汪坤福
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：佳木斯大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省研究生创新科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RPL30基因哺乳动物表达载体的构建及其初步表达分析被引量：1
- 2012年
- 目的克隆RPL30基因并构建其哺乳动物表达载体,然后将该基因导入人肝癌细胞系HepG2进行初步表达分析,并考察RPL30的超表达对硒蛋白P基因转录水平的影响。方法应用RT-PCR方法扩增出目的基因的全长编码区,并利用双酶切连接法将其连入哺乳动物表达载体pcDNA3.1(+)。采用脂质体转染法转染HepG2细胞后应用RT-PCR法检测RPL30基因的表达以及其超表达对硒蛋白P基因转录水平的影响。同时在转染细胞中添加无机硒后研究其对RPL30和硒蛋白P基因转录水平的调控。结果成功地构建了RPL30表达质粒pcDNA3.1-RPL30,转染HepG2细胞后实现基因的超表达,相对于GFP对照转染细胞增加了4～5倍。然而,RPL30基因的超表达并没有显著提高硒蛋白P的转录水平。硒对RPL30基因的表达基本上没有影响,但却显著提高硒蛋白P的表达水平。结论 RPL30哺乳动物表达载体的成功构建以及RPL30超表达后的初步分析为下一步深入研究硒蛋白的生物合成机制打下了基础。
- 李丽朱贵明汪坤福张鹏霞
- 关键词：克隆硒蛋白P
- △4/△15脂肪酸去饱和酶在哺乳动物细胞的表达及功能研究
- 目的： 实现原生动物小眼虫Euglena gracilis的△4去饱和酶基因sD4在哺乳动物CHO细胞中表达，发挥△4去饱和酶活性;与线虫C.Briggsae的△15去饱和酶基因sN3协同作用：在CHO细胞中，这两种基...
- 汪坤福
- 关键词：哺乳动物CHO细胞
- 脂肪酸合成酶系多基因表达载体的构建被引量：3
- 2013年
- 目的利用独立表达盒法构建脂肪酸去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体进一步研究多基因表达载体中各个基因表达的相互影响。方法利用基因工程的方法扩增2个脂肪酸去饱和酶基因和2个延长酶基因,然后连接到pcDNA3.1(-)哺乳动物表达载体上,之后转化、筛选、酶切鉴定。最后脂质体法瞬时转染HK293T细胞,提取RNA检测这四个基因的表达情况。结果成功构建了含脂肪去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体pcDNA3.1-EF,并在HK293T细胞中成功表达。结论四基因表达载体pcDNA3.1-EF在HK293T细胞中成功表达,单个基因在表达载体中的次序对基因的表达没有明显影响。
- 汪坤福朱贵明张莉张涛荆鑫鑫江旭东王明富
- 关键词：多不饱和脂肪酸多基因表达载体脂肪酸去饱和酶
- 四个脂肪酸合成酶基因在哺乳动物细胞中的超表达提高长链多不饱和脂肪酸生物合成效率被引量：2
- 2014年
- DHA(22:6n-3)、EPA(20:5n-3)和ARA(20:4n-6)三种长链多不饱和脂肪酸在生物体内活性最强,它们在促进大脑发育和功能维持以及在预防和治疗心血管疾病、炎症、癌症等多种疾病方面有着重要作用。然而,尽管哺乳动物体内有完整的长链多不饱和脂肪酸合成酶系,但哺乳动物合成这些长链多不饱和脂肪酸的效率很低而主要依赖于食物获取。本研究应用转基因方法,将哺乳动物来源的Δ6和Δ5脂肪酸去饱和酶以及Δ6和Δ5脂肪酸延长酶这4种酶的编码基因构建成为一个多基因表达载体,然后转染哺乳动物细胞HEK293T,实现了4个目的基因的超表达,再通过气质联用(GC-MS)分析证实了DHA、EPA和ARA等长链多不饱和脂肪酸的合成效率及水平显著增加,DHA的水平更是提高了2.5倍。由此可见,哺乳动物具有某种抑制长链多不饱和脂肪酸高水平合成的机制,但通过Δ6和Δ5脂肪酸去饱和酶以及Δ6和Δ5脂肪酸延长酶的超表达,能够打破哺乳动物这种抑制机制,从而显著提高DHA、EPA、ARA等的合成水平。同时,本研究的思路也为在转基因动物中生产长链多不饱和脂肪酸提供了重要的启示。
- 朱贵明Abdulmomen Ali Mohammed SalehSaid Ahmed Bahwal汪坤福王明富王迪迪葛堂栋孙洁
- 关键词：多不饱和脂肪酸脂肪酸去饱和酶多基因表达载体
- 半合成-酶连法克隆EFsec基因及其初步表达分析
- 2012年
- 目的将缺失一段编码序列的真核硒代半胱氨酸-tRNA特异性延伸因子(EFsec-)基因补齐,并克隆到真核表达载体进行初步表达分析。方法采用人工合成法合成所缺失的基因片段,然后利用EFsec-基因序列中靠近5'端存在的天然酶切位点进行酶连,再用PCR方法扩增出拼接产物,并将其克隆到pcDNA3.1(-)载体。采用脂质体转染法转染HEK293T细胞后应用RT-PCR法检测EFsec基因的表达。结果准确快捷地将EFsec-基因补齐了其5'端缺失的基因序列,并成功地构建了其表达质粒pcDNA3.1-EFsec,转染哺乳动物细胞后检测到了EFsec基因的显著表达。结论半合成-酶连法可以高效快捷地补齐并克隆缺失的EFsec-基因,提供了一种拼接基因的有效策略和方法,同时也为EFsec基因的下一步研究奠定了基础。
- 李丽朱贵明汪坤福张鹏霞
- 关键词：克隆硒蛋白
- 后基因组时代转基因小鼠在生命科学中的研究进展被引量：2
- 2011年
- 随着后基因组时代的到来,转基因动物已成为新兴的最有效的动物实验模型,转基因小鼠应用领域越来越广泛。利用转基因小鼠,从生物整体上研究基因组的功能学,又称为后基因组学。活体研究各基因及调控作用,克服了原来此领域研究的局限性和片面性。国内外基因工程小鼠的制备已经形成了技术平台,发展规模化、商业化。现就转基因小鼠的发展、应用及转基因小鼠国内外现状和发展趋势予以综述。
- 马微赵伟李丹汪坤福张鹏霞
- 关键词：转基因小鼠转基因动物动物实验模型生命科学
- 原生动物Δ4-脂肪酸去饱和酶基因在卵巢细胞中的表达
- 2013年
- 目的探讨优化、合成原生动物Δ4-脂肪酸去饱和酶基因,并构建其哺乳动物表达载体,将基因导入卵巢细胞(CHO)中进行初步表达。方法目的基因经优化后人工合成全长编码区,利用双酶切连接法将其连入哺乳动物表达载体pcDNA3.1(-)。采用脂质体法稳定转染CHO细胞后应用PCR和RT-PCR法检测Δ4-脂肪酸去饱和酶基因的整合和表达情况。结果成功构建了Δ4-脂肪酸去饱和酶基因的表达载体pcDNA3.1-D4,并整合进CHO细胞基因组,实现了该基因在CHO中的表达。结论原生动物Δ4-脂肪酸去饱和酶基因哺乳动物表达载体的成功构建以及Δ4-脂肪酸去饱和酶基因表达后的分析为下一步深入研究Δ4-脂肪酸去饱和酶基因的功能和转基因动物的制作打下了基础。
- 汪坤福朱贵明张涛孙洁江旭东王明富
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞
