1992年首次分离到CAV。CAV主要侵害骨髓造血组织和中枢免疫器官胸腺,导致骨髓黄化和胸腺萎缩,引起再生障碍性贫血和免疫抑制及继发感染。C...
- 孙丹丹杨兵苏霞陈小玲
- 文献传递
- 沙门氏菌fimY基因的原核表达及禽沙门氏菌抗体检测ELISA研究被引量：4
- 2012年
- 为研发禽沙门氏菌抗体检测方法,采用大肠杆菌系统表达沙门氏菌属保守的菌毛fimY基因,纯化的目的蛋白经Western blot分析,能与免疫鸡血清和感染鸡血清产生特异性反应条带,证明该重组蛋白既有反应原性也有免疫原性。以此纯化蛋白为抗原建立了间接ELISA(fimY-ELISA)。通过检验已知沙门氏菌鸡源血清、相关非沙门氏菌鸡源血清对fimY-ELISA进行评价,发现其在敏感性方面高于快速平板凝集试验(RPA)和自制的脂多糖抗原ELISA(LPS-ELISA)、肠炎沙门氏菌抗原ELISA(SE-ELISA),但在特异性方面不如LPS抗原ELISA;在与RPA的符合率方面与LPS-ELISA、SE-ELISA基本一致。
- 陈小玲李永清孙慧玲徐福洲章振华杨兵
- 关键词：ELISA特异性
- 犬细小病毒研究进展被引量：8
- 2019年
- 犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)是犬急性胃肠炎的主要致病因子之一,典型的临床症状包括呕吐、发热和腹泻,通常6周龄~6月龄的幼犬更易感染。20世纪70年代后期出现CPV-2后目前已在世界范围内流行。病原学研究显示CPV基因组替代率与RNA病毒相似,基因组中多个位点出现了新的变异,与病毒致病机制密切相关,引起了科研人员的广泛关注。在检测方面目前开展了多重聚合酶链反应(multiple PCR),聚合酶链式扩增阻碍突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS-PCR),隔热式恒温PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR),高分辨率熔解曲线PCR(high-resolution melting PCR,PCR-HRM),横向流动试纸条技术(immunocapture-loop mediated isothermal amplification-lateral flow dipstick,IC-LAMP-LFD),聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR),重组聚合酶扩增方法(recombinase polymerise amplification,RPA),Luminex液态悬浮芯片系统(Luminex xTAG)和免疫层析(immunochromatography,IC)等方法,在防控方面开展了核酸疫苗、重组亚单位苗、病毒样颗粒等新型疫苗以及治疗性药物研究。论文对CPV的流行病学、病原学、检测方法及防控措施等进行了综述。
- 周宏专苏霞徐福洲杨兵
- 关键词：犬细小病毒流行病学致病机理疫苗
- 胸膜肺炎放线杆菌血清7型apxⅡC-/apxⅠA+、ureC-/apxⅢ+减毒双突变菌株的构建及特性研究
- 胸膜肺炎放线杆菌(APP)是引起猪传染性胸膜肺炎的呼吸道病原细菌,其中Apx毒素和尿素酶(Urease)均是其主要的毒力因子,且Apx毒素又是其主要的免疫原性蛋白。为构建APP减毒突变菌株,本试验首先利用仅表达ApxⅡ毒...
- 崔国林郭芳芳陈小玲杨兵周宏专苏霞徐福洲
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌APX毒素尿素酶突变
- 犬瘟热病毒Lederle株H,N全基因序列分析及表达研究被引量：1
- 2007年
- 采用RT-PCR方法自犬瘟热病毒Lederle株基因组RNA中扩增出H基因(1 911 bp)和N基因(1 707 bp)片段,序列测定和分析表明与Onderstepoort株、CDV3株等疫苗毒株的同源性在95%以上,而与野外分离株的同源性介于90%～95%;以获得的H,N全基因片段为模板,分别扩增H基因近3′端996 bp的基因片段以及N基因中间高度保守区562 bp的基因片段,经克隆测序后分别插入原核表达载体pET-32a中进行表达,结果显示H片段和N片段分别表达大小约为57 kD和37 kD的融合蛋白,Western blotting检测结果显示,表达蛋白均可与CDV抗血清发生阳性反应,提示原核表达产物具有与CDV抗血清结合的免疫反应性。
- 杨应丽杨兵赖平安王金洛徐福洲
- 关键词：犬瘟热病毒H基因N基因原核表达
