杨升华
- 作品数：21 被引量：62H指数：5
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 改良液氮冻伤法建立易损动脉粥样硬化斑块模型被引量：5
- 2014年
- 目的建立改良液氮冻伤法制作动脉粥样硬化(AS)易损斑块(VP)模型,验证改良法是否优于传统的造模方法。方法雄性新西兰白兔24只随机分为改良方法组(A组)和传统方法组(B组)各12只。分别按照改良方法及传统方法造模,6 w末各组随机抽取4只兔子(A1组=4只,B1组=4只)检测斑块形成状况。A组6 w末、B组10 w末剩余兔子(A2组=8只,B2组=8只)以液氮激发斑块破裂。激发48 h后取出右颈总动脉行HE染色及免疫组化检测斑块内基质金属蛋白(MMP)-1水平。不同时间点分别采集空腹静脉血检测兔血脂水平总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白(LDL)及血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。结果高脂3 d后兔血脂水平已明显升高,1 w后达基础水平的4~15倍;血脂变化曲线可见第1周血脂上升最为明显。与基线水平相比,高脂喂养1 w后两组兔血清hs-CRP即明显升高,至激发前进一步升高,激发后hs-CRP较激发前明显升高;各时间点两组间比较无显著性差异。大体观察及HE染色可见6 w末A1组兔已形成明显的AS化斑块,而B1组兔斑块较小;激发后48 h两组兔子的右颈总动脉均可见AS表面内皮损伤,部分形成血栓;两组易损斑块在组织结构上无明显差异,免疫组化染色见两组斑块处均有MMP-1蛋白的大量表达。结论改良液氮冻伤法可构建易损/破裂粥样硬化斑块,较传统方法明显缩短成模时间,节约造模成本,更快速,更高效。
- 王双双王丽丽杨升华孔根现蒋知新
- 关键词：血脂炎性因子
- 褪黑素及其受体激动剂改善慢性睡眠限制SD大鼠氧化应激及胰岛素抵抗
- 目的:观察睡眠限制对大鼠胰岛素抵抗和氧化应激状态的影响,并进一步研究Neu-P11改善胰岛素敏感性和氧化应激的分子机制。 方法:将25只雄性SD大鼠随机分为正常笼养(HCC)组,睡眠限制(SR)组,睡眠限制给予 Neu...
- 杨升华
- 关键词：褪黑素胰岛素抵抗氧化应激胰岛素敏感性
- HDL影响冠心病患者血小板ox-LDL诱导活化的体外分析被引量：7
- 2015年
- 目的探讨高密度脂蛋白(HDL)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人血小板活化的影响。方法将洗涤血小板按照等体积分为3组,Ⅰ组加入100μg/mL HDL;Ⅱ、Ⅲ组均加入PBS,3组均置于37℃环境下孵育15min。Ⅰ、Ⅱ组加入50μg/mL ox-LDL;Ⅲ组加入PBS,3组均在37℃再孵育15min。应用流式细胞仪检测3组CD62P表达水平,应用透射电镜观察3组血小板的形态结构。结果3组的血小板CD62P表达率差异有统计学意义(P<0.05),且Ⅱ组(29.26±5.91)%>Ⅰ组(15.37±1.49)%>Ⅲ组(2.05±0.85)%;3组的血小板CD62P平均荧光强度(MFI)存在差异(P<0.05),且Ⅱ组(3.97±0.64)>Ⅰ组(2.51±0.53)>Ⅲ组(1.50±0.10)。Ⅱ组血小板脱颗粒比Ⅰ组更明显,Ⅲ组未发生脱颗粒。结论 HDL能显著抑制oxLDL体外诱导的血小板活化。
- 李运田杜大勇杨升华柳杨
- 关键词：血小板
