孙大康
- 作品数：41 被引量：95H指数：4
- 供职机构：滨州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省高等学校科技计划项目山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Trim22缺失突变体真核表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建Trim22缺失突变体的真核表达载体,为进一步研究Trim22与HIV-1衣壳蛋白的相互作用奠定基础。方法以野生型Trim22真核表达质粒为模板,用PCR方法扩增出5种类型Trim22缺失突变体的基因片段,克隆到5`-Flag-pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过酶切、菌落PCR及测序进行鉴定。将该载体转染HEK293T细胞,用蛋白印迹及免疫沉淀检测Trim22缺失突变体的蛋白表达。结果通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建5种人Trim22缺失突变体的表达载体,载体均可以在HEK293T细胞中表达。结论成功构建5种人Trim22缺失突变体的真核表达载体,为探寻Trim22与HIV-1衣壳蛋白相互作用的关键结构域奠定了基础。
- 孙大康宿振国安新业周荣佼刘永云
- 关键词：缺失突变体艾滋病病毒
- 呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞与Th17细胞功能变化及意义被引量：38
- 2012年
- 目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞及其分泌细胞因子IL-10、TGF-β、IL-17水平变化与RSV毛细支气管炎发病的关系。方法:收集2010-09/2011-04在滨州医学院附属医院儿科住院的33例RSV毛细支气管炎患儿、28例做为阳性对照的非RSV感染性肺炎患儿(肺炎组)及26例正常对照组的健康体检儿外周血,采用流式细胞术(FCM)检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞、Th17细胞百分率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血浆IL-10、TGF-β、IL-17的水平。结果:RSV毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞、IL-10、TGF-β水平显著低于肺炎患儿及健康体检儿(P<0.05),而Th17、IL-17水平则显著高于肺炎患儿与健康体检儿(P<0.05)。结论:RSV毛细支气管炎患儿外周血存在CD4+CD25+调节性T细胞与Th17细胞表达失衡,可能是RSV毛细支气管炎发病机制之一。
- 李宾吴福玲冯学斌孙大康崔晴晴赵志旭
- 关键词：毛细支气管炎TH17RSV
- 有氧运动对小鼠主动脉自噬相关因子表达的影响被引量：1
- 2019年
- 目的研究有氧运动对小鼠主动脉自噬相关因子表达及自噬活化的影响。方法将8周龄C57BL/6雄性小鼠40只随机分为安静对照组(n=20)与有氧运动组(n=20),其中10只用于Real-Time PCR实验,10只用于Western-blot实验,有氧运动组小鼠进行6周的游泳运动(60 min/d,5 d/周),对照组小鼠自由活动。6周后取小鼠胸腹主动脉,采用Real-Time PCR方法检测自噬相关因子ULK1、Beclin1、LC3B mRNA水平;Western-blot方法检测主动脉LC3B蛋白中LC3B-II/LC3B-Ⅰ比值及p62蛋白水平。结果与对照组相比,有氧运动组小鼠主动脉ULK1、Beclin1、LC3B mRNA水平明显升高(P<0.05);有氧运动组小鼠主动脉LC3B-II/LC3B-Ⅰ比值增大(P<0.05),p62蛋白降解增加(P<0.05)。结论有氧运动能够使主动脉ULK1、Beclin1、LC3B自噬相关因子表达增强,进而增强主动脉自噬活性。
- 郑园园孙大康李洋魏景迅丁荣晶程艳丽
- 关键词：有氧运动自噬主动脉
- HIV衣壳蛋白P24与TRIM22在HEK293T细胞中的表达及共定位被引量：2
- 2015年
- 目的观察人类免疫缺陷病毒(HIV)衣壳蛋白P24与三基序蛋白22(TRIM22)在HEK293T细胞中的共定位情况。方法以慢病毒载体p LP1为模板,通过PCR法扩增p24编码序列,克隆至p DsRed-Monomer-N1真核表达载体。经菌落PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定。将p DsRed-Monomer-N1-p24与p EGFP-N3-TRIM22载体共同转染HEK293T细胞,用荧光显微镜观察p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP的表达及共定位情况。结果经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,成功构建p DsRedMonomer-N1-p24真核表达载体。通过荧光显微镜检测发现,p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP在HEK293T细胞中存在共定位关系。结论 HIV衣壳蛋白P24与TRIM22存在共定位。
