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构建Doxycycline/Mifepristone诱导过表达的带有荧光蛋白标记基因的双诱导表达载体: 本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种构建Doxycycline/Mifepristone诱导过表达的带有荧光蛋白标记基因的双诱导表达载体及构建方法及应用，所述表达载体系统核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中表...; 陈波马峰滕嘉雯; 文献传递

P21基因参与早期诱导RUNX1b过表达抑制人类造血发生: 2019年; 目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol/L)或不同浓度DOX(1、0.5、0.2、0.1μg/mL)诱导RUNX1b过表达时,以qRT-PCR技术检测P21与RUNX1b相对表达情况。利用基于转座子载体PiggyBac的PB-tet-on-OE真核诱导过表达系统,建立P21诱导过表达hES细胞系(CDKN1A/hESC)。分别在CDKN1A/hESC与AGM-S3共培养d0、d2、d4、d6添加DOX诱导P21过表达,培养8 d或14 d,通过流式细胞术(FACS)检测血细胞表面分子的变化情况,以判断诱导P21过表达对造血发生产生的影响。结果 qRT-PCR显示:P21表达量随着RUNX1b过表达上调,同时加入RepSox时表达基本处在正常水平,随着DOX浓度降低,RUNX1b与P21表达水平下降。在造血分化的早期,特别是共培养d0开始诱导P21过表达的共培养体系所产生的CD34^-CD43^+、CD34^-CD45^+与CD34^+CD45^+细胞群相较于对照分别降低了85%,94%和78%,当共培养d6后诱导P21过表达上述现象消失。结论 P21可能参与了由RUNX1b诱导过表达所引起的人类早期造血发生的抑制效应;早期诱导P21过表达明显抑制造血细胞产生。; 常晶滕嘉雯孙文翠曾加辉张勇刚潘旭周涯赖默温边国慧周琼秀刘嘉馨陈波马峰

构建强力霉素/米非司酮诱导过表达的带有荧光蛋白标记基因的双诱导表达载体: 本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种构建Doxycycline/Mifepristone诱导过表达的带有荧光蛋白标记基因的双诱导表达载体及构建方法及应用，所述表达载体系统核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中表...; 陈波马峰滕嘉雯; 文献传递

胶原支架促进人类多能干细胞向红细胞的诱导分化被引量：2: 2018年; 目的建立人胚胎干细胞（hESCs）来源的造血干/组细胞向红细胞分化的体外3D培养方法。方法hESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾区（AGM-S3）基质细胞共培养14 d后获得CD34^＋CD45^＋造血干/祖细胞,对获得的CD34^＋CD45^＋细胞扩增5 d后,以相同初始接种数量分别接种于胶原水凝胶、透明质酸水凝胶、Ⅰ型胶原蛋白构建的三维（3D）支架材料（简称胶原支架）中,在体外模拟骨髓微环境,做红细胞定向分化,以普通液体悬浮培养（简称液体培养）为对照,通过MGG染色、流式细胞术、免疫染色、qRT-PCR等手段分别对收获的细胞做形态学、红系特异性表面标志表达情况、红系细胞成熟程度以及红系细胞发育过程中相关基因的表达情况分析。结果红系定向分化14 d后,胶原支架中收获的总细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.50、1.19、1.33倍,GPA^＋CD71^＋细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.55、1.25及1.48倍;GPA^＋CD36^＋细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.65、1.07、1.36倍。结论利用Ⅰ型胶原蛋白构建的3D支架材料可模拟骨髓微环境,促进红细胞分化。; 王敏潘旭毛斌赖默温滕嘉雯陈谊金周琼秀马峰; 关键词：红细胞胶原支架

人诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞促进成体造血发生研究被引量：1: 2019年; 目的探讨人诱导性多能干细胞(hiPSCs)在神经分化因子作用下生成的间充质干细胞(N-MSCs)对成体造血的影响。方法 1)与神经发育相关的MSCs的获得:hiPSCs在向前脑类器官培养过程中分离纯化出1个性质稳定的细胞系,命名为N-MSCs,通过形态学观察、流式检测和脂肪、成骨、软骨细胞分化实验对其进行鉴定。2)N-MSCs对成体造血的影响:人胚胎干细胞(hESCs)与鼠AGM-S3细胞共培养获得的CD34^+细胞分别与AGM-S3、N-MSCs(2×10~4个)共培养,单独悬浮培养为对照组(CD34^+组,1×10~4个),流式检测关于造血干/祖细胞(CD34^+CD45^+)和巨噬细胞(Mφ)表面标记的变化。3)N-MSCs对人脐带血来源的巨噬细胞(CB-Mφ)的影响:Mφ分别与脐带MSCs(UC-MSCs)、N-MSCs(2.5×10~5个)在transwell中共培养,Mφ单独培养为对照组(5×10~5个),再用IL-4对Mφ做刺激试验。用MGG染色、流式检测、qRT-PCR等方法分析Mφ形态学、M2型Mφ相关表面标记CD206和IL-10基因表达情况。结果 CD34^+组及其分别与AGM-S3、N-MSCs 2个共培养组培养10 d时收获的CD34^+CD45^+细胞数量(×10~3个)分别为:0.44±0.045 vs 0.63±0.170 vs 2.93±0.190(P<0.01);Mφ数量(×10~4个)分别为1.70±0.046 vs 1.49±0.057 vs 2.46±0.086(P<0.05)。Mφ与UC-MSCs共培养组及与N-MSCs共培养组CB-Mφ的CD206占比(%)为56.1±1.15 vs 60.0±1.76(P<0.05)、IL-10的相对表达量为6.8±0.748 vs 8.10±0.804(P<0.01)。结论 N-MSCs能促进成体造血和CB-Mφ向M2型Mφ的转变。; 张秀秀王蓓蕊陈谊金薛原周涯边国慧赖默温周琼秀张勇刚马峰; 关键词：间充质干细胞人脐带血

