王甲业
- 作品数：27 被引量：33H指数：4
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- 相关领域：医药卫生文化科学农业科学生物学更多>>
- 蛋白质三聚体化模序及其应用
- 本发明公开了一种蛋白质三聚体化模序及其应用。该三聚体化模序的氨基酸序列为SEQ ID No：2所示。本发明蛋白质三聚化模序根据天然三聚体卷曲螺旋的序列特征而设计，序列更加优化。在设计蛋白质三聚化模序的过程中，充分考虑了各...
- 凌虹王甲业钟国才周海舟李妍
- 高分泌性三聚体蛋白的表达方法
- 本发明公开了一种高分泌性三聚体蛋白的表达方法。该表达方法包括：(1)将tPA信号肽基因序列、目的蛋白基因和蛋白质三聚化模序基因序列连接在一起；其中，目的蛋白的N末端与tPA信号肽相连，其C末端与蛋白质三聚化模序蛋白N末端...
- 凌虹王甲业陈文江李妍杨丹程德春
- I型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点突变对感染细胞能力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨I型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点发生突变对CCR5及CXCR4嗜性毒株感染靶细胞能力的影响。方法根据ADA株为CCR5嗜性毒株，只具有感染CCR5细胞的能力；HXB2株为CXCR4嗜性毒株，只具有感染CXCR4细胞的能力，通过重叠延伸剪接的方法，构建CCR5嗜性及CXCR4嗜性毒株V4区丙氨酸替换突变体。将突变体表达载体与带有荧光报告基因的HIV骨架基因表达载体共同转染真核细胞，制备假病毒颗粒。采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测假病毒中HIV-1P24抗原，对假病毒进行定量。将假病毒按20、40ng感染U87．CD4.CCR5和U87．CD4．CXCR4细胞，以野生株ADA和HXB2毒株为对照，通过荧光素酶（RLU）测定，检测HIV-1V4区氨基酸386—417位点各突变体假病毒对细胞的感染能力。结果成功构建HIV-1ADA和HXB2株V4区丙氨酸替换突变体，各获得10株突变体。在ADA株和HXB2株，389—391及414—417位点均发生丙氨酸替换突变体，无论是用20ng，还是40ng假病毒感染，对CCR5及CXCR4细胞的感染能力均完全丧失[（0±0）％]；在ADA株，400-403和408--410位点发生丙氨酸替换突变体，当假病毒在20ng时，感染细胞的能力达到了（124±35）％和（182±29）％；在40ng时，感染能力达到了（127±8）％和（134±16）％；在HXB2株，395—397位点发生丙氨酸替换突变体，当假病毒在20ng时，感染能力达到了（144±42）％；在40ng时，感染能力达到了（121±18）％；两株在其他位点发生丙氨酸替换突变体，但仅保留部分感染细胞能力（15％-84％）。结论HIV—1包膜糖蛋白V4区389—391及414—417位点氨基酸发生丙氨酸突变．使病毒完全丧失感染靶细胞能力。
- 张唯哲李妍王甲业杨丹王璐晶凌虹
- 关键词：I型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白点突变
- 外源性组织型纤溶酶原激活物信号肽突变体增强蛋白质在哺乳细胞中的表达及分泌被引量：3
- 2010年
- 目的 比较不同tPA信号肽突变体对目的蛋白表达和分泌水平的影响,优化并筛选通用性外源信号肽序列.方法 通过定点突变技术将人类组织型纤溶酶原激活物（tPA）的信号肽第22位氨基酸由脯氨酸（P）突变为丙氨酸（tPA22P/A）或甘氨酸（tPA22P/G）,并将突变前后的3种信号肽序列分别插入HIV-1 p24基因的N末端,构建不同的p24蛋白表达载体,这些重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞,转染72 h后,通过SDS-PAGE与western blot检测并比较各组培养上清和细胞中p24蛋白的表达水平.结果 成功构建了3个p24蛋白的真核表达载体P24T.tPA、P24T.tPA22P/A和P24T.tPA22P/G,经序列测定证实基因序列和方向与预期相符;重组载体转染293T细胞72 h后均检测到分泌性p24的表达.与P24T.tPA组相比,P24T.tPA22P/A转染组培养上清中和细胞内p24蛋白表达水平分别提高62%和29%,P24T.tPA22P/G转染组分别提高8%和6%.结论 tPA信号肽22位由脯氨酸突变为丙氨酸或甘氨酸,这就提高了目的蛋白的表达和分泌水平,为优化外源蛋白在哺乳细胞中的表达和分泌提供了实验基础.
