南雪
- 作品数：143 被引量：222H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 慢病毒介导的稳定表达bFGF的胎儿肝脏基质细胞株的建立被引量：2
- 2007年
- 通过重组慢病毒系统感染人胎儿肝脏基质细胞(fetalliverstromalcell,FLSC),建立了能够稳定、高效表达碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的细胞株bFGF/FLSC.从流产胎儿肝脏组织分离富集基质细胞,对其进行了生长特性和表面标志的鉴定,其在体外维持传代35代,依然保持正常的染色体核型.从胎儿骨髓间充质干细胞中克隆得到bFGF基因,构建重组慢病毒载体,感染FLSC,根据荧光表达强弱进行流式分选,获得能够继续稳定传代的低表达和高表达bFGF的两株细胞,RT-PCR和蛋白质印迹证实,细胞株中bFGF基因的稳定表达.RT-PCR结果显示,弱荧光和强荧光表达细胞的bFGF,在mRNA水平的表达分别是转染空载体细胞的2.33倍和6.19倍;蛋白质印迹结果显示,在蛋白质水平表达分别是1.76倍和5.05倍.用建立的bFGF/FLSC作饲养层细胞体外培养人胚胎干细胞(humanembryonicstemcells,hES),结果证明,其能在无或少量添加外源bFGF的条件下,维持人ES细胞增殖及其干性达20代.bFGF/FLSC细胞株的建立,将为构建低成本、安全高效的人胚胎干细胞的培养体系及研究造血细胞的发育分化提供适宜的微环境.
- 习佳飞王韫芳张鹏袁红丰施双双闫舫陈琳白慈贤南雪裴雪涛
- 关键词：胎儿肝脏基质细胞慢病毒人胚胎干细胞
- 诱导人胚胎干细胞定向分化为肝细胞的方法及专用培养基
- 本发明公开了一种体外诱导人胚胎干细胞定向分化为肝细胞的方法及其专用培养基。该体外诱导方法包括以下步骤：1)将人胚胎干细胞用分化培养基I悬浮，再将细胞悬液移入低吸附性细菌培养皿中，在37℃、5％CO<Sub>2</Sub>...
- 裴雪涛裴海云王韫芳白宗良杨印祥习佳飞岳文南雪白慈贤
- 文献传递
- 诱导脐带血来源的CD34+细胞重编程获得诱导性多能干细胞（iPS cells）
- ＜正＞目的:目前已经利用转录因子的表达使得人类各种成体细胞（表皮成纤维细胞、间充质干细胞、神经干细胞、肝细胞、外周血细胞等）重编程形成诱导性多能干细胞（iPS cells）,然而对脐带血来源的细胞的诱导仍在研究
- 姚海雷张文成王思涵李保伟张锐习佳飞周军年吕洋曾泉施双双何丽娟南雪李艳华岳文裴雪涛
- 文献传递
- Wnt3a转基因基质细胞的建立及其对脐血CD34^+造血干/祖细胞扩增作用的研究被引量：5
- 2005年
- Wnt信号通路在造血干/祖细胞自我更新的过程中发挥至关重要的作用.纯化的Wnt3a蛋白可以实现造血干/祖细胞的扩增.通过病毒转染原代小鼠骨髓基质细胞,建立转基因滋养层细胞.通过共培养对转基因滋养层细胞扩增CD34+造血干/祖细胞的作用进行了研究.实验结果显示,与普通滋养层加细胞因子组相比,经转基因滋养层加细胞因子组培养的CD34+造血干/祖细胞集落形成能力(CFC)是其(1.55±0.06)倍;混合集落形成能力是其(1.95±0.26)倍;高增殖潜能集落形成能力(HPP-CFC)是其(1.45±0.40)倍;LTC-IC活性是其(3.83±0.86)倍.结果表明,转基因滋养层细胞通过分泌具有天然活性的Wnt3a蛋白能在体外有效地扩增造血干/祖细胞的数量.
