- 大肠埃希菌Ⅵ型分泌系统相关蛋白多克隆抗体制备及分泌蛋白检测被引量：1
- 2011年
- 目的为研究新近发现的大肠埃希菌(E.coli)Ⅵ型分泌系统的组成和功能,制备与之相关的三种重要蛋白AaiC、CRP和OmpA的多克隆抗体,并对分泌蛋白AaiC进行检测。方法采用PCR技术扩增出目的基因,并将其连接到pET-22b或pQE80原核表达载体中,酶切及测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达蛋白并纯化,使用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blotting检测抗体。应用AaiC抗体检测E.coli RS218菌株分泌蛋白。结果重组质粒构建成功,并能够在E.coli中高效表达,免疫得到AaiC、CRP和OmpA高效价的特异性多克隆抗体。AaiC抗体检测证实RS218菌株能够分泌AaiC蛋白。结论成功制备了E.coli三种重要蛋白AaiC、CRP和OmpA的特异性抗体,检测出RS218菌株分泌AaiC蛋白,为进一步研究E.coliⅥ型分泌系统的生物学功能以及E.coli的致病机制奠定了基础。
- 施潇磊陈小溪金锐李浩薛佩姚玉峰陶晶
- 关键词：大肠埃希菌多克隆抗体分泌蛋白