- 王甲业陈文江李妍魏国超程德春凌虹
- 关键词：组织型纤溶酶原激活物信号肽哺乳细胞
- 诱导针对中国流行HIV-1交叉抗体反应的免疫原筛选、免疫策略及TFH辅助抗体产生机制研究
- 研究背景:HIV-1包膜免疫原难以诱导有效中和抗体,但其免疫学机制尚不清楚.这已经成为HIV-1疫苗研制的主要障碍.我国流行HIV-1主要亚型为B'、CRF BC和CRF 01AE.分析流行毒株感染人群的抗体产生情况,明...
- 王甲业李妍于昊彤刘松任彩云田丹郭彩霞陈文江庄敏凌虹
- 关键词：HIV-1三聚体
- HIV-1 gp120 V4区在病毒侵入靶细胞中的作用及机制研究
- 李妍杨丹王甲业张唯哲王路晶程德春服部俊夫凌虹
- Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白CD4结合位点修饰诱导小鼠体液免疫反应的实验研究
- 2015年
- 目的 探讨Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白（Env） gp120的CD4结合位点（CD4BS）核心区第423、425和431位氨基酸三联突变ING/MKE对其诱导体液免疫反应的影响.方法 构建HIV-1原代毒株06044包膜gp120 ING/MKE三联突变表达载体pcT22-06044 gp120T-ING/MKE（gp120T-ING/MKE）,在体外转染的HEK293T细胞表达三聚化野生型gp120Twt蛋白和突变体gp120T-ING/MKE蛋白.免疫BALB/c小鼠后检测结合抗体、中和抗体和骨髓抗原特异性浆细胞.结果 获得真核表达载体gp120T-ING/MKE.转染后,在293T细胞培养上清中检测到了三聚化重组蛋白.末次免疫后14 d,gp120Twt和gp120T-ING/MKE免疫血清中结合抗体滴度都大于1∶1 000,但两组血清抗体滴度无显著差异.突变体组骨髓特异性浆细胞分泌水平和非特异浆细胞水平均低于野生型gp120免疫组.野生型和突变体免疫诱导血清抗体的中和活性均不强.结论 HIV-1包膜蛋白CD4结合区423、425和431位三联突变没有改善gp120蛋白的免疫原性.
- 郭彩霞王甲业于昊彤田丹庄敏凌虹
- 关键词：人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白免疫原性
- 原代HIV-1包膜糖蛋白修饰体诱导小鼠产生高滴度gp120抗体被引量：4
- 2011年
- 目的探索1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白修饰对包膜免疫原性的的影响。方法通过PCR扩增获得原代HIV-106044株包膜gp120基因及其突变体gp120／W427S基因，并构建gp120三聚体蛋白真核表达载体pcT—gp120和pcT—gp120／W427S，重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞，表达gp120三聚体蛋白。采取DNA初免-蛋白凝胶加强的策略免疫BALB／c小鼠，末次免疫后10d检测免疫血清中结合抗体的水平。结果获得真核表达载体pcT—gp120和pcT—gp120／W427S及gp120三聚体蛋白；末次免疫后10d，gp120免疫血清中结合抗体滴度大于1：1000，gp120／W427S免疫血清中结合抗体滴度大于1：10000，而且，gp120／W427S免疫组血清抗体结合活性显著高于gp120免疫组血清。结论HIV-1包膜第427位色氨酸突变为丝氨酸，改善了包膜的免疫原性，为包膜免疫原的设计和优化提供了新的线索。
- 凌虹王甲业王开利李妍陈文江杨丹田丹焦娜周海舟
- 关键词：GP120BALB/C小鼠
- 基于蛋白质三聚化模序的高分泌性三聚体蛋白的表达方法
- 本发明公开了一种高分泌性三聚体蛋白的表达方法。该表达方法包括：(1)将tPA信号肽基因序列、目的蛋白基因和蛋白质三聚化模序基因序列连接在一起；其中，目的蛋白的N末端与tPA信号肽相连，其C末端与蛋白质三聚化模序蛋白N末端...
- 凌虹王甲业李妍陈文江杨丹程德春
- 文献传递
- HIV-1包膜糖蛋白V1V2区中和表位及疫苗的研究进展
- 2020年
- 获得性免疫缺陷综合症(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)是由I型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type I,HIV-1)感染引起的一类疾病。HIV-1在全球范围广泛传播,破坏免疫系统,一旦感染终身带毒,致死率高。在已经完成的Ⅲ期HIV-1疫苗效力试验中,RV144是唯一显示出免疫保护效果的疫苗,且免疫保护效果与HIV-1病毒包膜gp120 V1V2区域的抗体相关。HIV-1包膜V1V2的氨基酸序列及结构赋予病毒重要功能,包括进入靶细胞、诱导广泛交叉中和抗体及与α4β7整合素分子的相互作用等。根据V1V2结构域特征设计免疫原是研制疫苗的重要策略。现就HIV-1包膜V1V2区结构特征、中和表位及疫苗的研究进展作综述。
- 卢宇萌杨德辉王甲业徐鑫钰凌虹
- 关键词：人类免疫缺陷病毒-1表位疫苗
