梁啸
- 作品数：14 被引量：26H指数：3
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- 对SNI和CCI两种大鼠神经病理性疼痛模型的实验观察被引量：8
- 2013年
- 目的观察并比较大鼠坐骨神经分支选择性损伤(SNI)和慢性坐骨神经压迫损伤(CCI)两种神经病理性模型引起疼痛的效果。方法 Wistar大鼠30只,随机分为3组:Sham组(n=10)、SNI组(n=10)和CCI组(n=10)。Sham组仅暴露坐骨神经后缝合皮肤,分别制作SNI模型和CCI模型,于术前及术后28d内测定大鼠术侧机械疼痛阈值,并于术后第14天和第28天行Western Blotting检测大鼠背根神经节(DRG)内疼痛相关基因三磷酸环化水解酶1(GCH1)的表达变化。结果 Sham组大鼠术后未见疼痛敏感症状,SNI组和CCI组大鼠疼痛阈值于术后第1天较Sham组显著降低(P<0.05),SNI组疼痛阈值直至术后第28天都维持在较低水平,而CCI组痛阈值于术后第3天起才趋于稳定,术后21d开始痛敏症状有所缓解。Western Blotting检测显示,术后第14天SNI组和CCI组GCH1表达均高于Sham组(P<0.05),术后第28天CCI组GCH1表达有所降低,与SNI组出现显著性差异(P<0.05)。结论相比传统CCI模型,SNI模型是一种更敏感、更稳定的神经病理性疼痛模型。
- 梁啸刘洪美李庆伟陈国武孟纯阳
- 关键词：神经病理性疼痛动物模型
- VEGF165过表达对BMP2成骨细胞分化影响的实验研究被引量：2
- 2015年
- [目的]探讨腺病毒转染血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)对骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein 2,BMP2)促成骨细胞分化的抑制性作用研究。[方法]采用密度梯度离心法分离兔骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),取第3代BMSCs进行细胞表型鉴定并作为细胞实验对象,使用Ad-BMP2和Ad-BMP2-VEGF165载体体外转染BMSCs,倒置荧光显微镜下观察GFP表达变化;同时ELISA和Western blot检测BMP2和VEGF165蛋白的表达。然后,应用成骨细胞诱导培养液定向诱导BMSCs向成骨细胞分化。实验分3组:Ad-BMP2-VEGF165转染BMSCs组(Ad-BMP2-VEGF165组),AdBMP2转染BMSCs组(Ad-BMP2组),BMSCs组(对照组)。分别在成骨细胞诱导培养后7、14、21 d,通过Real-time PCR分析ALP和OC mRNA相对表达水平和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定、骨钙素(Osteocalcin,OC)免疫组化染色来评价各组BMSCs成骨分化潜能的影响。[结果]第3代细胞表面高表达CD29(99.82%)、CD44(94.14%),低表达CD14(3.11%)、CD34(0.34%);腺病毒转染后第5 h BMP2和h VEGF165蛋白水平表达最高;成骨细胞诱导培养14和21 d后,Ad-BMP2组成骨相关基因表达、OC免疫组化和ALP活性表达最高,结果与其他两组相比较差异具有统计学意义(P<0.05);而对照组表达最弱,与Ad-BMP2-VEGF165组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]腺病毒载体Ad-BMP2与Ad-BMP2-VEGF165转染BMSCs后,均具有明显促进BMSCs体外诱导成骨细胞分化潜能,但Ad-BMP2诱导作用更为显著,同时说明VEGF165可能对BMSCs成骨细胞分化起抑制作用。
- 张聪刘洪美李庆伟陈国武梁啸孟纯阳
- 关键词：骨形态发生蛋白2成骨细胞
