姜媛媛
- 作品数：7 被引量：59H指数：5
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- SUMO融合系统高效表达可溶性鼠源FGF-21及其活性的研究被引量：7
- 2009年
- 利用SUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达鼠源成纤维细胞生长因子(FGF-21)成熟蛋白,并研究其调节血糖的功能。将鼠源FGF-21成熟蛋白基因亚克隆至SUMO表达载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白,透析后利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得纯度较高的成熟蛋白。将3T3-L1成纤维细胞分化成脂肪细胞,经微量化的GOD-POD法检测培养基中葡萄糖含量,统计学分析葡萄糖消耗率。结果表明,在SUMO表达体系中鼠源FGF-21成熟蛋白基因以可溶形式表达,且可被SUMO蛋白酶I有效地切割,获得纯度较高的成熟蛋白。与未经处理的脂肪细胞对照组相比,经鼠源FGF-21成熟蛋白处理后脂肪细胞对葡萄糖的摄取利用显著增加,残存在培养基中的葡萄糖含量明显减少;两样本比较的t检验,P<0.001,差异极显著。
- 任桂萍姜媛媛刘铭瑶孙国鹏叶贤龙李德山
- 关键词：SUMO分子伴侣葡萄糖吸收
- 高效可溶性重组蛋白表达载体的构建被引量：9
- 2010年
- 本研究构建了两种高效表达可溶性重组蛋白的原核表达载体。一种载体由HisSUMO序列与pET30a(+)载体连接而成(命名为HisSUMO Express),表达的融合蛋白用Ni-NTA纯化,用SUMO蛋白酶I切割后可获得不留任何残基的重组蛋白。SUMO-蛋白酶I价格较贵,为减少表达蛋白的成本,第二种载体即在His-SUMO和目的序列之间加入羟胺切割位点(命名为HisSUMO Economic)。在HisSUMO Economic中表达的融合蛋白用Ni-NTA纯化,羟胺液切割后可获得仅留一个甘氨酸残基的重组蛋白。以在常规表达载体中难以表达的鼠源成纤维细胞生长因子-21(mFGF-21)为例,经葡萄糖消耗实验检测其活性,验证两种表达载体的效果。结果表明mFGF-21在两种载体中均获得了高效表达,融合蛋白占菌体总蛋白的40%以上,Ni-NTA纯化后的融合蛋白分别利用羟胺切割液和SUMO蛋白酶I切割,纯化的mFGF-21成熟蛋白回收量约为54mg/L,回收率约为6%。经两种载体表达后的mFGF-21蛋白均具有生物学活性,可促进脂肪细胞消耗葡萄糖,为进一步研究提供了基础。
- 姜媛媛刘铭瑶任桂萍朱慧萌李德山
- 关键词：高效表达载体
- 治疗Ⅱ型糖尿病创新药物的研究
- 李德山任桂萍李璐刘向宇王文飞刘铭瑶孙国鹏李晋南姜媛媛高华山侯玉婷于艺雪王菁
- 分别克隆了鼠源FGF-21基因和人源FGF-21，在原核系统进行表达，利用融合标签纯化有活性的鼠源FGF-21和人源FGF-21。以鼠成纤维细胞3T3-L1为细胞模型，发现FGF-21具有调节脂肪细胞吸收葡萄糖的作用。在...
- 关键词：
- 关键词：创新药物胰岛素
- 人源FGF-21的高效可溶性表达及其调节血糖功能的初步研究被引量：4
- 2009年
- 将人源FGF-21基因亚克隆至pSUMO表达载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,在pSUMO表达体系中的重组人源FGF-21以可溶形式表达,重组蛋白经镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化,透析后利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得纯度较高的重组人源FGF-21。将3T3-L1成纤维细胞分化成脂肪细胞,经微量化的GOD-POD法检测培养基中葡萄糖含量,统计学分析葡萄糖消耗率。与未经处理的脂肪细胞对照组相比,经重组人源FGF-21处理后脂肪细胞对葡萄糖的摄取利用显著增加,残存在培养基中的葡萄糖含量明显减少(P<0.05,P<0.001)。
- 任桂萍侯玉婷姜媛媛李晋南张薇刘娣李德山
- 关键词：SUMO分子伴侣
- 鼠源成纤维细胞生长因子-21对脂肪细胞糖代谢的作用被引量：19
- 2009年
- 成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导后获得稳定、高效、可溶的表达产物.表达产物经羟胺切割、透析、复性、柱层析纯化后,在每升宿主菌中可获得4mg纯度为95%的成熟鼠源FGF-21蛋白,利用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(POD-GOD)法在小鼠3T3-L1脂肪细胞中进行生物学活性检测.结果表明,鼠源FGF-21具有促进脂肪细胞吸收葡萄糖的作用,短期作用(1h)与胰岛素相似,长期作用(8和12h)明显优于胰岛素.这一结果为以鼠源FGF-21为模型进一步研究FGF-21的生物学活性及其在糖代谢方面的作用机理奠定了基础.
- 姜媛媛刘铭瑶任桂萍王文飞刘晓民李德山
- 关键词：糖尿病糖代谢3T3-L1
- 人IL-1β的克隆及其高效可溶性表达被引量：5
- 2009年
- 目的:从人淋巴细胞中克隆白介素-1β(IL-1β)cD-NA,通过原核可溶性表达纯化,获得具有生物活性的可溶性IL-1β,为深入研究和利用IL-1β基因奠定基础。方法:从人PBMC中克隆出人成熟IL-1β基因,并插入到原核表达载体pSUMO中SUMO标签的下游,构建重组表达载体pSUMO-hIL-1β。将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达hIL-1β/SUMO融合蛋白,经Ni-NTA Agarose纯化后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用protease-1切去SUMO标签,用Real time-PCR鉴定其对人T细胞表达的细胞因子的影响。结果:SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量(Mr)为37000,成熟蛋白Mr为17000,与理论值相符。灰度扫描分析融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的约30%左右,主要以可溶形式存在。Western blot证实该蛋白为hIL-1β。成熟蛋白纯化产物纯度超过90%以上。通过RT-PCR检测证明其具有刺激人T细胞大量表达多种细胞因子(IL-1β,IL-4,IL-10,IL18,IFN-γ,TGF-β,TNF-α)的活性。结论:利用大肠杆菌表达系统完全可以高效可溶性表达较高纯度的具有生物活性的hIL-1β蛋白。
- 尹成凯于艺雪任桂萍李宁姜媛媛徐彤李德山
- 关键词：IL-1ΒSUMOREAL融合蛋白活性检测
- 利用SUMO融合系统高效表达可溶性重组蛋白的研究被引量：22
- 2008年
- 利用pSUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达若干种外源蛋白,如鼠源成纤维细胞生长因子(FGF)-21、人源FGF-21、人源白细胞介素(IL)-1β,并与pET-30a(+)及pTYB11表达系统作比较。将鼠源FGF-21、人源FGF-21及人源IL-1β基因分别亚克隆至pSUMO表达载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白,透析后利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得纯度较高的成熟蛋白。上述基因在pET-30a(+)及pTYB11中表达量极低,考马斯亮蓝染色几乎检测不到。在pSUMO表达体系中这些基因均以可溶形式表达,且可被SUMO蛋白酶I有效的切割,获得纯度较高的成熟蛋白。上述蛋白可在pSUMO表达系统中获得高效可溶性表达。
- 姜媛媛尹成凯李晋南任桂萍张薇李德山
- 关键词：SUMO分子伴侣
