张文卿
- 作品数:5 被引量:47H指数:2
- 供职机构:北京医科大学临床肿瘤学院更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 体内转染人突变DHFR基因的小鼠骨髓对致死量照射小鼠造血重建和保护作用
- 1999年
- 目的将转染了人突变DHFR基因的小鼠骨髓移植给经致死剂量照射的小鼠,观察其对受者造血功能的重建和保护作用。方法分离转染人突变DHFR基因小鼠骨髓有核细胞,移植给经致死剂量照射的同系小鼠,以甲氨蝶呤(MTX)筛选。观察受体小鼠血象、生存率和CFUGM的改变,并用PCR和Southern印迹杂交分析外源基因在小鼠染色体DNA中的整合与表达情况。对照组以正常同系小鼠为供体。结果在大剂量MTX筛选下,实验组小鼠造血功能逐渐恢复,对照组在30天内全部死亡。实验组骨髓、脾脏和部分肝脏及肾脏组织中均检测到了前病毒标志基因Neor和DHFR基因的特异条带。CFUGM分析提示在不同G418和MTX浓度中均有集落形成。结论转染了人突变DHFR基因的小鼠骨髓能有效地重建和保护受致死量照射受体小鼠的造血功能。
- 张文卿许佐良张文卿许佐良
- 关键词:DHFR造血重建
- 转染人突变dhfr基因的小鼠骨髓细胞对小鼠造血功能的长期保护作用
- 1999年
- 目的:将转染了人突变dhfr基因的第二代小鼠骨髓,移植给经致死剂量照射的第三代小鼠,观察该基因对小鼠造血功能的长期保护作用.方法:分离存活的第二代小鼠骨髓有核细胞,直接移植给经致死剂量照射的同系小鼠,以MTX筛选,观察小鼠血象和生存率变化,PCR和Southem印迹杂交分析目的基因在小鼠染色体DNA中的整合与表达情况.结果:在大剂量MTX筛选下,实验组小鼠造血功能逐渐恢复,对照组3周内全部死亡.实验组生存率和生存期明显高于对照组,但较前两代生存率低.PCR和Southern印迹分析结果提示,实验组脾脏和肝脏组织中均检测到前病毒标志基因neo^R和dhfr基因的特异务带.结论:转染了人突变dhfr基因的第二代小鼠骨髓,能有效地重建经致死剂量照射的第三代小鼠造血功能.保护骨髓免遭大剂量MTX所致的严重骨髓抑制,dhfr基因在小鼠基因组DNA中的稳定整合是这种长期保护作用的物质基础.
- 张文卿许佐良徐光炜于杰赵实诚
- 关键词:骨髓移植基因转染基因疗法耐药基因
- 含人突变DHFR基因的逆转录病毒对造血细胞的转导及造血功能的作用
- 1999年
- 利用逆转录病毒介导,成功地将许多基因导入了造血干细胞,含人突变二氯叶酸还原酶(humandihydrofolatereductase,hDHFR)基因的产病毒细胞AM12-S31,能稳定产生高滴定、安全有效的非复制型逆转录病毒,并能成功转染小鼠造血细...
- 张文卿许佐良于杰赵实诚于杰
- 关键词:逆转录病毒造血细胞造血功能转导
- 中药方剂R_1对耐阿霉素人乳腺癌细胞P糖蛋白表达的影响被引量:42
- 1996年
- 免疫细胞化学技术和Westernblot分析证实MCF7adr细胞P-糖蛋白(PGP)过量表达,而MCF7细胞无PGP表达。1:60R1(复方R1)和1:90R1处理细胞2小时、3小时均使MCF2adr细胞PGP表达下降,并且与药物作用时间和浓度有关。Northernblot分析示MCF1adr细胞mdr1mRNA高表达,而MCF7细胞无表达。1:60R1、1:90R1处理2小时或3小时均使MCF7adr细胞mdr1mRNA表达降低,且随着时间的延长而更加明显。浓度(1:60R1,1:90R1)改变对耐药细胞mdr1mRNA表达下降的影响程度无明显差异。结果提示R1的逆转作用机理之一可能与其从蛋白质和mRNA水平使耐药细胞PGP表达下降.从而增加细胞内药物聚集量和抗癌药细胞毒性有关。
- 张文卿刘叙仪韩复生杨敬贤王萍
- 关键词:耐药细胞阿霉素中药方剂P糖蛋白人乳腺癌细胞
- 人突变DHFR基因高效逆转录病毒载体及其在小鼠造血细胞的表达被引量:5
- 1997年
- 本文用转染了人突变DHFR基因逆转录病毒载体的新一代产病毒细胞AM12-S31,研究了其耐药特性、产生的病毒滴度及DHFR基因在小鼠造血细胞的表达.MTT法显示AM12-S31细胞对G418和氨甲喋呤耐受,对照细胞AM12对G418和MTX敏感.产生的病毒滴度为7.8×10~4~4.2×10~5CFU/ml,且为无复制活性病毒.将AM12-S31上清转染小鼠骨髓造血细胞后进行体内、外研究.CFU-GM分析显示:于不同C418浓度均有阳性克隆,而AM12上清转染组则无耐G418克隆.将转染后骨髓细胞从尾静脉回输给经致死剂量(900 rad)照射小鼠,MTX筛选(第一周为4mg/kg,每周二次;以后各周10mg/kg,每周二次),结果:实验组小鼠白细胞计数和红细胞压积逐渐恢复正常;对照组小鼠 30天内全部死亡.PCR分析耐G418 CFU-GM克隆和实验组小鼠骨髓细胞,均检测到标志基因Neo^R的存在.因此,初步研究表明该产病毒细胞能够产生高滴度、安全有效的非复制型逆转录病毒,并能成功转染小鼠造血细胞、表达目的基因,使在MTX筛选条件下重建小鼠造血功能.该研究为进一步开展耐药基因治疗打下了基础.
- 张文卿许佐良于杰张桂国徐光炜王桂林赵实诚
- 关键词:耐药骨髓移植造血细胞基因转染