关于推动我国血站富余分离血浆用于血液制品生产的建议被引量：1: 2015年; 血液及血液制品的安全性和充足供应是国家政府的责任,关系到人民健康和社会稳定,是国家安全的重要组成部分。近年来我国部分省市相继出现血液制品（白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子等）市场供应紧张的情况。2011年,乙型血友病患者必需的＂救命药＂——凝血酶原复合物告急,包括北京在内的全国20多个省份出现短缺,许多患者不得不忍受病痛折磨,甚至面临生命危险。; 陈杰马峰; 关键词：血液制品分离血浆血友病患者人血白蛋白蛋白量凝血酶原复合物

人胚胎干细胞高效诱导产生巨噬细胞方法的建立被引量：5: 2015年; 目的利用人胚胎干细胞(h ESCs)建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,并与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较。方法通过将h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)来源的基质细胞共培养产生CD34+CD45+造血干祖细胞,在多种细胞因子的诱导下悬浮培养14 d,利用May-Grünwald Giemsa染色、流式表面抗原及功能检测等方法对我们培养的巨噬细胞和人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较鉴定。结果该方法可产生大量高纯度的巨噬细胞,成功的建立了体外高效诱导的巨噬细胞分化体系,并且该体系获得的巨噬细胞与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞具有相似的表型和功能。结论建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,为进一步研究人类巨噬细胞的早期发育和建立相关疾病模型提供了可靠的方法。; 郁金凤孙文翠路旭琳边国慧潘旭毛斌黄淑赖默温周涯邹庆李晴曾宪波李玉佳陈利民周家喜马峰; 关键词：巨噬细胞诱导分化

拟胚体培养体系中造血表面标志的变化及其向红细胞分化潜能的研究被引量：1: 2015年; 目的探讨拟胚体(EB)造血相关表面标志物的变化及其向红细胞定向诱导分化的潜能。方法利用悬浮培养体系使人胚胎干细胞(h ESCs)形成三维囊状结构(EB),通过添加细胞因子BMP-4、SCF和FL使EB向造血前体细胞分化,通过流式细胞术(FACs)检测细胞发育各个阶段内皮及血细胞表面分子的变化情况以判断细胞的不同发育阶段。采用胰酶消化处理的方式将EB消化为单个细胞并向红细胞诱导分化,在诱导的d7、d14、d21取样,流式检测分析红细胞的成熟程度。结果在EB培养体系中,d6即可检测到造血前体细胞表面标志物CD34和CD31,且在EB培养的d6-d21,CD34+CD31+细胞的比例逐渐升高,到d15达到顶峰(8.86%)。在红细胞定向分化过程中,红细胞的纯度达73.22%,免疫荧光染色显示:ε亚基的阳性率为88%(424/482),γ亚基的阳性率为94%(326/347),而β亚基的阳性率为0%(0/167)。结论建立了1种EB悬浮培养体系和体外诱导红细胞的方法;EB的造血相关表面标志物的表达呈现时序性变化,且由EB分化而来的红细胞具有早期胚胎红细胞的发育特点。; 路旭琳郁金凤孙文翠毛斌邹庆潘旭赖默温周涯李晴曾宪波黄淑周琼秀周家喜马峰; 关键词：红细胞

拮抗AHR信号通路体外获得大量人红细胞的研究: 目的 Stemregenin 1(SR1)是人AHR信号通路的特异拮抗剂,本研究拟利用SR1来研究AHR在红细胞分化过程中的作用,建立体外获得大量成熟红细胞的方法。方法在人红细胞分化的不同阶段添加SR1,通过流式检测,集...; 陈谊金毛斌董勇张勇刚马峰

我国脐带血造血干细胞库监管现状及对策被引量：1: 2014年; 目的分析我国脐带血造血干细胞库(以下称"脐带血库")监管现状,并针对问题提出改进建议。方法通过文献检索、问卷调查、现场调研、专家访谈等方法,了解我国脐带血库运营及监管现状,着重分析存在的主要问题及其原因,提出相关政策建议。结果我国脐带血库经过10余年的发展,取得了一定的成绩,但在脐带血库运营管理中还存在一些问题,包括基础条件参差不齐,公共库发展滞后,脐带血质量管理存在缺陷,脐带血采集不规范,脐带血宣传不客观,脐带血应用欠规范等问题。分析其主要原因为目前关于脐带血库管理的法律规定严重不足,监管缺乏有力依据。因此,建议加强脐带血库监管,修订完善《血站管理办法》等相关法规,制定鼓励公共库发展的政策,并合理规划,加强各环节的质量控制和监督检查,建立数据查询与科学宣传平台。结论我国脐带血库运营中存在一些问题,亟需完善相关法规、加强质量控制和监督管理。; 喻昭蓉周琴张平西李磊陈强马峰石滨; 关键词：脐带血造血干细胞库监督管理

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马峰

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