- 孙大康安新业周玉明纪兵宋向芹徐殿红
- 关键词：人类免疫缺陷病毒衣壳蛋白P24共定位
- γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路对银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞表达的影响被引量：9
- 2019年
- 目的探讨γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路对银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞表达的影响.方法将45只健康雄性SPF级BALB/c小鼠按照简单随机抽样法等分为对照组、模型组和干预组,模型组和干预组小鼠背部脱毛区均每日外涂5%咪喹莫特乳膏62.5 mg,干预组还在外用咪喹莫特后立即接受γ分泌酶抑制剂(DAPT)10 mg/kg腹腔注射,每日1次;对照组仅每日外涂等剂量白凡士林.共处理6d,采用银屑病皮损严重程度指数(PASI)评估皮损变化.第7天麻醉小鼠心脏取血,取脾脏及皮肤组织,制备单细胞悬液,比较计算各组小鼠脾指数,苏木精-伊红染色观察皮肤组织病理学改变.流式细胞仪检测脾脏及皮肤组织中γδT17细胞比例,实时定量反转录PCR检测脾细胞悬液中Hes1 mRNA表达水平,酶联免疫吸附实验检测血清中白细胞介素17A(IL-17A)含量.采用单因素方差分析和重复测量的方差分析比较各组间指标差异,Pearson相关分析评价不同指标间的相关性.结果末次处理24h后,肉眼观察显示,干预组小鼠银屑病样皮炎改变明显轻于模型组,PASI显著低于模型组,且表皮增厚及真皮炎细胞浸润程度明显轻于模型组.模型组小鼠脾指数(12.534±1.636)、脾脏(24.659%±4.603%)及皮肤组织γδT17细胞比例(22.127%±5.670%)、脾脏Hes1 mRNA表达水平(4.867±0.543)、血清IL-17A含量[(22.478±2.776)ng/L]均明显高于对照组(P<0.01);干预组上述指标分别为9.449±1.040、14.966%±5.770%、13.631%±5.946%、2.541±0.347、(18.639±1.816)ng/L,均显著低于模型组(P<0.01).模型组及干预组小鼠脾脏γδT17细胞比例与血清IL-17A含量均呈正相关(r值分别为0.56和0.53,均P<0.05),皮损γδT17细胞比例与PASI均呈正相关(r值分别为0.56和0.52,均P<0.05),脾脏Hes1 mRNA表达水平与γδT17细胞比例(r值分别为0.61和0.58)、血清IL-17A含量(r值分别为0.60和0.54)均呈正相关(P<0.05).结论γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路
- 王燕芹李新新薛海波纪洪孙大康马蕾
- 关键词：银屑病NOTCH白细胞介素17HES1
- 巨细胞病毒感染与女性不孕的相关性研究被引量：1
- 2012年
- 目的研究巨细胞病毒感染与女性不孕的相关性。方法随机选取了300例女性不孕患者作为研究组,300例孕前健康查体患者作为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的抗HCMV IgM抗体。结果研究组中45例阳性,阳性率为15.0%;对照组中7例阳性,阳性率2.3%,两组比较,差异非常显著(P<0.01)。结论女性不孕症的发生与HC-MV感染有较密切的关系。
- 郑静卓越李彩玉孙大康胡凤爱倪娜
- 关键词：巨细胞病毒不孕酶联免疫吸附试验
- Trim6结合并降解接头蛋白TAB2抑制NF-κB活化被引量：1
- 2012年
- 观察Trim6是否与接头蛋白TAB2存在蛋白相互作用,进而影响TAB2介导的NF-κB荧光素酶报告基因的活化。在HEK293T细胞中共转染Trim6及TAB2的真核表达载体,免疫共沉淀法验证两者是否存在蛋白相互作用;用蛋白印迹法验证Trim6是否能降解TAB2;同时用双荧光素酶报告基因系统检测Trim6是否影响TAB2介导的NF-κB荧光素酶报告基因活化。免疫共沉淀结果证明Trim6与TAB2存在蛋白相互作用;蛋白印迹检测发现Trim6能显著降解TAB2,进而明显抑制TAB2介导的NFκB荧光素酶报告基因的活化。
- 孙大康安新业周荣佼赵延婷宋向芹
- 关键词：蛋白相互作用