- 静脉注射间充质干细胞对兔颈动脉易损斑块的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨静脉注射骨髓间充质干细胞(MSC)对动脉粥样硬化易损斑块(VP)稳定性的影响。方法选择雄性新西兰大白兔30只,随机分为MSC组,VP组,稳定斑块(SP)组,每组10只。分别于细胞移植后3d、1周、2周采集兔血清,ELISA法检测血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)、TNF-α、白细胞介素6(IL-6),白细胞介素10(IL-10)水平。10周末处死所有动物,取右侧颈总动脉分别行HE染色观察镜下病变,并测量纤维帽/脂核横截面厚度的比值。结果 SP组粥样硬化斑块形态结构完整,纤维帽较厚,斑块内炎性细胞较少,未见斑块破裂。VP组斑块中心可见大量脂核,表面覆盖较薄纤维帽,肩部可见残存泡沫细胞和大量炎性细胞浸润,部分斑块可见破裂和(或)血栓形成。MSC组形态介于之间。MSC组和SP组纤维帽/脂核比值明显高于VP组(P<0.01)。与VP组比较,MSC组各时间点hs-CRP、TNF-α和IL-6水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01);与SP组比较,MSC组和VP组各时间点hs-CRP、TNF-α、IL-6和IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论 MSC可降低斑块不稳定性,其机制可能与降低机体炎性因子水平、增加抑炎因子及减轻炎性反应有关。
- 王双双杨升华孔根现薛峰何薇蒋知新
- 关键词：间质干细胞移植颈动脉疾病C反应蛋白质白细胞介素6白细胞介素10
- 氧化性低密度脂蛋白对血小板脱颗粒影响的性别差异
- 2014年
- 目的探讨氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)对血小板脱颗粒影响的性别差异。方法分别采集健康成年男、女性静脉血,制备洗涤血小板并分别以ox-LDL(50μg/mL)、磷酸盐缓冲液(PBS)处理,并分组为男ox-LDL组、男PBS组、女ox-LDL组及女PBS组,以流式细胞仪检测各组血小板α颗粒膜蛋白(CD62P)释放水平。结果女ox-LDL组血小板CD62P表达率为(24.81±2.61)%,高于女PBS组的(1.30±0.16)%(P<0.001);男ox-LDL组血小板CD62P表达率为(49.02±3.55)%,高于男PBS组的(1.44±0.09)%(P<0.001)。男ox-LDL组CD62P表达率明显高于女ox-LDL组的(P<0.001),而男PBS组与女PBS组间CD62P表达率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ox-LDL诱导的血小板CD62P释放存在性别差异,且男性高于女性。
- 杨升华杜大勇柳杨路怀志张雁斌薛峰李运田
- 关键词：血小板OX-LDL性别
- 温控气体损伤建立兔动脉粥样硬化易损斑块模型被引量：3
- 2015年
- 目的利用持续恒定低温气体损伤血管内皮,结合高脂饮食,建立兔颈动脉粥样硬化易损斑块动物模型。方法新西兰雄性白兔24只,3月龄,随机分为空白对照组、假手术组和温控气体损伤组,每组8只。高脂饮食喂养1周后对温控气体损伤组利用低温气体给予血管内膜损伤处理,假手术组单纯给予有创手术操作,术后两组均继续给予高脂饮食12周;空白对照组给予持续普通饮食。术后13周处死动物,取血管行HE、Masson、弹力纤维、油红O染色,观察血管形态,并做小鼠抗兔巨噬细胞抗体11免疫组织化学染色。结果温控气体损伤组可见薄的纤维帽、大脂质核心,内膜有巨噬细胞及泡沫细胞浸润,部分内皮脱落,斑块出现裂隙,局部小血栓形成,形成典型的易损斑块;假手术组多表现为内膜增生,部分存在小斑块,内皮下见泡沫细胞浸润,符合脂纹期改变,为初级斑块;空白对照组未见斑块形成。结论利用恒定低温气体损伤兔颈动脉内膜结合高脂饮食可建立典型的易损斑块模型,且方便易行。
