胡海燕
- 作品数：38 被引量：94H指数：6
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- 相关领域：医药卫生生物学理学天文地球更多>>
- rAd-ODC/Ex3as对前列腺癌PC-3细胞抑制作用的研究
- 2004年
- 目的:探讨重组腺病毒rAd鄄ODC/Ex3as对前列腺癌细胞的体外抑制作用及对前列腺癌的作用机制。方法:利用报告基因GFP测定病毒感染效率,用WesternBlot检测rAd鄄ODC/Ex3as是否抑制鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达,采用MTT法、Matrigeal侵袭实验观察rAd鄄ODC/Ex3as对前列腺癌细胞PC鄄3恶性表型的影响,并用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果:当MOI为50时,腺病毒感染PC鄄3细胞的效率约为70%,WesternBlot证实rAd鄄ODC/Ex3as可抑制ODC基因的表达。rAd鄄ODC/Ex3as以20MOI感染PC鄄3细胞可明显抑制其生长增殖和侵袭性穴P<0.01雪,流式细胞仪检测结果证实rAd鄄ODC/Ex3as可引起PC鄄3细胞G1期阻滞,但并未引起凋亡。结论:rAd鄄ODC/Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达,并可抑制前列腺癌细胞PC鄄3的生长与侵袭,诱导其发生G1期阻滞,有望成为治疗前列腺癌的基因药物。
- 张岩刘贤锡胡海燕王晓明张冰龚磊
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶PC-3细胞
- 含变形链球菌PAcA基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PAcA的构建与鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 :构建含有免疫刺激序列、可防止变形链球菌在牙面粘附的DNA疫苗。方法 :利用PCR技术由质粒pPAcA CTA2 B扩增编码PAcA的DNA片段 ;通过T A克隆技术将目的DNA片段克隆于载体pMD1 8 T ,鉴定插入方向后 ,将目的DNA从载体上释放 ,再克隆于含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出用作防龋疫苗的真核表达质粒pcDNA3 .1 PAcA。结果 :通过对重组质粒pcDNA3 .1 PAcA进行酶切图谱和DNA序列测定分析 ,证明真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA构建成功、阅读框架正确。结论 :利用T A克隆等技术可成功将编码PAcA的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA。
- 杨小青姜广水张兆莲王晶杨丕山刘贤锡卞继峰胡海燕耿昭卢翌
- 关键词：疫苗构建CPG基元变形链球菌
- 肝内胆管癌hTR反义RNA及锤头状核酶基因真核表达载体的构建
- 2002年
- 用反转录PCR法 ,调取肝内胆管癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因 ,并针对其序列设计反义RNA封闭基因及锤头状核酶切割基因序列 ,将其构建入真核表达载体pTriEx 4内。根据hTRcDNA序列设计引物 ,经RT PCR法从体外培养的肝内胆管癌细胞内调取hTR模板区基因 ,根据其测序结果 ,合成反义RNA基因及核酶基因 ,与经相应酶切的真核表达载体连接 ,酶切鉴定重组体的正确性。经RT PCR从细胞内调出 68bp序列 ,与hTRcDNA比较 ,与模板区域碱基序列一致 ,反义RNA与核酶基因重组子经酶切鉴定序列正确。肝内胆管癌细胞内端粒酶的活性明显增高 ,RT PCR法可调出其hTR基因有效片段 ;
- 靳斌姜希宏刘贤锡刘博刘师莲王伟胡海燕卢翌耿昭
- 关键词：真核表达载体真核表达反转录聚合酶链反应
- 弓形虫表面抗原P22、P30复合基因在原核细胞中表达的研究被引量：10
- 2002年
- 目的 :对含有P2 2、P30复合基因的重组菌进行IPTG诱导表达 ,进而检测复合基因的融合表达产物的免疫活性。方法 :用IPTG对工程菌进行诱导表达 ,表达产物行SDS PAGE蛋白凝胶电泳及Western Blot免疫印记检测。结果 :蛋白电泳结果显示 ,阳性重组菌比阴性菌在 6 6 .5KDa位置上明显多一条带 ,此条带可与P30抗体结合并使免疫印记显示阳性结果。结论 :含有P2 2、P30基因片段的质粒重组体经诱导表达出融合蛋白 ,其内的组分蛋白P30具有与其相应抗体结合的能力。
- 古钦民王伟卞继峰丛华胡海燕何深一李瑛
- 关键词：弓形虫基因P30基因P22
- ODC单抗的制备及其在大肠癌检测中的应用被引量：1
- 2005年
- 目的:制备鸟氨酸脱羧酶(ODC)单克隆抗体并观察其在大肠癌检测中的意义。方法:以人ODC重组蛋白免疫小鼠,用杂交瘤细胞技术制备单克隆杂交瘤细胞,以ELISA和Westernblot法验证阳性单克隆细胞所产生的免疫球蛋白。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达水平。结果:筛选出稳定分泌抗ODC单抗的细胞株,ELISA检测证明其所分泌单抗属于IgG2a型。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达显示该单抗检测效果较好,大肠癌组织中ODC的表达水平明显高于正常组织(P<0.05)。结论:成功地制备出ODC单克隆抗体,为进一步研究ODC基因表达与大肠癌的发病机理及其诊断的关系打下了良好基础。
- 胡海燕姜春英张岩耿昭卢翌王晓明张冰刘贤锡
