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张华堂: 作品数：20 被引量：28H指数：4; 供职机构：中国科学院昆明动物研究所更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划中国科学院知识创新工程重要方向项目中国科学院“百人计划”更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞易感和支持HIV-1的特异表达miRNA群: 本发明涉及艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞易感和支持HIV-1的特异表达miRNA群，属生物医学领域。本发明通过采用高通量的人miRNA芯片，比较未刺激、CD3/CD28磁珠刺激及PHA/IL-2刺激三种状态的CD4+T细...; 张华堂徐雯雯韩妙君陈玲郭彦; 文献传递

树鼩肝细胞体外分离培养体系的复建及主要影响因素分析被引量：8: 2009年; 树鼩(Tupaia Belangeri)与人和灵长类亲缘关系较为接近,是乙型肝炎研究中备受关注的小动物模型,而其原代肝细胞的分离和培养则是建立HBV体外感染模型及应用和基础研究的关键的第一步,但由于以往的文献报道均较为简要,需要较长时间的摸索。本研究通过与机械分离法的直接比较,验证了两步灌注法在树鼩肝细胞分离中的优越性。进而发现,在分离后的体外培养过程中,二甲基亚砜不仅能够促进和维持原代肝细胞的分化,而且能够显著地抑制纤维状细胞群的出现。同时,肝细胞生长因子(HGF)和表皮生长因子(EGF)能够促进肝细胞在体外长期存活。在此优化的条件下,原代培养可持续4—5周,并且较多的细胞聚集形成类似肝窦结构的形态,从而为乙型肝炎病毒感染机理研究和药物筛选提供了必备的先决条件,也为丙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒及单纯疱疹病毒等研究和药物筛选提供了可能。; 张顶高丽张远旭孙丽冯悦何有文夏雪山张华堂; 关键词：树鼩肝细胞肝细胞生长因子表皮生长因子分化

艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群: 本发明涉及艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群，属生物医学领域。本发明通过采用高通量的人miRNA芯片，比较未刺激、CD3/CD28磁珠刺激及PHA/IL-2刺激三种状态的CD4+T细...; 张华堂徐雯雯韩妙君陈玲郭彦; 文献传递

猕猴胚胎干细胞神经分化过程中ASPP家族变化的初步研究(英文): 2010年; 为研究肿瘤细胞凋亡调控因子ASPP(Apoptosis-stimulating protein of p53)家族蛋白(ASPP1,ASPP2,iASPP)在猕猴神经系统细胞早期发育过程中是否存在变化,并初步研究其变化趋势,通过体外诱导猕猴胚胎干细胞定向分化为神经前体细胞模拟猕猴神经系统细胞早期发育过程,并对此过程中细胞内ASPP蛋白量进行检测,检测方法使用细胞免疫荧光和western blotting.实验初步检测出,肿瘤调控因子ASPP家族蛋白在猕猴神经系统细胞早期发育过程中在蛋白量和蛋白分子量上有变化,并且可以初步了解其变化趋势.该实验结果表明ASPP蛋白家族作为肿瘤细胞凋亡调控因子与猕猴神经系统早期发育过程有着密切的关系,这也许对将来治疗神经系统退行性疾病和肿瘤发生有一定帮助.; 陈锐李荣荣季维智张华堂卢欣; 关键词：ASPP2 IASPP 神经前体细胞猕猴胚胎干细胞

人外周血单核细胞来源的树突状细胞的体外“2+2”快速法培养及其鉴定被引量：2: 2008年; 以人浓缩白细胞来源的CD14+单核细胞为前体,建立体外快速培养树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法。采用密度梯度离心和MACS磁珠分选系统,收集高纯度的CD14+单核细胞;以rGM-CSF、rIL-4联合分化2天诱导不成熟DC,再将分化后的细胞以rTNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2共同活化2天得到成熟DC。流式细胞仪检测结果表明,分化2天的不成熟DC具有吞噬能力,且表型HLA-DR、CD40、CD80表达在80%以上,CD83、CD86基本不表达,成熟后的DC能够激活T细胞增殖,HLA-DR表达增高,CD83、CD86表达占85%。; 陆小鹏李剑孙正华赵娜刘洁张华堂; 关键词：单核细胞树突状细胞