- 腺病毒载体介导人BMP-2与VEGF-165对骨髓间充质干细胞形态特征及增殖能力影响的实验研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨携带骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)与血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF-165)双基因的腺病毒载体转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后对细胞形态特征及增殖能力的影响。方法选取4只新西兰大白兔抽取骨髓液,分离鉴定获得第3代BMSCs做为实验对象,实验分成4组:Ad-BMP-2-VEGF-165转染组(A组);Ad-BMP-2转染组(B组);AdVEGF-165转染组(C组);BMSCs对照组(D组),每组6个复孔,连测3次。首先,将腺病毒载体转染BMSCs,获得最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI);其次,转染后1-3d观察转染各组细胞与D组形态和贴壁状况差异变化;再次,ELISA法检测转染各组目的蛋白表达量与D组的差异;最后,MTT法测定1-7d各组细胞增殖曲线,并进行组间比较。结果 BMSCs分离鉴定成功,第3代细胞高表达CD29(99.82%),CD44(94.14%)抗原。腺病毒转染组最佳MOI值分别为A组MOI=80,B组MOI=80,C组MOI=100。腺病毒转染后各组细胞形态和贴壁特性未见明显改变,边界清晰,细胞呈梭形,细胞核较大呈圆形或椭圆形,生长旺盛。转染组细胞高表达目的蛋白,在第5d目的蛋白浓度到高峰,A组BMP-2浓度为1525.47±58.16pg/ml,B组为1506.48±92.65pg/ml;A组VEGF-165浓度为1732.14±126.25pg/ml,C组为1733.59±127.07pg/ml,转染组在不同时间点的目的蛋白表达量与D组差异均具有统计学意义(P<0.05)。MTT法显示第1d、第2dBMSCs未见明显增长,第3d开始呈指数增长,第5d达高峰;第3d,A组、B组吸光度(optical density,OD)值分别为0.113±0.004、0.112±0.003,均高于C组、D组(P<0.05);第4d,A、B、C各组OD值分别为0.113±0.004、0.110±0.003、0.105±0.001,均高于D组0.102±0.004,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMP-2与VEGF-165对BMSCs形态和贴壁性无明显影响,但是均可以促进BMSCs增殖,且两者对细胞的增殖无明显叠加作用。
- 张聪刘洪美李庆伟陈国武梁啸孟纯阳
- 关键词：骨形态发生蛋白2血管内皮生长因子165腺病毒载体
- hBMP2与hVEGF165双基因腺病毒载体转染BMSCs复合n-HA/PA66组织工程骨构建及检测被引量：3
- 2015年
- [目的]探讨腺病毒介导共表达人骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)和血管内皮生长因子165(vascular endothelia growth factor 165,VEGF165)载体转染兔骨髓间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(nano-hydroxyapatite/polyamide66,n-HA/PA66)体外构建组织工程骨的可行性。[方法]采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),取第3代BMSCs进行细胞表型鉴定;第3代BMSCs作为细胞实验对象,实验共分2组:Ad-BMP2-VEGF165为实验组和Ad-GFP为对照组;首先用不同感染复数感染BMSCs,并进行ELISA和Western blot检测细胞h BMP2和h VEGF165的表达;其次将感染后的细胞接种到n-HA/PA66生物材料上,7 d后扫描电镜观察细胞贴附、生长状况;同时,7 d后消化收集贴附n-HA/PA66上的细胞,Western blot检测贴附生物材料细胞中骨钙素(osteocalcin,OC)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达,以及3 d和7 d后的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定。[结果]第3代细胞表面高表达CD29(99.82%)和CD44(94.14%),低表达CD14(3.11%)和CD34(0.34%);腺病毒感染后h BMP2和h VEGF165蛋白水平高表达;扫描电镜见感染细胞分布均匀,生长状态良好。实验组与对照组相比,复合n-HA/PA66后Western Blot检测显示OC和OPN表达和ALP活性均较高,两组差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]Ad-BMP2-VEGF165双基因腺病毒感染BMSCs后目的蛋白较高量表达,同时感染后BMSCs可以在n-HA/PA66进行良好的黏附、生长、增殖、矿化,Ad-BMP2-VEGF165双基因表达组织工程骨构建成功。
- 张聪刘洪美李庆伟陈国武梁啸孟纯阳
- 关键词：骨形态发生蛋白2血管内皮生长因子165生物支架
- 临床剂量浓度透明质酸对骨髓间充质干细胞旁分泌及过表达VEGF165作用影响的实验研究被引量：1
- 2014年
- [目的]观察临床剂量浓度透明质酸干预骨髓间充质干细胞（bone maltow mesenchymal stem cells，BMSCs）后对其生长、旁分泌和过表达VEGFl65蛋白水平的影响。[方法]将细胞生长曲线测定与细胞分泌VEGFl65水平测定均分为4组：A组（DMEM／F12），B组（HA），C组（HA＋Ad—VEGF165），D组（Ad—VEGF165），每组6个复孔。采用密度梯度离心法分离BMSCs和流式细胞术并进行细胞表型鉴定。取第3代BMSCs做为实验对象，Ad—VEGF165转染BMSCs后和或与HA复合培养6h，然后观察细胞形态、生长曲线、VEGFl65分泌水平变化。[结果]各组细胞形态未见明显差异和变化；C组与D组细胞生长曲线OD值在第1～5d均高于A组与B组；A组（34．524-2．13）与B组（34．90±1．78）均有较低水平的旁分泌VEGF65蛋白，而Ad—VEGF165转然后的C组（1487．29±36．08）与D组（1474．48±49．13）VEGF165分泌水平明显增高，但两组差异无统计学意义，而与A组、B组相比较差异均有统计学意义。[结论]治疗剂量透明质酸钠对BMSCs生长、增殖、旁分泌及过表达VEGF165蛋白无明显影响。
- 张聪刘洪美李庆伟陈国武梁啸孟纯阳
- 关键词：透明质酸骨髓间充质干细胞血管内皮生长因子165
- 骨形态发生蛋白2／血管内皮生长因子165转染骨髓间充质干细胞复合多孔纳米羟基磷灰石／聚酰胺66修复兔桡骨缺损被引量：3
- 2015年
- 目的评估骨形态发生蛋白2／血管内皮生长因子165（hBMP2／hvEGF165）双基因腺病毒转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）复合多孔纳米羟基磷灰石／聚酰胺66（n—HA／PA66）对骨缺损的修复作用。方法选取60只成年雄性新西兰大白兔，制作15mm双侧桡骨中段骨缺损模型。按完全随机法分为3组，各组20只，根据双侧桡骨制作骨缺损模型，各大组分2小组，共6组。A1组：左桡骨缺损处不植入任何材料为空白对照组；A2组：右桡骨缺损处单纯植入n—HA／PA66人工骨材料；B1组：左桡骨缺损处植入hVEGF165／BMscs／n—HA／PA66人工骨材料；B2组：右桡骨缺损处植入BMP2／BMSCs／n—HA／PA66人工骨材料；C1组：左桡骨缺损处植入BMSCs／n—HA／PA66人工骨材料；C2组：右桡骨缺损处植入hBMP2／hVEGF165／BMscs／n—HA／PA66人工骨材料。分别于2，4，8，12周行x线片、HE和Masson染色观察桡骨缺损修复情况。结果c2组术后8周x线片、HE和Masson染色显示移植部位有大量软骨形成，且在边缘有大量骨组织生成，术后12周可见组织材料被外层骨组织包裹，骨缺损修复效果优于其他组（P〈0．05）；且术后各时相点C2组血管数目均优于其他组（P〈0．05），B1组各时相点血管数均多于B2组（P〈0．05），且两组明显多于A2、c1组（P〈0．05）；A2与c1组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论hBMP2／hVEGF165双基因转染BMSCs复合多孔n—HA／PA66具有明显提高修复兔桡骨干缺损的作用。
- 管大凡刘洪美张聪李庆伟陈国武梁啸孟纯阳
- 关键词：骨形态发生蛋白质类血管内皮生长因子类骨缺损
- 大鼠坐骨神经慢性压迫损伤引起脊髓背角GCH1表达和神经细胞凋亡变化的实验研究
- 背景：周围神经损伤可引起相应支配区域的感觉异常和痛觉过敏等功能异常表现,其发病机制较为复杂。三磷酸鸟苷环化水解酶1(GTP cyclohydrolase1,GCH1)是四氢生物蝶呤(tetrahydrobiopterin...
