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中国株马传染性贫血病病毒S2基因的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：1: 2009年; 本实验为表达马传染性贫血病病毒(EIAV)S2蛋白和制备其抗血清,以EIAV感染性分子克隆pFDDV3-8为模板扩增S2基因,将其克隆于pMD18-T载体中,测序验证后,将S2基因亚克隆于pET-30a表达载体,构建S2基因的重组表达质粒(pET-EIAV-S2),并转化DH5α受体菌。以终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导,表达的重组蛋白约20ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与EIAV的阳性血清反应,具有免疫原性。该重组蛋白通过镍离子亲和层析进行纯化后,免疫新西兰兔。ELISA及westernblot分析表明,制备的兔多克隆抗体与EIAV的S2蛋白发生特异性反应。EIAVS2蛋白的重组表达及其抗体的制备为进一步研究S2辅助蛋白在EIAV复制与致病中的作用,以及S2基因反向遗传研究奠定了基础。; 高华高旭姜成刚赵立平马学恩周建华; 关键词：马传染性贫血病毒 S2基因原核表达多克隆抗体

羊Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离培养及鉴定被引量：1: 2009年; 为改进羊肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离和培养技术,本研究采用IgG黏附法结合磁化树脂微粒法分离纯化了山羊肺泡Ⅱ型上皮细胞,碱性磷酸酶染色检查表明Ⅱ型细胞占90%以上,台盼蓝染色活细胞为95%以上。羊肺泡Ⅱ型上皮细胞分离纯化方法的建立,为今后体外分离培养绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的探索性工作奠定了基础,也为研究肺纤维化及肺癌发病机理等重大课题提供了重要的技术支持。; 罗军荣余群英刘霄卉高华武志红周艳喜周建华马学恩

马传染性贫血病毒疫苗株S2基因不同变异位点逆向突变感染性克隆的体外复制特性分析: 2009年; 为研究EIAV弱毒疫苗株(EIAVFDDV15)S2基因发生的稳定性突变对疫苗株特性的作用以及S2基因的功能,以EIAVFDDV15感染性克隆质粒pFDDV3-8为模板,根据疫苗研制过程中S2基因发生的4个主要稳定性变异位点,构建及拯救出S2基因不同差异位点逆向突变为强毒株相应氨基酸的6株感染性克隆衍生毒株。经实时定量PCR、逆转录酶活性和western blot等检测表明,疫苗株S2基因4个稳定性变异位点全部逆向突变的感染性克隆衍生毒vpFDDVS2r1-3-4-5在体外培养靶细胞中的复制水平低于亲本疫苗株感染性克隆衍生病毒和其他组合的逆向突变的感染性克隆衍生病毒,提示EIAV疫苗株S2蛋白4个稳定突变位点的综合作用可能是决定疫苗株和强毒株特性差异的因素之一。以上结果为体内感染S2基因逆向突变感染性克隆衍生病毒,进一步揭示S2基因在EIAV弱毒疫苗致弱过程中的作用提供了依据。; 高旭姜成刚高华林跃智赵立平相文华周建华; 关键词：马传染性贫血病毒 S2基因感染性克隆

绵羊肺腺瘤病血清学检测方法的建立: 为建立血清学方法检测诊断病羊体内的JSRV，本研究以病料中的JSRV阻断重组JSRV-CA与特异性单抗的反应，从病原的角度建立了JSRV的血清学检测与诊断方法。按谷胱甘肽亲和层析试剂盒操作说明获得纯化的JSRV-CA重组...; 罗军荣周艳喜高华武志红周建华马学恩; 关键词：绵羊肺腺瘤病血清学检测蛋白浓度; 文献传递

马传贫病毒中国株S2基因原核表达及多克隆抗体制备: 马传染性贫血病毒/(Equine infectious anemia virus, EIAV/)是反转录病毒科慢病毒属成员之一,在基因组结构和抗原性上与人艾滋病病毒/(Human immunodeficiency vir...; 高华; 关键词：马传染性贫血病毒 S2基因原核表达多克隆抗体; 文献传递

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高华