高珺珊
- 作品数：15 被引量：17H指数：3
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- 犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA和胶体金试纸条检测方法建立
- 犬细粒棘球绦虫病是由细粒棘球绦虫寄生于犬小肠内引起的一种人畜共患寄生虫病。该病呈全球流行,严重威胁人畜的健康,并对畜牧业的发展造成阻碍。犬是该病重要的终末宿主,也是该病流行的重要环节。细粒棘球绦虫的检测方法主要分为三大类...
- 高珺珊
- 关键词：细粒棘球绦虫DOT-ELISA胶体金试纸条
- 文献传递
- 检测犬恶丝虫抗体胶体金免疫层析试纸条及制备方法
- 本发明提供一种检测犬恶丝虫抗体胶体金免疫层析试纸条及制备方法，其特点在于：利用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白制作本发明的金标抗体，即金标垫；再利用犬恶丝虫MTFP蛋白，作为诊断抗原包被硝酸纤维膜（NC膜），作为检测线（...
- 张西臣姜鑫侯洪烈高珺珊李建华宫鹏涛杨举李赫李棕松杨正涛尹继刚
- 文献传递
- 犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用被引量：3
- 2017年
- 目的建立简便、特异的检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法以细粒棘球绦虫EdiagA864蛋白为抗原,免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体;利用HRP标记兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体,通过溶解、超声方法处理犬粪便样品;以抗细粒棘球绦虫单克隆抗体2D12作为捕获抗体,HRP标记的兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体为检测抗体,通过棋盘法确定抗体最佳包被浓度、最佳封闭剂、待检粪样最佳稀释比例及酶标抗体最佳浓度。应用建立的双抗体夹心ELISA法对来自长春地区的64份犬粪便样品及来自新疆的8份犬粪便阳性样品进行检测。结果兔抗EdiagA864多克隆抗体的效价为105。建立的双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:抗体包被浓度为1∶50,封闭剂为1%BSA,粪液稀释度为1∶5,酶标二抗稀释度为1∶800。建立的双抗体夹心ELISA法与犬贾第虫和犬蛔虫阳性样品均无交叉反应;检测不同稀释度的粪便液,当稀释至1∶20时,P/N仍大于2;检测6份阳性样品与4份阴性样品的批间和批内变异系数均小于8。用建立的方法检测8份阳性样品的结果均为阳性,64份待检样品的结果均为阴性。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性较强,敏感性较高,重复性较好,为细粒棘球绦虫流行病学调查及诊断提供了一种更简便、快速、特异的免疫学检测方法。
- 刘原源黄书晨高珺珊王晓岑宫鹏涛张壮志李建华杨举李赫张西臣
- 关键词：细粒棘球绦虫双抗体夹心ELISA多克隆抗体
- 检测猪弓形虫病循环抗原免疫胶体金试纸条及制备方法
- 本发明提供一种检测猪弓形虫病循环抗原免疫胶体金试纸条及制备方法，利用胶体金免疫层析技术检测猪弓形虫血液中循环抗原，本发明T线的包被与金标垫的制备分别应用的是抗弓形虫表面抗原SAG3的两株单克隆抗体，该试纸条与两份猪囊虫阳...
- 张西臣杨正涛寇金华宫鹏涛李建华杨举李赫李棕松高珺珊
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- 抗细粒棘球绦虫EdiagA864单克隆抗体的制备及鉴定
- 2016年
- 目的制备抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体,并进行鉴定。方法以细粒棘球绦虫Ediag A864蛋白为抗原,经皮下多点免疫BALB/c小鼠,共免疫4次。末次免疫3 d后制备小鼠脾细胞,在聚乙二醇(PEG)的作用下与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,间接ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株进行克隆,检测其染色体数及分泌的单克隆抗体亚型。采用体内培养法大量制备抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体,并经正辛酸-饱和硫酸铵法和Hi Trap Protein G HP亲和层析结合法纯化。结果经筛选克隆共获得4株可产生细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体的杂交瘤细胞株:2D12、3H4、4A6和6E5,细胞染色体数分别为97、101、98和96,重链亚型均为Ig G1,轻链亚型均为Kappa。2D12、3H4腹水效价为2×105,4A6和6E5腹水效价为1×105。纯化后的2D12抗体可见相对分子质量为46 000和26 000的重链和轻链条带。结论本实验获得的2D12是一株稳定的杂交瘤细胞株,且可产生高效价细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体,为细粒棘球绦虫病的免疫诊断奠定了基础。
- 刘原源高珺珊宫鹏涛张壮志李建华杨举李赫张西臣
- 关键词：细粒棘球绦虫单克隆抗体杂交瘤细胞
- 一种犬弓形虫感染胶体金检测试纸条及其制备方法
- 本发明公开一种检测犬弓形虫感染胶体金试纸条及其制备方法，是通过克隆、表达纯化SAG3重组蛋白，制备并纯化单克隆抗体，利用柠檬酸三钠还原法烧制胶体金溶液，之后利用胶体金对42#抗弓形虫SAG3单克隆抗体标记，制备金标垫，组...
