王凯峰 作品数:9 被引量:9 H指数:1 供职机构: 复旦大学附属中山医院 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
肝癌转移抑制基因在8号染色体上的功能定位 被引量:1 2008年 目的为进一步寻找和克隆可能的肝癌转移抑制基因奠定基础。方法以序列标签位点(STS)为路标,运用基因组物理图谱方法分析人类染色体8p上肝癌转移抑制基因相关染色体缺失状况,从NCBI的UniSTS数据库查询STS的引物序列,以微细胞杂交克隆DNA为模板(A9/C5F1和A9/C5F2为转移不抑制组,A9/C5F4、A9/C5F8和A9/C5F10为转移抑制组)进行STSPCR扩增。结果人类染色体8p上从D8S542位点起至D8S1973位点区段(位于染色体8p21.1~23.1区域,约18cM)存在转移抑制组杂交克隆STS位点不同程度的获得和转移不抑制组杂交克隆组STS位点的缺失。结论D8S542~D8S1973所在的人类染色体8p21.1~23.1区域可能存在肝癌转移抑制基因。 宋丽杰 叶胜龙 王凯峰 梁春敏 刘虎 孙瑞霞 赵燕 汤钊猷关键词:肝细胞 转移抑制基因 DLC-1基因在肝细胞癌组织中表达的研究 2008年 目的研究肝癌缺失基因-1(DLC-1)在人原发性肝癌组织中的表达及与肝细胞癌侵袭转移的关系。方法收集51例复旦大学附属中山医院外科手术切除的肝细胞癌及癌旁正常组织标本,用荧光定量RT-PCR方法分析组织中DLC-1基因的表达。结果在51对配对的肝细胞癌与癌旁无瘤肝组织中,前者DLC-1基因表达水平明显低于后者(P<0.01),且高侵袭性肝细胞癌组明显低于低侵袭性肝细胞癌组(P<0.05)。结论DLC-1基因在HCC组织中呈低表达,其表达水平与其侵袭性高低相关。 宋丽杰 叶胜龙 王凯峰 翁永强 梁春敏 孙瑞霞 赵燕关键词:肝细胞 肝癌缺失基因-1 RNA干扰在肿瘤研究中的应用 2005年 RNA干扰 (RNAi)在肿瘤研究中的应用目前主要在癌基因功能、信号传导、细胞周期等领域进行了致癌机制的相关研究。在肿瘤治疗领域,目前对致癌基因的抑制、细胞周期抑制、信号传导通路、肿瘤代谢途径、抗血管生成、诱导凋亡及增强放化疗敏感性方面均有较为深入的研究。RNAi的研究目前还存在一些难点,如干扰的效率及有效性、干扰机制方面均有待于深入阐明。 王凯峰 叶胜龙关键词:肿瘤 基因表达调控 负载不同转移潜能肝癌细胞exosomes的树突状细胞激活T淋巴细胞体外杀伤作用的初步研究 2007年 目的分离制备高、低转移潜能肝癌细胞exosomes,并研究负载相应exosomes的树突状细胞(DC)激活的T淋巴细胞在体外杀伤肿瘤细胞的作用。分析不同转移潜能肝癌细胞系分泌的exosomes的成分差异。方法采用四步离心法分离exosomes,电镜观察。分离小鼠DC,并且负载高、低转移潜能细胞株的exosomes,激活T淋巴细胞后,采用^3H-TdR掺入法进行体外混合淋巴细胞反应。应用蛋白质组学弱阳离子交换芯片(SELDI-TOF-MS)检测不同转移潜能肝癌细胞分泌的exosomes蛋白成分的差异。结果电镜观察高转移潜能的肝癌细胞分泌的exoxomes的密度分布、exosomes内容物均不同于低转移组。CD80、CD86、MHC-;Ⅰ、MHC-Ⅱ,在高转移组分别为64.27±5.00、44.89±10.11、84.35±19.89、59.03±19.37,低转移组分别为71.53.±4.85、50.01±9.50、80.68±29.87、58.86±21.11,与对照组相比P〉0.05,负载exosomes后测得cpm值在高转移组为528.40±179.06,低转移组为78.80±24.44,与对照组相比P〈0.01。蛋白质组学弱阳离子交换芯片结果表明高、低转移组细胞系的exosomes蛋白组分有着明显的差异。结论exosomes具有潜在的免疫治疗价值,在肝癌的转移和复发防治以及生物治疗中具有应用前景。 王凯峰 叶胜龙 宋丽杰 崔杰峰 翁永强 梁春敏 孙瑞霞 汤钊猷关键词:肝细胞 肝癌中树突状细胞功能改变与β-中心体肌动蛋白表达下调的关系 被引量:1 2007年 目的研究负载不同转移潜能人肝癌树突状细胞中β-中心体肌动蛋白(β-centractin)表达的差异及其与树突状细胞(DC)表型、功能变化的关系。方法不同转移潜能肝癌分别负载 DC,无负载 DC 为对照。流式细胞仪检测表型,混合淋巴细胞反应检测 DC 的功能;用 Western 印迹和细胞免疫化学方法对β-centractin 进行验证和定位。结果负载组 DC 其 HLA-DR、CDS0、CD83和 CD86均明显高于无负载组 DC(P<0.05),负载组中 DC 的 HLA-DR、CD1a 差异无统计学意义,但负载高转移肝癌 DC 的 CD86表达和混合淋巴细胞反应(MLR)能力明显低于其他负载组 DC (均 P<0.05)。