王卓聪
- 作品数：11 被引量：33H指数：4
- 供职机构：吉林农业大学中药材学院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金引进国际先进农业科技计划更多>>
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- 狐源犬瘟热病毒的分离及RT-PCR鉴定被引量：7
- 2006年
- 为开展犬瘟热疫苗研究的前期工作,采用Vero细胞分离病毒的方法,选择保守基因N基因做RT-PCR鉴定,结果表明,该方法可成功分离出病毒并扩增出861 bp片段,与预计的片段大小一致。
- 宗春苗王全凯王卓聪苏凤艳
- 关键词：犬瘟热病毒逆转录多聚酶链式反应
- 水貂株犬瘟热病毒F基因工程疫苗的免疫特性研究被引量：5
- 2010年
- 为了了解水貂株犬瘟热病毒F基因工程疫苗的免疫特性,实验将真核重组表达质粒pcDNA3.1-CDVF肌注免疫日本大耳白兔进行免疫,同时设置pcDNA3.1(+)空载体、生理盐水和犬瘟热弱毒疫苗阳性对照组。间接ELISA法检测结果显示,重组表达质粒免疫在家兔体内产生了针对CDV的特异性抗体,且抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,体液免疫水平显著高于生理盐水组和空载体组,但不及弱毒疫苗对照组。淋巴细胞转化试验结果表明,重组表达质粒免疫组产生了细胞免疫,但低于弱毒疫苗组。
- 苏凤艳宗春苗王卓聪王春雨王全凯
- 关键词：水貂犬瘟热F基因基因工程疫苗
- 水貂株犬瘟热病毒融合蛋白基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2008年
- 以犬瘟热病毒水貂分离株RNA为模板,经RT-PCR反应,扩增出融合蛋白基因的1053bp DNA片段,通过T-A克隆技术,成功构建克隆载体PMD-18T/F。序列分析表明:分离株与01-2689株、2544-Han95株、A75-17株、DOGDK91C株、00-2601株、ONP株、PDV-2株核苷酸序列同源性分别为94.3%、93.5%、94.4%、93.6%9、5.3%、97.3%和94.5%;氨基酸序列同源性分别为97.2%、96.6%、97.4%、97.4%、97.4%、97.2%和98.0%。抗原指数分析表明分离株与疫苗ONP株、强毒A75-17株在40-50位氨基酸间存在明显差异。
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- 关键词：水貂犬瘟热病毒融合蛋白基因克隆
- 犬瘟热病毒水貂株的分离与鉴定被引量：11
- 2010年
- 从疑似犬瘟热病死水貂的肝脏中分离出1株病毒,并进行了系统的鉴定。结果表明:该毒株接种于Vero传代细胞后,出现了典型而有规律的病变;其病毒理化特性与犬瘟热病毒相同;致细胞病变作用可被兔抗CDV阳性血清阻断;间接免疫荧光试验表明接种病毒的BHK-21细胞出现特异性的亮绿色荧光,而正常细胞则未见绿色荧光;对提取接种病料后的Vero细胞培养物中的总RNA进行RT-PCR扩增,得到了324bp和1053bp的目的片段,证明该毒株为CDV。
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- 关键词：水貂犬瘟热
- 犬瘟热病毒水貂分离株H基因的遗传多样性分析被引量：4
- 2009年
- 以犬瘟热病毒水貂分离株的RNA为模板,对分离株的H基因进行RT-PCR扩增,扩增产物纯化后与pMD-18T SimpleVector连接,成功地构建了克隆质粒pMD-18T-CDVH。序列分析表明,分离株H基因由1596 bp组成,编码532个氨基酸,含有5个潜在的N-联糖基化位点,12个半胱氨酸残基。与已发表的24株CDV毒株进行同源性比较,核苷酸序列同源性在90.7%～98.6%之间;推导的氨基酸序列同源性在89.9%～97.0%之间。与Onderstepoort、Convac、Hamatsu、A75/17、TN株相比,根据推导的氨基酸序列比较分析表明,N-联糖基化位点的数目与位置均存在差别。聚类分析结果表明分离株与Snyder Hill毒株的亲缘关系最近,二者与疫苗株Onderstepoort和Convac具有较高的同源性,组成一组,而与标准野毒强毒株Hamatsu的亲缘关系较远。
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- 关键词：水貂犬瘟热病毒H基因
- 水貂源犬瘟热病毒F基因真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2007年
- 通过T-A克隆技术,成功地构建了克隆载体PMD-18T-CDVF,用KpnI和BamHI双酶切克隆质粒PMD-18T-CDVF后,回收F基因,并将此基因定向克隆至相同双酶切回收后的pcDNA3.1真核表达载体中,获得重组质粒pcDNA3.1-CDVF。经DNA测序、限制性内切酶分析和PCR鉴定,证实成功地构建了重组质粒,从而为研究犬瘟热新型疫苗奠定了基础。
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- 关键词：水貂犬瘟热病毒F基因真核表达载体
- 犬瘟热病毒疫苗株附着蛋白基因的克隆及同源性比较被引量：2
- 2006年
- 根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考株Ondetstepoort的序列设计1对引物,以犬瘟热病毒疫苗株感染Vero细胞总RNA为模板,利用RT-PCR扩增出附着蛋白基因843 bp片段,将这个片段连接到pMD18-T载体上,经过PCR鉴定、酶切鉴定得到1个阳性克隆,将阳性质粒进行序列测定,结果表明,该片段与Onderstepoort株核苷酸同源性为95.9%。从基因角度为犬瘟热的预防、诊断和治疗提供理论依据。
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- 关键词：犬瘟热病毒基因克隆
- 水貂犬瘟热病毒F基因的克隆及序列分析和表达
- 犬瘟热(Canine Distemper,CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染引起的一种急性、高度接触性传染性疾病，是当前我国对养犬业、毛皮动物养殖业危害最大的疫病之一。常规弱毒疫苗虽然在CD防控中发挥了非常重要的作用，但...
- 王卓聪
- 关键词：犬瘟热病毒基因克隆真核表达基因工程疫苗
- 文献传递
- 水貂源犬瘟热病毒的分离鉴定被引量：6
- 2006年
- 利用Vero传代细胞从病死水貂肝脏中分离获得1株病毒。该毒株可使培养细胞出现明显的细胞病变(CPE)。以提取病毒感染细胞总RNA为模板进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),结果扩增出的基因片段大小与预期值相符。根据病毒的致细胞病变特征和RT-PCR鉴定结果,确证该毒株为犬瘟热病毒。
- 苏凤艳宗春苗王卓聪丁庆东王全凯
- 关键词：水貂犬瘟热病毒RT-PCR
- 犬瘟热病毒水貂分离株F基因真核表达载体的构建与表达
- 2007年
- 为了构建犬瘟热病毒F基因真核表达载体,利用RT-PCR方法扩增出水貂源犬瘟热病毒分离株的F基因,将其克隆至pMD-18T载体上,用BamHⅠ和KpnⅠ进行双酶切,回收目的基因。将目的基因亚克隆至pcD-NA3.1(+)中,获得真核重组质粒pcDNA3.1-CDVF。通过脂质体介导法将pcDNA3.1-CDVF转染至BHK-21细胞中,并利用间接免疫荧光试验和RT-PCR法检测pcDNA3.1-CDVF在BHK-21细胞中的表达情况。结果表明,真核重组表达质粒pcDNA3.1-CDVF构建成功,F基因可在BHK-21细胞中表达。
- 苏凤艳宗春苗王卓聪丁庆东王全凯
- 关键词：水貂犬瘟热病毒F基因真核表达
