吴忆贫
- 作品数：20 被引量：47H指数：4
- 供职机构：中国航天科技集团公司总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙型肝炎病毒P基因变异的检测及其意义被引量：1
- 2005年
- 目的 采用错配PCR扩增方法进行乙型肝炎病毒(HBV)P基因YMDD变异的检测,并对其临床意义进行初步研究。方法 应用分子克隆方法,构建YMDD、YVDD、YIDD变异的阳性质粒,并进行敏感性及特异性试验。对44例经拉米夫定治疗1年、HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果 经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功,且该方法具有较好的敏感性和特异性。44例拉米夫定治疗1年、HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者存在YMDD变异,半年出现变异5例,变异率为11. 36%; 1年出现变异7例,变异率为15. 91%。结论 本检测方法简便、实用,抗病毒药物压力是导致HBVYMDD变异的重要因素。
- 任永强胡大荣范公忍吴忆贫
- 关键词：乙型肝炎病毒YMDD变异
- 携带外源基因的HBV在HepG2细胞中的表达与复制被引量：2
- 2003年
- 韩聚强胡大荣孙殿兴吴忆贫
- 关键词：外源基因HBVHEPG2乙型肝炎病毒基因复制
- adw亚型HBV突变体与ayw亚型辅助质粒之间相互包装的研究
- 2007年
- 目的探讨adw亚型HBV突变体与ayw亚型辅助质粒之间相互包装。方法构建C基因截短adw亚型HBV表达载体pHBV-ΔC。重组载体与ayw亚型辅助质粒pHBV3142共转染HepG2细胞。以与PGEm共转染为对照。用PCR检测细胞核内重组HBV载体cccDNA生成和培养上清中rcDNA的形成,用Native westernblot和Soutern blot检测重组HBV载体在辅助质粒pHBV3142辅助下的包装。结果在实验组细胞核内可检测到cccDNA、培养上清中可检测到rcDNA,对照组中无此结果。实验组Soutern blot见阳性信号而对照组无阳性信号。结论重组adw亚型HBV载体在辅助质粒ayw亚型pHBV3142辅助下能进行有效复制且有效完成病毒包装。
- 邸雅南胡大荣熊锦华李娟韩聚强吴忆贫
- 关键词：乙型肝炎病毒突变体
- C基因截短型HBV载体的复制、包装与表达被引量：1
- 2004年
- 目的 探索C基因截短型重组HBV载体的复制、包装和表达。方法 采用分子克隆、定点突变技术构建C基因截短型HBV载体 ;瞬时转染HepG2细胞 ,在荧光显微镜下观察外源目的基因绿色荧光蛋白 (GFP)的表达 ;提取转染细胞胞内、胞外DNA分别进行半巢式聚合酶链反应 (PCR)、非变性凝胶电泳杂交技术、southernblot杂交定量分析及常规PCR等分析 ,检测重组HBV载体的复制、包装及子代病毒的生成。结果 经酶切鉴定 ,C基因截短型HBV载体构建成功 ;转染HepG2细胞 ,外源目的基因能够高效表达 ;在辅助载体的辅助下 ,C基因截短型HBV载体能够在肝细胞进行复制 ,包装 ,通过定量分析 ,C基因截短型HBV载体的包装效率比C基因非截短型HBV载体提高 4～ 8倍 ;另外 ,C基因截短型HBV载体可以在辅助载体的辅助下包装成携带外源目的基因的子代病毒颗粒分泌到胞外。结论 C基因部分截短不影响HBV载体外源基因的表达和病毒的复制 ,而且可以提高载体的包装效率。
- 韩聚强胡大荣孙殿兴胡学玲李娟范公忍刘超英吴忆贫
- 关键词：基因表达
- S基因显性阴性突变体干扰乙肝病毒颗粒组装的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨S基因突变对HBV病毒颗粒组装的影响。方法 构建野生型S基因、S基因突变的真核表达载体pcDNA3 S和pcDNA3 mS及S基因突变的全长HBV基因组表达载体pHBV mS ,用pHBV mS与pcDNA3 S共转染HepG2细胞 ,pHBV mS与pcDNA3共转染HepG2细胞 ,以adwR9与pcDNA3共转染为对照 ;pcDNA3 mS和adwR9共转染HepG2细胞 ,以adwR9和pcDNA3共转染为对照 ,用荧光定量PCR检测胞内和上清中病毒量 ,用ELISA方法检测上清中S抗原。结果 pHBV mS与pcDNA3共转染组上清中病毒量较对照组低而胞内病毒量二者相同。pHBV mS与pcDNA3 S共转染组上清、胞内病毒量与对照组相同。pcDNA3 mS和adwR9共转染HepG2细胞其上清中病毒量较对照组低而胞内病毒量两者相同。上清中S抗原实验组较对照组低。结论 S突变体干扰HBV病毒颗粒的组装 ,导致的HBV病毒颗粒分泌下降。
- 邸雅南胡大荣胡学玲李娟范公忍吴忆贫
- 关键词：乙型肝炎病毒S基因真核表达载体ELISA慢性肝病
- HBVP基因YMDD变异的检测及临床应用的初步研究被引量：4
- 2005年
