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Anti-HER2-ScFv-GFP融合蛋白靶向结合体外乳腺癌细胞表面受体的研究被引量：2: 2011年; 为了研究不同表达系统获得的携带绿色荧光抗HER2单链抗体(Anti-HER2-ScFv-GFP)是否既可靶向结合HER2阳性乳腺癌细胞表面,也可通过观察绿色荧光变化直接判断抗体结合乳腺癌细胞表面后细胞的动态变化,在前期成功构建两种表达系统的基础上,利用Ni^(2+)-NTA亲和层析法纯化来源于真核表达系统pFAST Bac to Bac HT A/Tn-5B1-4和原核表达系统pBAD His B/TOP10的融合蛋白Anti-HER2-ScFv-GFP,设置HER2阳性细胞SKBR3为实验组、HER2阴性细胞MCF7为对照组,分别与之混合24 h后,1×PBS洗脱细胞3次,激光共聚焦显微镜观察到两种不同表达系统获得的融合蛋白在HER2阳性细胞SKBR3表面分布均有绿色荧光,真核表达的蛋白结合效率明显高于原核表达的蛋白,SKBR3结合高浓度的融合蛋白后细胞表现出皱缩,绿色荧光明显增强,而两种不同来源的融合蛋白与HER2阴性MCF7混合后均易被洗脱。GFP标准品与SKBR3混合后也容易被洗脱。实验表明构建的携带绿色荧光抗HER2单链抗体同时具有靶向结合和报告作用两方面的功能。; 高国辉黄奇迪王金丹杨纪锋包兵兵胡孝渠

螺旋藻抗逆相关功能基因组研究: 包其郁王慧利丁力李佩珍卢俊婉许腾高国辉; 该项目对具有自主知识产权的螺旋藻材料进行全基因组测序和功能注释；利用基因组、转录组和蛋白质技术，测定不同培养条件下螺旋藻基因表达谱的差异，进行螺旋藻抗逆(抗盐碱、耐高温、耐强光)相关的功能基因组研究；利用模式蓝细菌遗传转...; 关键词：; 关键词：螺旋藻基因表达遗传育种

CC3／TIP30蛋白在乳腺癌中的表达及其与HER-2／neu基因的相关性研究被引量：12: 2012年; 目的分析CC3／TIP30蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义，并探讨CC3／TIP30与HER-2／neu的mRNA相关性。方法采用免疫组化EnVision二步法检测2004年1月至2005年1月手术治疗并病理证实的112例乳腺癌标本中CC3／TIP30、HER-2／neu蛋白的表达，分析其表达与临床病理特征及预后的相关性，同时应用化学合成靶向敲除CC3／TIP30mRNA的siRNA，并转染SK—BR-3细胞株48h后，应用real—timePCR法测定CC3／TIP30、HER-2／neu基因mRNA的表达水平。结果免疫组化显示CC3／TIP30蛋白在乳腺癌组织中表达与TNM分期、淋巴结转移、HER-2和分子分型相关（P=0．048、0．019、0．027、0．011），而与患者年龄、肿瘤大小，以及雌激素受体和孕激素受体表达状态无关。实时定量PCR结果示CC3／TIP30siRNA转染导致CC3／TIP30mRNA的表达下降，同时伴随着HER-2／neu基因mRNA水平的下降，差异有统计学意义（F=56．797，F=165．101；P均=0．000）。分子分型为HER-2阳性型的乳腺癌患者中CC3／TIP30蛋白表达阳性、阴性组患者5年总生存率差异有统计学意义（X^2=10．732，P=0．001）。结论CC3／TIP30蛋白表达缺失与乳腺癌的发生、发展有关，提示乳腺癌患者早期发生转移复发可能，可作为HER-2阳性型乳腺癌亚组分型的指标之一。; 黄奇迪胡孝渠万丽高国辉郑书荣尤捷郭贵龙; 关键词：乳腺肿瘤免疫组织化学聚合酶链反应

外源性17β-雌二醇促进HER2阳性乳腺癌细胞的侵袭和增殖被引量：2: 2017年; 目的:研究外源性雌激素是否对乳腺癌中人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌细胞产生作用。方法:分别以乳腺癌细胞SKBR3和MCF-7为材料,选择17β-雌二醇(E2)为外源雌激素,配制10^(-5)、10^(-6)、10^(-7)、10^(-8)、10^(-9)、10^(-10) mol/L的6种浓度培养环境,每种浓度培养时间设置24、48、72 h 3个梯度。检测HER2、ERα等标志物表达水平变化,分析E2对HER2阳性乳腺癌细胞增殖能力及侵袭性的影响。结果:在MCF-7中处理组HER2、ERα的转录水平都明显高于阴性对照组。在SKBR3细胞中仅HER2转录水平明显高于阴性对照组(P<0.05)。在蛋白水平SKBR3中HER2蛋白表达量增加(P<0.05);而在MCF-7中,ERα蛋白表达量随着时间的延长而增加,HER2几乎检测不到。在细胞增殖方面,MCF-7和SKBR3均随着E2浓度的上升细胞增殖率上升,差异有统计学意义(P<0.05)。而在侵袭性方面,MCF-7的侵袭性在72 h时较空白对照组增强(P<0.05),SKBR3侵袭性在24 h和48 h时较空白对照组增强(P<0.05),但是自身随浓度变化的规律不明显。结论:外源性雌激素对HER2阳性乳腺癌细胞的侵袭和增殖有促进作用。; 徐宝宝姜阳王金丹李昔琪何媛媛阮青青柳鹏程高国辉金龙金; 关键词：17Β-E2 肿瘤侵润