稳定表达HIV-1辅助蛋白Rev的THP-1细胞模型的建立和鉴定: 2008年; Human immunodeficiency virus-1(HIV-1)辅助蛋白在其感染和艾滋病发病过程中起着非常重要的作用。Regulator of expression of virion proteins(Rev)作为HIV-1辅助蛋白之一,可以调节病毒结构蛋白mRNA出核转运和蛋白表达,对于病毒的复制至关重要。为研究Rev蛋白对靶细胞表型和功能的影响,本实验采用电穿孔的方法,将HIV-1的rev基因导入THP-1细胞,通过流式分选结合G418筛选的方法建立稳定表达Rev蛋白的细胞模型;并通过RT-PCR、荧光观察及流式检测的方法,在mRNA和蛋白两个水平对所建立的细胞模型进行鉴定。结果证实rev基因成功导入了THP-1细胞并稳定表达,为后续rev基因产物与细胞相互作用的研究提供了平台。; 周慧芳陆小鹏孙正华郭彦张华堂; 关键词：REV THP-1

树鼩CD127全长编码序列的克隆及分子特征分析: 2012年; 目的树鼩可作为多种人类疾病研究的良好模型，但其免疫系统各类细胞表面标志、功能以及在疾病发生、发展过程中的作用和意义尚无系统研究。研究以获得树购调节性T细胞（Tr）相关分子CD127为目的，以分析其分子特征。方法提取树胸外周血总RNA反转录，经巢式PCR扩增获得目的片段，进而以DiscoveryStudio等生物软件进行分析。结果扩增得到全长为1392bp的树鼩CD127编码序列，确定了现有数据库中缺失的一处未知片段。树鼩CD127与人、黑猩猩亲缘关系较近，其氨基酸序列具有较高保守性，蛋白质三维结构整体与人相似，但N糖基化位点数目以及电荷分布存在差异。结论所得序列能够编码具有正常功能的蛋白，全长序列为后续单克隆抗体制备奠定了基础，有助于鉴定树鼩Treg细胞以及相关疾病机理的研究。; 田巍威高跃东郭彦黄京飞肖昌李作生张华堂; 关键词：树鼩 CD127 单克隆抗体

“Levine现象”的发现及相关研究进展被引量：1: 2011年; CD4^＋T细胞是HIV-1感染和破坏的最重要靶细胞。在自然感染和通常的实验体系中，CD4^＋T细胞的活化和增殖是HIV-1得以大量繁殖和广泛播散的先决条件。然而，1996年Levine等报道了一个“奇异”的现象，即在体外培养系统中，经包被在磁珠上的CD3／CD28抗体刺激后，活化、增殖的CD4^＋T细胞反而获得了抵抗感染和清除病毒的能力。这一实验结果引发了极大的关注。; 徐雯雯陈玲张华堂; 关键词：CD4^+T细胞 HIV-1 免疫重建

艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的极端表达基因群: 本发明涉及艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的极端表达基因群，属生物医学领域。本发明通过采用高通量的人表达谱基因芯片，比较未刺激、CD3/CD28磁珠刺激及PHA/IL-2刺激三种状态的CD4+T细胞基因...; 张华堂徐雯雯韩妙君陈玲郭彦; 文献传递

树鼩PD-1基因的分离、鉴定及表达分析(英文): 2009年; PD-1(Programmed cell death 1)是一种抑制性的受体,是免疫球蛋白超家族的成员.大量研究证明PD-1能被诱导而在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NKT细胞和单核细胞上表达,从而在慢性感染的病因学中起着重要作用.树鼩(Tupaiabelangeri)做为一个理想的模型可被应用于许多人类感染性疾病如乙型病毒性肝炎.为了充分利用树鼩对于感染性疾病的宿主免疫应答模型,我们分离出树鼩PD-1基因.利用迅速扩增cDNA末端PCR(RACE-PCR)技术,从树鼩脾组织中克隆了PD-1基因的全长cDNA序列.序列分析显示树鼩PD-1 cDNA的开放阅读框编码一个由242个氨基酸组成的跨膜蛋白,并且和人类、灵长类和啮齿类中的同源基因有高度相似性.组织分布分析表明在所检测的几种组织中PD-1基因只在脾中表达.此外,淋巴细胞刺激实验显示,利用PMA和ionomycin刺激新鲜分离的树鼩外周血单核细胞(PBMCs)能够诱导PD-1 mRNA水平上的表达.我们的结果为将来进一步探讨树鼩的免疫功能提供了良好的基础.; 张旭东邵晓丽张远旭张华堂何有文; 关键词：树鼩 PD-1 外周血单核细胞

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