- 张西臣宋慧琦杨升高珺珊李建华宫鹏涛寇金华杨举李赫李棕松杨正涛尹继刚
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- 检测犬细粒棘球绦虫感染胶体金免疫层析试纸及制备方法
- 本发明公开一种检测犬细粒棘球绦虫感染胶体金免疫层析试纸条的制备方法，是通过克隆、表达纯化EdiagA864重组蛋白，制备并纯化单克隆抗体及兔多克隆抗体，利用柠檬酸三钠还原法烧制胶体金溶液，之后利用胶体金对单克隆抗体进行标...
- 宫鹏涛张西臣高珺珊李建华张壮志杨举李赫李棕松杨正涛尹继刚
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- 检测犬弓形虫SAG3抗体间接ELISA方法的建立被引量：5
- 2016年
- 目的以弓形虫重组SAG3蛋白为抗原,建立一种检测犬弓形虫抗体的间接ELISA方法。方法采用棋盘滴定法确定抗原的包被浓度和阳性血清稀释度,再对该方法的封闭剂以及封闭时间、犬弓形虫阳性血清孵育时间、二抗稀释度以及加入显色液孵育时间等各项条件进行优化;通过对弓形虫感染犬血清及犬心丝虫、等孢球虫、蛔虫及巴贝斯虫感染血清的检测评价方法的敏感性和特异性。结果该方法最佳优化条件分别为:抗原包被浓度0.82μg/孔,封闭剂为含10%胎牛血清的PBST,被检血清稀释度1∶20;兔抗犬酶标二抗稀释度1∶8 000。优化的ELISA敏感性为1∶1 280,犬心丝虫、等孢球虫、蛔虫及巴贝斯虫感染血清均未发生交叉阳性反应;批间、批内重复性试验的变异系数均<15%。结论建立的ELISA方法特异性较强,敏感性高,批内、批间重复性较好,可用于犬弓形虫感染的检测。
- 宋慧琦杨升高珺珊宫鹏涛李建华张西臣
- 关键词：弓形虫抗体间接ELISA
- 犬贾第虫巢式PCR检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 目的建立犬贾第虫巢式PCR检测方法并进行验证。方法根据犬贾第虫Rnase P基因序列设计两对特异性引物,通过优化Mg2+浓度和退火温度建立巢式PCR检测方法,并进行灵敏度和特异性验证。用优化的巢式PCR方法检测60份犬临床粪样。结果建立的巢式PCR方法的最佳Mg2+浓度为3.0 mmol/L;最佳退火温度为53℃;对犬贾第虫的最低检测量可达1个虫体DNA/ml;对柔嫩艾美尔球虫、伊氏锥虫、弓形虫、阴道毛滴虫、犬心丝虫等寄生虫基因组DNA的扩增结果均为阴性;60份犬临床粪样贾第虫的检出率为61.7%。结论建立的巢式PCR检测方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于犬贾第虫感染的临床检测。
- 李棕松高珺珊翟涛吴威宫鹏涛李建华杨举李赫张国才张西臣
- 关键词：贾第虫巢式聚合酶链反应
- 犬恶丝虫感染胶体金试纸条检测方法的建立及应用被引量：1
- 2016年
- 目的建立犬恶丝虫血清抗体检测胶体金试纸条方法。方法利用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)作为金标抗体,犬恶丝虫MTFP重组蛋白作为诊断抗原标记检测线(T线),兔抗SPA抗体标记质检线(C线),对建立的各项条件进行优化,制备胶体金试纸条;对建立的方法进行特异性、敏感性、稳定性验证试验。用建立的胶体金试纸条检测方法对62份犬血清样本进行检测。结果所制备的胶体金试纸条敏感性为1∶8,重复性良好,检测犬等孢球虫阳性血清、犬蛔虫阳性血清结果均为阴性。应用制备的胶体金试纸条检测62份犬血清,阳性样本4份,阴性样本58份,阳性检出率6.45%。结论建立的犬恶丝虫感染胶体金试纸条检测方法具有特异性、稳定性等特点,为犬恶丝虫病的诊断提供了一种新的检测方法。
- 姜鑫高珺珊侯洪烈宫鹏涛李建华杨举李赫李棕松张西臣
- 关键词：犬恶丝虫胶体金试纸条