- 梁啸
- 关键词：细胞凋亡坐骨神经脊髓背角神经病理性疼痛
- 文献传递
- 内镜腰椎间盘切除术后复发的因素及预测模型
- 2024年
- [目的]探讨经皮内镜腰椎间盘切除术(percutaneous lumbar endoscopic discectomy,PELD)后复发性椎间盘突出(recurrent lumbar disc herniation,rLDH)的影响因素并建立预测模型。[方法]回顾性分析2017年1月—2020年1月作者采用PELD治疗的腰椎间盘突出症的286患者的临床资料。根据术后3年内是否出现复发分为复发组和未复发组,采用单因素比较和多因素逻辑回归分析,筛选出复发的相关因素,并建立数学预测模型,采用受试者工作特征(ROC)曲线等分析以评估模型的临床价值。[结果]286例患者中,44例确诊为复发,占15.4%;242例未复发,占84.6%。单因素比较表明,复发组的BMI[(25.8±3.0)vs(24.2±3.3),P=0.004]和病程[(17.9±18.3)个月vs(10.7±16.8)个月,P=0.01]均显著大于未复发组;复发组的术前影像Modic改变显著多于未复发组[无/有,(30/14)vs(206/36),P=0.006];复发组术前影像测量椎间ROM显著大于未复发组[(9.3±3.4)°vs(7.1±2.8)°,P<0.001];复发组经椎间孔入路手术比率显著大于未复发组[TF/IL,(29/15)vs(114/128),P=0.022]。逻辑回归表明,BMI(OR=1.154,95%CI 1.031~1.291,P=0.013)、病程(OR=1.023,95%CI 1.005~1.042,P=0.013)、Modic改变(OR=3.143,95%CI 1.369~7.070,P=0.007)、椎间ROM(OR=1.264,95%CI 1.126~1.419,P<0.001)和手术入路(椎间孔/椎板间)(OR=2.104,95%CI 1.007~4.396,P=0.048)是复发的独立危险因素。按逻辑回归得出预测模型,其预测值ROC分析的曲线下面积为(AUC)为0.787(95%CI 0.721~0.853);模型校准曲线与实际曲线一致性较好;决策曲线分析表明,风险阈值为10%~50%时,该模型可产生较大净获益。[结论]本研究表明BMI、病程、术前Modic改变、术前椎间ROM和手术入路是PELD术后rLDH的危险因素。本研究得出预测rLDH模型可能帮助临床医生判断术后复发风险。
- 梁啸李东儒陈筱王叶新李衍朋高龙飞孟纯阳
- 大鼠坐骨神经慢性压迫后脊髓背角GCH1基因表达与疼痛的关系被引量：2
- 2013年
- 目的：探讨大鼠坐骨神经慢性压迫（chronic constriction injury,CCI）后,脊髓背角内三磷酸鸟苷环化水解酶1（GTP cyclohydrolase 1,GCH1）基因的表达变化与神经病理性疼痛产生的关系。方法：wistar大鼠64只被随机分为CCI组和Sham组,每组32只。对CCI组大鼠行右侧坐骨神经结扎;建立CCI模型,Sham组仅暴露坐骨神经不结扎,于术前1天及术后1、3、7、10、14、21、28天测定大鼠机械痛阈值,并分别在术后3、7、14、28天取腰4-6段脊髓,进行免疫组化和Western Blotting检测,观察脊髓背角GCH1表达的变化情况。结果：CCI组大鼠术后各时间点后肢机械痛阈值均显著低于Sham组（P〈0.05）,术后第1天开始疼痛阈值便明显降低,直至术后第28天,均低于术前水平（P〈0.05）。免疫组化结果显示：CCI组大鼠术后脊髓背角神经元GCH1的表达呈先升高后降低的趋势;与Sham组相比,术后各时间点GCH1的表达均明显增高（P〈0.05）。Western Blotting检测与免疫组化结果基本一致,CCI组术后3天、7天、14天GCH1表达均高于Sham组（P〈0.05）。结论：周围神经损伤引起的痛觉过敏随脊髓背角内GCH1表达升高而增强,随其表达降低而减轻,可以认为GCH1可能参与了神经病理性疼痛的形成。
- 梁啸刘洪美李庆伟陈国武孟纯阳
- 关键词：神经病理性疼痛坐骨神经脊髓背角
- 腰椎间盘脱出椎间孔镜穿刺的三维影像测量被引量：2
- 2022年
- [目的]为椎间孔镜(transforaminal endoscopic spine system,TESSYS^(TM)技术)手术的实施提供参考影像测量数据。[方法]回顾性分析2014年7月—2021年9月78例接受椎间孔镜手术治疗的脱垂型腰椎间盘突出症患者的临床资料。术前影像测量穿刺的椎间孔宽度、安全水平距离、水平角度和头倾角度,并在术中验证是否达到预期穿刺目标靶点并评估手术有效率和安全性。[结果]不同脱垂程度同节段椎间孔宽度差异均无统计学意义(P>0.05),相同脱垂程度,不同节段间椎间孔宽度差异均有统计学意义(P<0.05):椎间孔宽度:L_(3/4)>L_(4/5)>L_(5)S_(1)。安全水平角、穿刺进针点距离棘突的体表水平距离在不同脱垂程度同节段及相同脱垂程度不同节段间的差异均无统计学意义(P>0.05)。采用上述影像数据为引导,所有患者术中均达到靶向穿刺并顺利完成手术。[结论]术前影像三维测量有利于制定个性化穿刺规划,指导术中安全准确地穿刺。
- 麻凤玉李宜照杨涛王叶新梁啸孟纯阳