- 师伟韩姝李艳华谢小燕施双双陈琳白慈贤闫舫南雪王韫芳裴雪涛
- 关键词：WNT3A滋养层细胞
- 用慢病毒转染RNAi技术沉默胆固醇7α羟化酶的基因表达,降低肝细胞中胆汁酸的分泌
- 2008年
- 为了降低生物人工肝(bioartificial liver system)中肝细胞胆汁酸的分泌,构建了胆固醇7α羟化酶慢病毒RNA干涉载体,并转染人肝脏细胞(L-02)。根据绿色荧光蛋白的表达评估转染效率后进行流式分选,获得高表达慢病毒干涉载体的细胞,并以野生型L-02细胞和仅转染pSicoR空载体的L-02细胞作对照,观察肝细胞胆固醇7α羟化酶的表达以及培养上清中总胆汁酸含量。利用半定量PCR、实时荧光定量PCR及Western-blot等实验方法检测了转染细胞中基因的干涉效果,结果显示:与对照组相比,在mRNA水平,转染慢病毒siRNA载体的L-02细胞,其胆固醇7α羟化酶基因的表达量仅为野生型L-02细胞表达量的31.2%,为转染pSicoR空载体的L-02细胞的34.1%,干涉效率分别为68.8%和65.9%,均具有显著差异(P<0.05);Western-blot结果显示胆固醇7α羟化酶在蛋白质水平表达也明显受到抑制,表明转染慢病毒siRNA下调了肝细胞中胆固醇7α羟化酶基因的表达,减少了胆汁酸的分泌。以上研究结果表明,利用RNAi技术可以获得低表达胆固醇7α羟化酶基因的肝细胞,并有效降低肝细胞中胆汁酸的分泌,为临床上生物人工肝的构建及应用奠定基础。
- 郑吉春裴海云杨印祥姚海雷罗海英王婧陈琳南雪白慈贤王韫芳岳文裴雪涛
- 关键词：RNAI慢病毒肝细胞胆汁酸
- 细胞角蛋白19启动子调控的双报告载体的构建及其在肝干/祖细胞分化研究中的应用被引量：3
- 2010年
- 肝干/祖细胞是肝细胞和胆管上皮细胞(biliary epithelial cells,BECs)共同的前体细胞,为了对这一前体细胞的分化情况进行研究,利用报告基因来监测肝干/祖细胞的分化走向.首先,通过PCR方法从肝癌细胞系HepG2的全基因组中克隆了细胞角蛋白19(CK19)启动子片段,构建了CK19启动子调控的海肾荧光素酶和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)双报告载体(pSicoR-CK19-hrl-mrfp).其次,将上述慢病毒载体转染肝干/祖细胞后,通过流式细胞分选获得稳定转染的细胞株.再次,将上述细胞株与表达"上皮形态发生素"(Epimorphin,EPM)的PT67细胞共培养后,整合有pSicoR-CK19-hrl-mrfp表达载体的肝干/祖细胞不仅形态发生了变化,而且排列为二维环状结构,另外还检测到由CK19启动子启动表达的海肾荧光素酶和RFP,细胞形态和基因表型都证明肝干/祖细胞经诱导已经分化成为BECs.与此形成对照的是肝干/祖细胞与不表达EPM的PT67细胞共培养后,没有观测到上述的变化.所以,CK19启动子调控的双报告载体不仅可以实时地显示肝原始细胞在不同的诱导环境下的分化走向,而且还可以定量地检测CK19启动子活性的变化情况.总之,这一载体的成功构建将为研究肝干/祖细胞的分化提供了便捷的工具,同时也有助于筛选可诱导肝干/祖细胞定向分化的分子.
- 张衡贾雅丽岳文陈琳谢小燕南雪何丽娟裴海云裴雪涛
- 关键词：细胞角蛋白红色荧光蛋白分化
- 一种可移植的人工替代单元
- 本实用新型公开了一种可移植的人工替代单元，其可移植入人体用作维持特定组织功能的暂时替代物。包括一外包围体，一置于该外包围体内的中空支架，置于该支架内腔中的腔内填充细胞和填充物，以及置于该支架与外包围体之间的功能细胞和营养...
- 裴雪涛王韫芳粱峰张磊林峰岳慧敏南雪颜永年管利东
- 文献传递
- 脐血CD_(34)^+细胞体外扩增过程中Fas、Caspase-3表达及染色体核型分析被引量：1
- 2002年
- 冯凯杨雷王晓王冬梅白慈贤南雪张锐曹华裴雪涛
- 关键词：脐血CD34^+细胞体外扩增FAS染色体核型分析
- 白扁豆提取物、其提取方法及其在制备抗紫外线损伤制剂中的应用
- 本发明公开了白扁豆提取物、其提取方法及其在制备抗紫外线损伤制剂中的应用。本发明白扁豆提取物是将白扁豆粉碎后，先对其用生理盐水进行提取，再将提取物用饱和硫酸铵进行盐析，最后经脱盐、干燥后得到。实验证明，本发明的白扁豆提取物...
- 裴雪涛师伟任祥亮岳文白慈贤南雪施双双陈琳吕洋
- 文献传递
- 一种新的造血干/祖细胞的富集方法及其体外定向诱导分化
- 本发明包括利用脐带血中含有细胞成分的不同的理化性质,利用B淋巴细胞与尼龙棉吸附及单核/巨噬细胞与塑料制品吸附的特点,采用两步法负性富集的方法获得富集的人造血干/祖细胞,即克服了传统的免疫磁珠分离体系价格昂贵及含有磁珠的缺...
- 裴雪涛冯凯南雪白慈贤张锐
- 文献传递
