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小鼠sIL-13Rα2基因的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：2: 2009年; 目的克隆并在毕赤酵母中表达小鼠sIL-13Rα2基因。方法提取小鼠脾脏细胞总RNA,逆转录为cDNA,应用分段PCR的方法将sIL-13Rα2基因定向克隆至酵母表达质粒pPICZα-A,并转染至毕赤酵母GS115(his4)菌株,进行目的蛋白的诱导表达。表达的蛋白经SDS-PAGE和Western blot,进行分析。结果重组表达质粒pPICZα-A/sIL-13Rα2经酶切鉴定,表明目的基因为正向插入。重组酵母菌的PCR鉴定结果显示,目的基因片段已插入酵母染色体中。目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的30%,每升发酵液约含2mg重组蛋白。重组蛋白可与兔抗小鼠sIL-13Rα2单抗发生特异性反应。结论已成功克隆并在毕赤酵母中表达了小鼠sIL-13Rα2基因,为应用sIL-13Rα2蛋白治疗哮喘及其他过敏性疾病奠定了基础。; 蔡累宋爱玲岳燕王伟华秦鑫张英起李志奎; 关键词：毕赤酵母克隆

PD-1核心启动子的获得及活性鉴定: 2010年; 目的:构建PD-1(programmed death receptor 1)全长启动子及不同截短体的报告基因,并对其转录活性进行检测。方法:通过PCR及双酶切方法,从人全血基因组DNA中获得PD-1基因编码序列,包含不同长度碱基的PD-1启动子序列,分别克隆到报告基因pGL3-Basic载体上,构建8个不同长度PD-1启动子的报告基因;用脂质体转染法将8个报告基因分别转染至Jurkat细胞系;采用双萤光素酶报告基因系统评估PD-1启动子的活性。结果:经PCR方法扩增出大小分别为1650、1450、1250、1128、874、674、474和274 bp的不同长度的PD-1启动子序列,测序正确(与GenBank报道一致),酶切鉴定正确;瞬时转染Jurkat细胞系后经报告基因检测,8个启动子均具有转录活性。结论:构建了PD-1启动子的报告基因,并证实均有转录活性,且以pGL3-1128活性最高,为PD-1的核心启动子,为进一步研究PD-1的转录调控奠定了实验基础。; 侯建伟秦鑫李晶舒震陈霖徐玉金赵薇张伟张英起; 关键词：PD-1 核心启动子转录调控

应用酵母双杂交系统筛选Foxp3△2相互作用蛋白被引量：1: 2010年; 目的：应用酵母双杂交系统从人外周血白细胞cDNA文库中筛选与转录因子Foxp3相互作用的蛋白，为进一步研究Foxp3的转录调控机制奠定基础。方法：首先构建pG—BKT7／-Foxp3△2酵母双杂交诱饵载体，转化AH109酵母细胞，检测其毒性及自激活作用；然后将诱饵质粒与人外周血白细胞eDNA文库共转AH109酵母细胞，筛选了与Foxp3△2存在相互作用的蛋白。结果：成功构建了pGBKT7-Foxp3△2酵母表达载体，经转染AHl09酵母细胞，无有毒性，无自激活作用。获得了40个阳性克隆，经生物信息学分析，其中9个具有开放读框。结论：应用酵母双杂交技术筛选出一组可与Foxp3△2相互作用的候选蛋白，为进一步研究Foxp3△2功能奠定了基础。; 徐玉金姜昌丽张存秦鑫李萌郝强李维娜张伟张英起; 关键词：酵母双杂交相互作用蛋白

重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌高密度发酵: 为实现重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌E.coli DH5/pKKH-BLyS的高密度、高表达发酵,首先进行了培养条件的摸索,确定了该工程菌的最佳培养pH值、诱导剂IPTG的浓度、诱导的最佳时间段、溶氧范围以及补料的流加方...; 薛晓畅包春杰韩苇秦鑫张存曹筑荣李维娜赵玉红张英起; 关键词：B淋巴细胞刺激因子重组大肠杆菌高密度发酵; 文献传递

重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌高密度发酵: 为实现重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌E.coli DH5/pKKH-BLyS的高密度、高表达发酵，首先进行了培养条件的摸索，确定了该工程菌的最佳培养pH值、诱导剂IPTG的浓度、诱导的最佳时间段、溶氧范围以及补料的流加方...; 薛晓畅包春杰韩苇秦鑫张存曹筑荣李维娜赵玉红张英起; 关键词：B淋巴细胞刺激因子重组大肠杆菌高密度发酵; 文献传递

噬菌体呈现技术及其应用: 文章从构建噬菌抗体库及在药物设计中的应用,蛋白与蛋白间的相互作用,对蛋白功能性表位的图谱分析等几方面对噬菌体呈现技术的应用进行了论述.; 秦鑫颜真张英起; 关键词：基因工程基因载体噬菌体外源多肽蛋白; 文献传递

重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌生物学特性的稳定性被引量：2: 2008年; 目的观察重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌pKKH-BLyS/DH5α生物学特性的稳定性。方法工程菌连续传50代,每10代进行目的蛋白表达水平、质粒性状检测、透射电镜观察、革兰染色及各项生化检查,观察工程菌生物学特性的稳定性。结果0、10、20、30、40和50代工程菌之间目的蛋白的表达量无明显差异,基本维持在40%左右;双酶切、PCR及测序结果均与原代质粒相符;革兰染色均呈阴性;透射电镜观察及各项生化反应均呈现典型的大肠杆菌特性。结论该菌种生物学特性稳定,可作为生产用菌种。; 薛晓畅李萌秦鑫李维娜郝强包春杰韩苇张英起; 关键词：B淋巴细胞刺激因子生物学特性稳定性

小鼠sIL-13Rα2在毕赤酵母菌中的表达及初步活性分析被引量：3: 2009年; 目的:克隆并在毕赤酵母中表达小鼠sIL-13Rα2基因。方法:从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,应用分段PCR的方法将sIL-13Rα2基因定向克隆至酵母表达质粒pPICZα-A,并转染至毕赤酵母菌表达系统进行目的蛋白表达。目的蛋白行SDS-PAGE和Western分析。结果:克隆出可溶性IL-13Rα2目的基因片段,构建重组pPICZα-A/sIL-13 Rα2表达载体,成功转染至毕氏酵母菌,诱导表达出可溶性IL-13Rα2目的蛋白。结论:已成功克隆并在毕赤酵母中表达了小鼠可溶性IL-13Rα2目的基因,为应用sIL-13Rα2蛋白治疗哮喘及其他过敏性疾病奠定了基础。; 蔡累宋爱玲岳艳王伟华秦鑫张英起李志奎; 关键词：克隆毕赤酵母菌

多肽导向技术及其应用: ＜正＞导向性治疗策略的理论基础是相对于正常的组织,病灶部位（特别是肿瘤）具有自己独特的表面分子,这些分子不仅是相对特异的,而且常常是高表达的,若给药物连接上这些分; 秦鑫王慧孟洁如马楠颜真韩苇张英起; 文献传递

多肽导向技术及其应用: 利用天然和/或从噬菌体随即多肽库中筛选得到的低分子量多肽取代抗体作为导向分子是近年来发展起来的一项新的导向药物制备技术。与抗体导向相比，多肽导向具有筛选简便、容易制备、渗透性强等诸多优点。已在肿瘤诊断、治疗领域显示了良好...; 秦鑫王慧孟洁如马楠颜真韩苇张英起; 关键词：药物制备药学实验导向药物; 文献传递

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