Western 印迹和细胞免疫化学方法发现β-centractin 在无负载 DC 中不表达,在负载高转移肝癌 DC 中表达低于其他负载组 DC,与其在双向电泳图谱中表现一致。结论β-centractin 在负载高转移肝癌DC 中表达的下调与 DC 表型和功能缺陷相关,可能是造成肝癌免疫逃逸的机制之一。 翁永强 邱双健 汤钊猷 高强 王凯峰 宋丽杰 叶胜龙 刘银坤 樊嘉关键词:树突细胞 一种T淋巴细胞免疫功能重建模型的建立方法 本发明属生物组织细胞技术领域,具体涉及一种T淋巴细胞免疫功能重建模型的建立方法。本方法采用正常Balb/c小鼠的胸腺细胞建立在无胸腺的Balb/c nu/nu裸鼠体内,通过提取小鼠T淋巴细胞;采用裸鼠尾静脉多次注射T淋巴... 叶胜龙 王凯峰 宋丽杰文献传递 肝癌转移抑制基因在8p21.1-23.1染色体上的功能定位 2008年 目的:分析人类染色体8p21.1-23.1上肝癌转移抑制基因相关染色体缺失状况,为进一步寻找克隆可能的肝癌转移抑制基因奠定基础.方法:从NCBI的UniSTS数据库查询STS的引物序列,以微细胞杂交克隆DNA为模板(A9/C5F-1和A9/C5F-2为转移不抑制组,A9/C5F-4、A9/C5F-8和A9/C5F-10为转移抑制组)进行STS-PCR扩增.结果:人类染色体8p上D8S552(12786562-12786681),D8S1733(22576582-22576836),D8S1734(22851217-22851336),D8S254(16652480-16652550)及D8S1973(28681110-28681363)等STS位点所在区域在转移抑制组杂交克隆(A9/C5F-4,A9/C5F-8,A9/C5F-10)存在STS位点的不同程度的获得和转移不抑制组杂交克隆组(A9/C5F-1,A9/C5F-2)STS位点的缺失.结论:D8S552-D8S1973所在的人类染色体8p21.1-23.1区域可能存在肝癌转移抑制基因. 宋丽杰 叶胜龙 王凯峰 刘虎 梁春敏 孙瑞霞 赵燕 汤钊猷关键词:肝细胞癌 转移抑制基因 DLC-1基因表达与HCCLM3细胞基质金属蛋白酶分泌相关性的研究 2008年 目的:观察DLC-1蛋白表达对肝癌高转移细胞系HCCLM3细胞基质金属酶分泌的影响,进一步研究DLC-1基因在肝细胞癌转移复发中的作用。方法:构建pcDNA3.1(-)-DLC-1重组表达质粒,用脂质体转染方法转染肝癌高转移细胞系HCCLM3,通过ELISA、明胶酶谱方法,研究重组质粒转染后对HCCLM3细胞基质金属蛋白酶分泌的影响。结果:成功构建pcDNA3.1(-)-DLC-1重组质粒后转染高转移肝癌细胞系,重组质粒转染组HC-CLM3细胞培养上清中MMP-2和MMP-9分别为(46.887±2.03)和(34.683±1.98)ng/mL含量低于未处理的HC-CLM3细胞组〔(47.172±2.12)和(34.468±2.54)ng/mL〕和空质粒转染组〔(35.528±2.89)和(31.542±2.38)ng/mL〕,其中MMP-2的降低差异有统计学意义。结论:DLC-1基因表达可降低细胞基质金属蛋白酶的分泌,与肝细胞癌的侵袭转移密切相关,可能是肝癌的转移抑制相关基因之一。 宋丽杰 叶胜龙 王凯峰 刘虎 梁春敏 孙瑞霞 赵燕关键词:肝细胞 DLC-1 肿瘤侵袭 肿瘤转移 基质金属蛋白酶类 不同转移潜能的小鼠肝癌淋巴道转移和淋巴管生成的研究 被引量:7 2006年 目的探讨小鼠淋巴道高、低转移潜能的肝癌细胞的体内淋巴道转移状况和淋巴管生成对淋巴道转移的影响。方法将淋巴道高、低转移潜能的肝癌细胞接种于Balb/c小鼠,观察成瘤及转移情况;对肿瘤组织进行淋巴管染色,观察淋巴管生成情况。另取高、低转移潜能的细胞株进行体外淋巴管生成实验并进行小鼠肿瘤转移基因芯片检测,对血管内皮细胞生长因子C、D(VEGF—C、D)进行半定量逆转录聚会酶链反应及实时定量聚合酶链反应分析。结果高、低转移细胞在小鼠髂总动脉旁、肾门淋巴结的转移差异有统计学意义(P=0.018)。高转移潜能组诱导淋巴管生成的数量大于低转移组和对照组(P=0.032)。高转移组的CD44、E-cadherin、HER2/neu、H—Ras、VEGF—C的表达均高于低转移组,nm23A、nm23—E4、 p16ink4a、CD61等均低于低转移组。半定量逆转录聚合酶链反应表明,高转移组VEGF-C高于低转移组, VEGF—D低于低转移组。实时定量聚合酶链反应分析高转移组的VEGF—D分泌显著小于低转移组,VEGF— C/VEGF—D在高转移组明显高于低转移组。结论肝癌的淋巴道转移与淋巴管生成有关,VEGF—C、D相关基因表达的改变影响淋巴管生成。VEGF—C/VEGF—D比值可能是有效判断并影响肝癌淋巴道转移潜能的指标之一。 王凯峰 叶胜龙 宋丽杰 翁永强 梁春敏 赵燕 高东梅 汤钊猷关键词:肿瘤转移 小鼠