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶结直肠肿瘤杂交瘤
- 大肠癌鸟氨酸脱羧酶基因表达及临床意义研究被引量：10
- 2004年
- 目的 :研究鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因在结直肠癌中的表达 ,探讨其在大肠癌形成中的作用。方法 :建立测定ODC基因mRNA表达的逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)最适条件 ,在半定量水平测定 31例结直肠癌的癌旁正常组织和癌组织中的ODCmRNA表达的相对水平 ,观察其与临床病理学指标的关系。结果 :31例结直肠癌中ODC基因表达较癌旁正常组织高 ,差异显著 (P <0 .0 1) ,ODC基因表达在性别、病理类型之间差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ,在Dukes分期之间差异有显著意义 (P =0 .0 12 )。结论 :ODC在大肠癌组织中表达增高并与恶性程度呈正相关 ,提示ODC表达增加与大肠癌发生、浸润及转移有关 ,为大肠癌病因及诊断和治疗方法研究提供了实验依据。
- 孙爱华刘贤锡何庆泗刘传华胡海燕王伟张岩张冰
- 卵巢癌细胞侵袭转移过程中KAI1基因的表达及意义
- 2004年
- 目的:探讨卵巢癌细胞SKOV3侵袭转移过程中KAI1基因的表达及意义。方法:采用MTT法观察丁酸钠对细胞的抑制作用,形态学观察SKOV3药物作用后细胞超微结构的变化,及转移抑制基因KAI1的表达情况。结果:药物对卵巢癌SKOV3细胞的抑制率呈剂量依赖性,丁酸钠作用下细胞微绒毛减少变短、消失,KAI1基因免疫组化染色较对照组明显增强。结论:转移抑制基因KAI1在卵巢肿瘤侵袭转移中起着重要作用。
- 张丽娟汤春生胡海燕刘贤锡
- 关键词：基因KAI1卵巢肿瘤细胞系丁酸钠
- 减毒沙门氏细菌为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建被引量：7
- 2002年
- 目的 :构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗。方法 :设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir ,含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件 ,插入pTriEx真核启动子CMVIE下游 ,构建pCMVnir双启动子载体。将人乳头瘤病毒 16型L1L7,融合基因 ,插入pCMVnir,制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析检测Nir启动子的活性。结果 :经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析 ,成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质。结论 :成功构建了一种与胞内寄生细菌(减毒沙门氏细菌 )匹配的双启动子DNA疫苗新型载体 。
- 卞继峰于修平赵蔚明耿昭杨海宁于瑾李静胡海燕卢翌张茂修姜广水
- 关键词：人乳头状瘤病毒DNA疫苗沙门氏菌属
- 人ODC基因第三外显子反义RNA腺病毒载体的构建被引量：11
- 2003年
- 目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因第三外显子反义RNA的腺病毒载体。方法:RT-PCR方法克隆出人ODC基因第三外显子的片段,插入pMD18-T载体中,经SalⅠ、BglⅡ酶切,插入穿梭质粒pAd-Track-CMV形成重组质粒pAdTrack-CMV-ODCr。经PmeⅠ酶切线性化后,转入pAdesy-1细菌中与含腺病毒基因骨架的质粒pAdesy-1同源重组。将重组质粒pAdesy-ODCr经PacⅠ酶切后,转染293细胞包装成腺病毒颗粒,经荧光显微镜和PCR方法对重组腺病毒进行鉴定。结果:用RT-PCR方法从人前列腺癌组织中扩增出120bp的cDNA片段,经测序证实为ODC基因第三外显子的片段。重组质粒pAdTrack-CMV-ODCr转入pAdesy-1细菌中获得多个阳性克隆。重组质粒pAdesy-ODCr转染293细胞进行包装,经荧光显微镜观察可见其在293细胞中表达。进一步通过PCR法证实其含有目的基因。结论:成功地构建了ODC基因第三外显子反义RNA重组腺病毒载体,为研究其抗肿瘤的作用奠定了基础。
- 张岩刘贤锡胡海燕耿昭王晓明张冰
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶腺病毒载体反义RNA外显子
- EGF对前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的调控
- 2002年
- 目的 :探讨EGF诱导前列腺增殖的分子机理。方法 :以MTT法测定不同浓度表皮生长因子(EGF)对前列腺癌细胞PC 3的促增殖作用 ;以最适浓度EGF(5 0ng/ml)刺激该细胞 ,分别于 0、1、3、6、12、2 4h提取总RNA ,用斑点杂交法分析测定各组细胞中ODCmRNA丰度 ;用免疫组化及流式细胞术两种方法检测EGF刺激细胞后ODC蛋白表达量的变化。结果 :①EGF能促进PC 3细胞的增殖 ,而且随着EGF浓度的升高 ,细胞增殖活性增加 ;②斑点杂交显示 ,EGF刺激细胞后 3h ,ODCmRNA开始明显升高 ,12h达高峰 (约为 0h的 3.6 6倍 ) ,至 2 4h时有所降低 ;③免疫组化及流式细胞术检测显示 ,EGF刺激细胞 3d后ODC蛋白阳性细胞表达率明显升高。结论
- 刘贤锡迟伟玲刘师莲胡海燕刘传华耿昭
- 关键词：表皮生长因子鸟氨酸脱羧酶基因表达前列腺
