张俊芳
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：东北师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅国际合作项目教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- PIAS家族Myc融合蛋白重组质粒的构建及其调节Smad4类泛素化修饰对前列腺癌细胞增殖的影响
- PIAS(protein inhibitor of activated STAT)家族蛋白是STAT信号转导通路重要的负性调节因子。Smads蛋白家族是重要的转录因子家族,受TGF-β调节磷酸化后转位至细胞核调节靶基因的...
- 张俊芳李江杨南扬甄园丽李晓萌
- 文献传递
- pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒的构建与蛋白表达被引量：3
- 2009年
- 目的:通过基因重组方法构建pCMV-Myc-PIASxβ质粒,在真核细胞中高效表达重组蛋白并进行检测。方法:用SalⅠ和NotⅠ将PIASxβ片段从pGADT7载体中酶切后,利用DNA重组技术将其定向插入pCMV-Myc载体中。获得正确重组质粒后,瞬转CHO细胞系,用Western blotting检测Myc-PIASxβ重组融合蛋白表达。结果:经过酶切,片段回收,连接转化,获得重组质粒。重组pCMV-Myc-PIASxβ克隆通过酶切和测序鉴定其正确性。EcoRⅠ酶切鉴定,pCMV-Myc-PIASxβ为一条大小5 641 bp的条带;XbaⅠ酶切鉴定,pCMV-Myc-PIASXβ为2条大小分别为3 291和2 349 bp的条带,符合预计大小。Western blotting检测证实,在相对分子质量68 000处(PIASxβ融合蛋白)有特异的蛋白表达条带,与重组质粒相符。结论:成功构建了pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒,为深入研究PIAS家族的功能奠定良好的基础。
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- 关键词：重组质粒基因表达
- PIAS3的Myc融合蛋白真核表达重组质粒的构建
- 2009年
- 目的:构建PIAS3(活化型STAT3抑制蛋白)的Myc融合蛋白真核表达重组质粒,并表达融合蛋白Myc-PIAS3。方法:采用PCR方法,扩增鼠PIAS3基因全长cDNA编码区序列。将该1851bp的特异性片段连接到T载体上,将其亚克隆至pCMV-Myc真核表达载体的SalⅠ和NotⅠ位点之间。将pCMV-Myc-PIAS3重组质粒转染前列腺癌PC3细胞,利用Myc抗体通过Western blotting法检测融合蛋白Myc-PIAS3的表达。结果:重组pCMV-Myc-PIAS3质粒通过酶切和测序鉴定了其正确性。EcoRⅠ酶切鉴定时有4357和1318bp2条带,XbaⅠ酶切鉴定时有3291bp和2384bp2条带,与预期结果一致。测序结果显示,13个氨基酸Myc在N端,然后是阅读框架正确的PIAS3的基因序列。pCMV-Myc-PIAS3重组质粒转染PC3细胞,利用Myc抗体通过Western blotting法检测融合蛋白Myc-PIAS3的表达,在相对分子质量68000处检测到特异的蛋白表达条带。结论:成功构建pCMV-Myc-PIAS3重组质粒,并表达融合蛋白Myc-PIAS3。
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- 关键词：PIAS3重组质粒