- 目的采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测,对其临床意义进行初步的研究。方法应用分子克隆方法,构建YMDD、YVDD和YIDD变异的阳性质粒,并对该方法进行敏感性及特异性试验。对65例未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功,且该方法具有较好的敏感性和特异性。65例未经拉米夫定治疗的乙型肝炎患者存在YMDD变异,出现变异6例,阳性率为9.07%;其中YIDD和YI/YMDD各1例,YVDD3例,YV/YMDD1例。结论本检测方法简便、实用,在未经抗病毒治疗的患者中可存在YMDD变异,其与野生株一样是自然存在的,抗病毒药物压力不是导致HBVYMDD变异的唯一因素。
- 任永强胡大荣范公忍吴忆贫
- 关键词：乙型肝炎病毒拉米夫定YMDD变异
- 包膜蛋白和核心蛋白共突变体对乙型肝炎病毒在Hep G2细胞中表达的抑制作用
- 2004年
- 目的 探讨包膜蛋白和核心蛋白共突变体对乙型肝炎病毒 (HBV )在HepG2细胞中表达的抑制作用。方法 构建包膜蛋白和核心蛋白共突变的HBV载体 pHBV mSIS/ΔC。瞬时转染HepG2细胞 ,以adwR9转染HepG2细胞为对照 ;用ELISA方法检测上清液中和细胞内HBVS抗原 ;重组载体与adwR9共转染HepG2细胞 ,以pcDNA3与ad wR9共转染为对照组。用荧光定量PCR检测胞内和上清液中病毒量。结果 突变载体转染细胞胞内和上清液中S蛋白表达量及分泌量与adwR9无明显差别 ;突变载体与adwR9共转染组上清液和胞内病毒量较 pcDNA3与adwR9共转染组低。结论 包膜蛋白和核心蛋白共突变对HBVS蛋白的表达量和分泌量没有影响 ,但干扰病毒复制和包装 。
- 胡学玲胡大荣邸雅南李娟范公忍吴忆贫
- 关键词：包膜蛋白核心蛋白共转染乙型肝炎病毒S蛋白
- IL-2和IL-12联合基因治疗小鼠肝癌的实验研究被引量：9
- 2004年
- 目的 探讨瘤内注射共表达mIL 12和hIL 2质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法 构建pDC5 11hIL2 mIL12、pDC5 11mIL 12、pDC5 11hIL 2真核表达质粒载体 ;ELISA方法检测各组质粒在真核细胞的表达 ;小鼠肝癌H2 2皮下移植瘤瘤内注射各组质粒DNA后 ,检测不同时间血清中细胞因子浓度 ;观察各组小鼠存活时间 ,肿瘤大小变化 ;并检测各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞 (cytotoxicTlymphocyte ,CTL)活性。对各治疗组在质粒DNA注射后一月进行瘤体组织学观察。结果 酶切鉴定各组质粒载体 ,均示构建成功 ,并能在真核细胞内高效表达相应细胞因子。瘤内注射各组质粒载体后 ,pDChIL2 mIL12组在不同时间表达的hIL2和mIL12分别与pDC5 11hIL2组 (F =71 11,P <0 0 1)、pDC5 11mIL12组 (F =3 0 70 ,P <0 0 5 )比较有显著性差异。mIL 12基因和hIL 2基因联合治疗组 ,肿瘤生长明显受抑制 ,疗效显著优于各单独治疗组和对照组 (P <0 0 5 ) ,并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强。双基因联合治疗组 ,病灶内肿瘤细胞坏死明显 ,炎性细胞广泛浸润。结论 IL 12、IL 2基因治疗可抑制小鼠肝癌H2 2皮下移植瘤的生长 ,提高机体的抗肿瘤免疫应答 ,两者联合运用可产生协同效应。
- 刘勇胡大荣谭晓华胡学玲范公忍韩聚强吴忆贫
- 关键词：MIL-12HIL-2免疫基因治疗
- 白细胞介素-12治疗小鼠肝癌的实验研究被引量：4
- 2004年
- 白细胞介素(IL)-12能诱导T细胞和自然杀伤细胞(NK)细胞产生多种细胞因子,促进细胞毒性T淋巴细胞(CTL)增殖和功能的活化[1].本实验以瘤内注射表达mIL-12质粒DNA的方式,初步探讨IL-12基因治疗肝癌的作用.
- 刘勇胡大荣熊锦华谭晓华范公忍胡学玲韩聚强吴忆贫
- 关键词：白细胞介素-12小鼠肝癌瘤体内注射
- 包膜蛋白突变对乙型肝炎病毒包装的影响
- 2005年
- 目的 探讨包膜蛋白突变对HBV包装的影响。方法 构建包膜蛋白突变的全长HBV基因组表达载体:前S1突变HBV表达载体pHBV mS1、Sloop突变HBV表达载体pHBV mS和前S1、S共突变HBV表达载体pHBV mS1S。分别转染HepG2细胞,以野生型HBV质粒 (adwR9 )转染HepG2细胞为对照;pHBV mS1S和pcDNA3分别与adwR9共转染HepG2细胞。ELISA方法检测上清液中和胞内S抗原;荧光定量PCR检测胞内和上清液中病毒量。结果 突变体pHBV mS1、pHBV mS和pHBV mS1S与对照组adwR9中S蛋白表达量和分泌量无明显差别;单独转染的突变体胞内病毒量较adwR9高,尤其以pHBV mS1S明显,而突变体上清中病毒量较对照组adwR9低,尤其以pHBV mS1S明显;pHBV mS1S与adwR9共转染组上清液中病毒量较pcDNA3与adwR9共转染组低。结论包膜蛋白突变对S蛋白表达量和分泌量无影响,但影响病毒包装,使病毒分泌量下降。
- 邸雅南胡大荣熊锦华胡学玲李娟范公忍吴忆贫
- 关键词：包膜蛋白PCDNA3病毒量共转染分泌量S抗原