- Trim6真核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 目的:构建人Trim6的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Trim6,并观察其在HEK293T细胞中的表达。方法:提取HeLa细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增出Trim6编码区全长基因片段,克隆到pcDNA3.1(+),通过酶切、菌落PCR及测序进行鉴定。将该载体转染HEK293T细胞,用蛋白印迹检测Trim6蛋白的表达。结果:通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建人Trim6表达载体,该载体可以在HEK293T细胞细胞系中表达Trim6。结论:构建Trim6真核表达载体pcDNA3.1(+)-Trim6,为研究Trim6在固有免疫应答中的作用奠定了基础。
- 孙大康安新业胡凤爱李彩玉郑静
- 关键词：真核表达载体
- ERα受体基因多态性与女性原发性急性闭角型青光眼的相关研究
- 2013年
- 目的探讨雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)基因多态性与女性原发性急性闭角型青光眼(acute primary angle-closure glaucoma,APACG)之间的相关性。方法采集113例女性APACG患者(APACG组)和96例年龄匹配的正常女性(对照组)静脉血,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测受试对象ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ基因多态性的分布情况;分析PvuⅡ和XbaⅠ基因多态性与女性APACG发病之间的相关关系。结果所选研究对象基因型分布频率符合Handy-Weinberg平衡定律。APACG组ERα基因XbaⅠXX基因型频率为1.8%,而对照组为9.4%,两组之间XbaⅠ酶切位点多态性差异具有统计学意义(χ2=8.910,P=0.012),两组之间X等位基因频率分别为19.0%和30.7%,相对于x等位基因,暴露于X等位基因的OR值为0.530(OR=0.530,95%CI:0.337～0.832)。PvuⅡ多态性的分布差异无统计学意义(χ2=0.200,P=0.905)。结论 ERα基因XbaⅠ酶切多态性与女性APACG发病之间具有相关性,且X等位基因有可能是其保护性因素。
- 刘佳张磊孙风梅王强孙大康王康郑静
- 关键词：闭角型青光眼雌激素受体Α基因型多态性
- 血小板源性生长因子-BB对体外培养的牛眼小梁细胞中基质金属蛋白酶-2表达的影响
- 2013年
- 背景目前在青光眼的治疗研究中，血小板源性生长因子-BB（PDGF—BB）作为直接作用于小梁网的药物手术刀正处于研究中，期望药物成分能直接作用于小梁网，在不破坏正常房角生理结构的前提下，疏通小梁网房水流出通道，从而达到降眼压的目的。目的探讨PDGF—BB对体外培养的牛眼小梁细胞中基质金属蛋白酶．2（MMP-2）表达的影响及其意义。方法取新鲜牛眼球的小梁组织，以组织块培养法培养小梁细胞，通过形态学观察和神经元特异性烯醇化酶（NSE）染色对培养的细胞进行鉴定。将第3代小梁细胞接种于6孔培养板，在培养基中加入不同质量浓度（0、5．0、12．5、25．0μg／L）的PDGF-BB培养2h，分别采用逆转录PCR（RT—PCR）法和免疫组织化学法观察PDGF—BB对牛眼小梁细胞MMP．2mRNA（相对值）和蛋白在小梁细胞中的表达水平，分析各组培养细胞中阳性信号的吸光度（A）值。结果牛眼小梁组织块培养5～9d时可见细胞游出，第3代小梁细胞可见较多突起，细胞核居中，NSE染色细胞基质中呈绿色荧光。RT—PCR检测结果发现，0、5．0、12．5、25．0Ixg／LPDGF—BB组小梁细胞中MMP-2mRNA／β-actin的A值分别为0．127-＋0．026、0．147-＋0．045、0．178-＋0．053和0．222±0．062，差异有统计学意义（F=56．71，P〈0．05），其中5．0、12．5、25．0μg／LPDGF—BB组小梁细胞中MMP-2mRNA表达量明显高于0μg／LPDGF—BB组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学检测发现，0、5．0、12．5、25．0μg／LPDGF—BB组小梁细胞中MMP-2蛋白表达量（A值）分别为446．12±13．81、1444．65±54．64、2086．18±73．18和3488．65±25．98，差异有统计学意义（F=213．12，P〈0．01），各组间两两比较，差异均有统计学意义（P〈O．05）。结论在体外培养的条件下，PDGF—BB可促进牛眼小梁细胞中MMP-2的表达，其�
- 王康王强孙大康张磊
- 关键词：小梁细胞血小板源性生长因子-BB基质金属蛋白酶-2
