刘新文
- 作品数:7 被引量:34H指数:3
- 供职机构:华中农业大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金湖北省科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域:农业科学生物学更多>>
- 嵌合猪圆环病毒PCV2-1感染性克隆的构建被引量:6
- 2007年
- 根据GenBank中发表的猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)的核苷酸序列,设计3对特异性引物。通过PCR方法,以引物P1和P2从接毒细胞中扩增到猪型圆环病毒(PCV2)全基因组,克隆入pBluescriptⅡ SK(+)载体构建质粒SK-PCV2,以之为模板,用引物P5和P6扩增不包含PCV2-ORF2的部分基因(SK-PCV2△ORF2);另一对引物P3、P4用于特异性扩增猪型圆环病毒(PCV1)的ORF2基因,与前面得到的SK-PCV2△ORF2基因连接,构建嵌合型质粒SK-PCV2-1,以此为基础构建双联体质粒SK-PCV2-1(DB)。体外转染PK-15细胞,盲传4代后,用RT-PCR和间接免疫荧光方法检测,结果表明本试验构建的嵌合病毒PCV2-1克隆具有感染性。
- 刘新文姚清侠曹胜波郭东春陈焕春
- 关键词:感染性克隆
- 猪Ⅱ型圆环病毒分离鉴定及嵌合病毒PCV2-1感染性克隆构建的研究
- 猪圆环病毒(PorcineCircovirus,PCV)属于圆环病毒科(Circoviridae),其基因组为单股环状DNA,病毒粒子无囊膜,呈二十面体对称,是目前已知的最小病毒之一。PCV有Ⅰ型(PCV1)和Ⅱ型(PC...
- 刘新文
- 关键词:圆环病毒嵌合病毒感染性克隆
- 文献传递
- 携带猪γ干扰素基因逆转录病毒载体的构建及其在猪肾细胞(PK-15)中的表达被引量:3
- 2007年
- 将梅山猪γ干扰素基因定向插入逆转录病毒载体pLXSN(neor),构建逆转录病毒重组质粒,利用脂质体介导法将重组质粒转染逆转录病毒包装细胞系PA317,转染细胞经含G418(400μg/mL)培养基筛选一周后获得稳定产毒的PA317细胞系。从细胞培养上清中提取RNA,进行RT-PCR检测,扩增到目的片段;将上清感染猪肾细胞(PK-15),经含G418(400μg/mL、600μg/mL和800μg/mL)的DMEM筛选一周,间接免疫荧光表明表达的猪γ干扰素主要锚定于细胞膜。收取PK-15细胞上清,在牛肾细胞(MDBK)上进行干扰素抗病毒活性检测,结果显示重组病毒表达的猪γ干扰素抗水泡性口炎病毒(VSV)的活性为1200IU/106cells.48h。以表达的干扰素处理PK-15细胞后,经细胞病变抑制法测定,重组猪γ干扰素可以抵抗口蹄疫病毒(FMDV)感染。试验结果表明猪γ干扰素基因已成功插入逆转录病毒基因组并在PK-15细胞中表达,表达的重组猪γ干扰素具有较强的抗病毒生物活性。
- 姚清侠刘新文钱平郭东春陈焕春
- 关键词:猪Γ干扰素逆转录病毒PK-15细胞抗病毒活性水泡性口炎病毒
- 猪γ干扰素的逆转录病毒的构建及其在猪肾细胞(PK-15)中的表达
- 本文将梅山猪γ干扰素基因定向插入逆转录病毒载体pLXSN(neor),构建逆转录病毒重组质粒,利用脂质体介导法将该重组质粒转染逆转录病毒包装细胞系PA317,转染细胞经含G418(400μg/mL)筛选一周后获得稳定产毒...
- 姚清侠刘新文钱平郭东春陈焕春
- 关键词:猪Γ干扰素逆转录病毒PK-15细胞抗病毒活性
- 文献传递
- 猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)Henan株的分离与全基因组序列分析被引量:18
- 2006年
- 用PCR方法从河南某猪场送检的1头疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的腹股沟淋巴结中检测到了猪Ⅱ型圆环病毒(porcine circovirus type2,PCV2)核酸。将该病料研磨、过滤除菌后接种无PCV1和PCV2污染的PK-15细胞,盲传12代后,用PCR方法仍然能够在接种细胞中检测到PCV2核酸。从接种细胞中收获病毒,经超速离心纯化后电镜负染观察.可见直径约17nm、呈二十面体对称结构的病毒粒子,表明从发病猪中分离到了PCV2,将该毒株命名为PCV2Henan株。序列分析表明:该株病毒全基因组长1767bp,包含11个读码框,与PCV1同源性为76.2%~77.3%,与其他PCV2株的同源性为95.5%~99.6%。
- 刘新文曹胜波郭东春姚清侠陈焕春
- 关键词:病毒分离断奶仔猪多系统衰竭综合征
- 嵌合猪圆环病毒PCV1-2的构建及其感染性初步鉴定被引量:6
- 2006年
- 猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是当前严重危害养猪业的重要病原之一。目前,世界上还没有有效疫苗用于该病毒的免疫预防。该研究利用PCR方法,将PCV2的ORF2基因替换猪Ⅰ型圆环病毒(PCV1)的ORF2基因,构建了以PCV1基因组为骨架的嵌合病毒(PCV1-2)分子克隆(pSK2PCV1-2)。将该分子克隆转染PK-15细胞并连续盲传5代,用RT-PCR方法可以在转染后盲传的细胞中检测到PCV1的ORF1 mRNA和PCV2的ORF2 mRNA,但检测不到PCV1的ORF2 mRNA和PCV2的ORF1 mRNA。间接免疫荧光检测显示在盲传第5代的细胞中有PCV2 ORF2蛋白的表达,表达蛋白主要分布于细胞核。该研究初步证实构建的PCV1-2分子克隆转染细胞后可以形成具有感染性的嵌合病毒,从而为更深入研究嵌合病毒生物学特性奠定了基础。
- 曹胜波孙敏轩刘学芹刘新文陈焕春
- 关键词:感染性
- 猪γ干扰素的逆转录病毒的构建及其在猪肾细胞(PK-15)中的表达
- 将梅山猪γ干扰素基因定向插入逆转录病毒载体pLXSN(neor),构建逆转录病毒重组质粒,利用脂质体介导法将该重组质粒转染逆转录病毒包装细胞系PA317,转染细胞经含G418(400μg/mL)筛选一周后获得稳定产毒的P...
- 姚清侠刘新文钱平郭东春陈焕春
- 关键词:猪Γ干扰素逆转录病毒PK-15细胞抗病毒活性
- 文献传递