翟超
- 作品数：4 被引量：42H指数：2
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- 相关领域：生物学更多>>
- 碱性果胶裂解酶基因pelA在E.coli中的表达和酶学性质研究被引量：2
- 2001年
- 根据核苷酸序列分析结果设计引物 ,通过 PCR的方法 ,在嗜碱芽孢杆菌 NTT3 3的总 DNA和 p13 5 0中分别扩增到预计大小的片段 ,证明 p13 5 0中的外源 DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌 NTT3 3 .同时也获得了含有pel A完整 ORF的 DNA片段 .经计算 ,该基因表达的成熟蛋白质的分子量为 3 4 .76× 10 3.构建表达载体 p BV2 2 0 -pel,在 E.coli DH5α中进行表达 .SDS- PAGE检测发现 ,表达的蛋白质分子的大小约为 3 5× 10 3,与预测的相符 .初步研究其酶学性质发现 ,该酶在 p H 9.0～ p H10 .0 ,4 5°C的条件下有较高的活性 ,而且必需 Ca2 + 参与反应 .
- 翟超曹军卫
- 关键词：嗜碱芽孢杆菌DNA片段酶活性
- 米曲霉菌体细胞固定化及DL-蛋氨酸的光学拆分被引量：12
- 2000年
- 用亚硝基胍对产氨基酰化酶的米曲霉 ( Aspergillus oryzae) 30 42进行诱变 ,经过筛选获得诱变菌株30 42 - 5 ,再进行自然分离后得到了一株高产菌株 30 42 - 5 - 5 a,其自由酶活力提高了 2 15 .7% .采用此菌株进行了固定化细胞酶法拆分 DL -蛋氨酸 ( DL - Met)的研究 ,得到了最好的固定化条件为 8%明胶包埋 ,0 .1%戊二醛交联 12 h.制得的固定化细胞酶活力为 81.99u/ g.固定化细胞酶的最适作用温度为 6 5℃ ,最适作用 p H为 8.0 .用固定化细胞装柱 ,将连续拆分得到的产物用离子交换法进行分离精制 ,L -蛋氨酸盐酸盐的得率为理论产值的 6 9.4%
- 刘阳曹军卫翟超
- 关键词：米曲霉氨基酰化酶固定化
- 枯草芽孢杆菌渗透压调节基因proB的克隆和表达被引量：26
- 2002年
- 用PCR扩增的方法从耐盐的枯草杆菌中克隆出一个 1 3kb长的DNA片段 ,经功能检测 ,证明正向插入片段与大肠杆菌的脯氨酸营养缺陷特性 (proB- )能够营养互补。含有该重组质粒的大肠杆菌DH5α在基本培养基上的耐盐能力从 2 %提高至 4%。通过引物步行法测定了该插入片段的核苷酸序列。利用DNAsis软件进行序列分析发现 ,该片段第 1 2 2～ 1 2 3 5bp核苷酸编码一个由 3 70个氨基酸组成的蛋白质分子 ,其上游存在非典型的 - 1 0区 ,典型的 -3 5区和核糖体结合位点 ,起始密码子处有最佳翻译起始效率的侧翼核苷酸序列。将其与Genebank中的已知基因的序列和编码的氨基酸序列进行同源性比较 ,结果表明该片段与枯草杆菌 1 6 8的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性分别为 81 %和 90 %。证明该基因确实是一个proB基因。通过与三十个不同种属微芽生物proB基因的氨基酸序列比较 。
- 张小青曹军卫翟超陈建军
- 关键词：克隆
- 碱性果胶裂解酶基因的克隆及核苷酸序列分析被引量：2
- 2001年
- 以 p Bluescript KS(M13- )质粒作为载体构建嗜碱芽孢杆菌 NTT33的基因组文库 .在 YC平板上筛选到一株含果胶裂解酶 (pectate lyase,pel)基因的大肠杆菌阳性克隆子 .酶切后 ,电泳鉴定 ,插入的外源片段约 6 .5kb.通过引物步行法测定了含有该基因的约 3kb左右的外源 DNA片段的核苷酸序列 .经 PCgene软件分析发现第 15 0～ 116 0 bp编码一个由 337个氨基酸组成的蛋白质分子 .根据果胶裂解酶的等电点分类方法推断 ,其属于Pel A.将其与 Genebank中现有的基因编码的氨基酸序列进行同源比较 ,发现它与 Bacillus sp.Ksm SM- P15的Pel E和 Azospirillum irakense的 Pel A的同源性分别为 38%和 32 % .这 3种酶与其它果胶裂解酶的基因同源性很低 。
- 翟超曹军卫
- 关键词：嗜碱芽孢杆菌核苷酸序列分析基因克隆