逆转紫杉醇耐药性的化合物伊曲茶碱的药物用途: 本发明公开了一种伊曲茶碱在制备逆转肿瘤细胞耐药性药物中的应用，涉及肿瘤细胞耐药性治疗的技术领域。本发明所述伊曲茶碱与紫杉醇联合用于制备逆转肿瘤紫杉醇耐药性的药物。研究发现，伊曲茶碱能显著降低MDR1基因和蛋白表达水平，伊...; 王学宝叶发青高国辉孙豆豆鲁颖叶辉张园左志贵刘志国谢自新; 文献传递

基于创新实践的第二课堂形成性评价体系建立被引量：3: 2022年; 随着形成性评价在高等教育考核体系中的广泛推广,其重要作用逐渐凸显,但形成性评价在高等教育的第二课堂中还未引起重视。第二课堂主要应用于创新实践活动,如何评价创新实践活动的教学成效也无统一的评价体系。该项目建立了一套基于开放性实验创新实践的第二课堂形成性评价体系。该评价体系包括实验设计的创新性(占比20%)、实验方案的可行性(占比20%)、实验结果的可信性(占比40%)、逻辑思维的科学性(占比15%)以及理论凝练的可能性(占比5%)等。通过建立合理的形成性评价体系,教师对创新实践的细节更加重视,学生对创新实践中各个环节的侧重点也更加了解。基于开放性实验的第二课堂形成性评价体系的建立为提高创新素质教育质量提供了保障。; 高国辉; 关键词：实验教学第二课堂

Anti HER2 ScFv-GFP融合抗体靶向检测HER2的表达被引量：2: 2012年; 为验证真核表达的携带绿色荧光的抗HER2单链抗体应用于临床诊断HER2阳性肿瘤细胞和病理组织的可靠性,构建融合基因Anti HER2 ScFv-GFP,重组入pFAST Bac HT A载体,在昆虫细胞Sf9中表达,以Ni2+-NTA亲和层析法纯化Anti HER2 ScFv-GFP融合蛋白,测定其浓度与纯度,将同浓度的纯化蛋白分别与3种乳腺癌细胞BT474、SKBR3和MCF7各混合12 h、24 h和48 h,分析其在不同时间段结合HER2阳性肿瘤细胞的稳定性。用纯化蛋白直接检测经抗原修复的乳腺癌病理组织,与免疫组织化学法检测结果对比。结果在昆虫细胞Sf9中可观察到明显绿色荧光,纯化的融合蛋白相对分子量约60 kDa,浓度为115.5μg/mL,纯度约97%,SKBR3和BT474鉴定为HER2阳性。结合12 h、24 h、48 h后其细胞表面均有明显绿色荧光,而HER2阴性MCF7被洗脱后无荧光,该抗体滴度为1:64,48 h内该荧光抗体仍具有稳定性。携带绿色荧光的融合抗体检测病理组织与IHC法的结果完全一致。表明成功表达的携带绿色荧光的抗HER2单链抗体可特异性检测HER2阳性乳腺癌细胞BT474和SKBR3,在HER2阳性肿瘤细胞和临床病理组织检测上具有应用前景。; 高国辉陈翀杨艳梅杨涵王金丹郑易黄奇迪胡孝渠; 关键词：绿色荧光蛋白分子诊断

基因组水平研究与开发螺旋藻耐盐功能基因: 包其郁高国辉李佩珍徐祖元任媛媛吴金雨李劲松陈伟卢俊婉; 研究选集胞藻6803基因组slr0168基因及其上下游相连的两个片段分别作为上游整合平台和下游整合平台，在中间插入启动子、gfp报告基因、卡那霉素抗性筛选标记，构建得到同源重组双交换整合平台，为外源蛋白在集胞藻6803中...; 关键词：; 关键词：螺旋藻基因表达植物基因工程

融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP在昆虫细胞中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的功能分析被引量：3: 2011年; 目的:利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达获得携带绿色荧光蛋白(GFP)的抗人表皮生长因子受体2(HER2)的单链抗体可变区片段(ScFv),分析其靶向结合乳腺癌细胞表面受体HER2的功能。方法:构建融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,重组获得真核表达载体重组子pFAST Bac-to-Bac HT A/anti-HER2-ScFv-GFP,转化DH10Bac,收集重组病毒bacmid,分别转染、感染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,SDS-PAGE及Westernblotting分析融合蛋白表达产物。Ni2+-NTA亲和层析法纯化anti-HER2-ScFv-GFP融合蛋白后分别滴入乳腺癌细胞HER2阳性的SKBR3和HER2阴性的MCF7,对比携带绿色荧光的抗HER2单链抗体靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体情况。结果:获得长度约1 539 bp的融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,感染重组病毒的Tn-5B1-4细胞膜附近有明显绿色荧光,SDS-PAGE、Western blotting法检测到60 kD的特异性条带。结合实验显示HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,而HER2阴性的MCF7细胞表面荧光易被洗脱。结论:在Tn-5B1-4中成功表达携带绿色荧光的融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP,该携带绿色荧光的抗HER2单链抗体具有靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体的效能。; 高国辉王金丹黄奇迪杨纪峰杨水兵包兵兵张羽胡孝渠; 关键词：融合基因表达

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高国辉

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