- 路怀志杜大勇柳杨李沫言薛峰杨升华张雁斌李运田
- 关键词：易损斑块动物模型内皮损伤
- CD147基因沉默对亲环素A趋化作用及MMP-9表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨CD147在亲环素A(cyclophilin A,CyPA)诱导单核/巨噬细胞趋化过程及MMP-9表达中的作用。方法根据兔源CD147 mRNA的序列构建能高效抑制兔外周血单核/巨噬细胞CD147表达的shRNA慢病毒载体,将分离出的兔外周单核/巨噬细胞分为空白对照组、NC对照组、CD147慢病毒组。对NC对照组及CD147慢病毒组分别给予空白慢病毒、CD147-shRNA慢病毒转染,以荧光显微镜观察转染效果。采用流式细胞仪检测膜CD147水平,并检测CD147 mRNA及蛋白水平,采用微孔小室趋化实验检测CyPA对单核/巨噬细胞的趋化作用。对三组单核/巨噬细胞分别加入CyPA,孵育12 h后ELISA检测上清液中MMP-9含量。结果 CD147慢病毒组单核/巨噬细胞CD147表达水平较其他两组明显降低(P<0.01),基因沉默CD147降低了CyPA对单核/巨噬细胞的趋化作用(P<0.05)及CyPA诱导的MMP-9(P<0.05)产生。结论CyPA对单核/巨噬细胞趋化作用依赖或部分依赖于膜CD147水平,阻断CyPA-CD147相互作用可显著降低单核/巨噬细胞MMP-9表达水平。
- 路怀志杜大勇李雪杰薛峰杨升华李运田
- 关键词：亲环素ACD147易损斑块
- 静脉输注间充质干细胞可稳定动脉粥样硬化易损斑块被引量：1
- 2013年
- 目的建立动脉粥样硬化易损斑块(VP)模型,并静脉输注骨髓间充质干细胞(MSCs),验证MSCs对VP稳定性的影响。方法雄性新西兰兔24只,随机分为3组,VP组(n=8)制作VP模型;VP+MSCs组(n=8)制作VP模型后即刻静脉输注1×107 MSCs;SP组(n=8)制作稳定斑块模型。12周末处死所有动物,取右侧颈总动脉行H-E染色和Masson染色,并测量纤维帽厚度和脂核横截面厚度的比值。行免疫组化染色检测斑块内基质金属蛋白酶2(MMP-2)的含量。结果 H-E染色结果:VP组斑块中心可见大量脂核,斑块表面覆盖较薄纤维帽,在斑块肩部可见残存泡沫细胞和大量炎细胞浸润,部分斑块可见破裂及(或)血栓形成;SP组镜下可见粥样硬化斑块形态结构完整,纤维帽较厚,斑块内炎细胞较少,未见斑块破裂;VP+MSCs组形态介于两者之间。帽/核比值SP组>VP+MSCs组>VP组,VP组与VP+MSCs组和SP组比较差异有统计学意义(P<0.01)。Masson染色结果:SP组平滑肌细胞和弹力纤维含量高于其他两组,VP+MSCs组次之,VP组最少。斑块内MMP-2表达水平:VP组斑块内MMP-2大量表达,主要位于纤维帽和脂质核心;与VP组相比,VP+MSCs组和SP组MMP-2的表达减少,差异有统计学意义(P<0.01);VP+MSCs组MMP-2表达高于SP组(P<0.01)。结论 MSCs静脉输注干预兔VP模型,可降低斑块不稳定性,其机制可能与减少炎性细胞聚集、降低MMP-2含量、减少胶原纤维降解有关。
- 王双双杨升华王丽丽孔根现高玉龙蒋知新
- 关键词：动脉粥样硬化易损斑块间质干细胞移植基质金属蛋白酶2
- 不同剂量瑞舒伐他汀对兔颈动脉粥样硬化斑块内CD147表达的影响被引量：6
- 2014年
- 目的探讨不同剂量瑞舒伐他汀对兔颈动脉粥样硬化斑块内的CD147表达水平以及斑块稳定性的影响。方法将40只新西兰雄性大白兔随机分为五组:空白对照组、模型对照组(液氮损伤+高脂饲料建立动脉硬化模型)、低中高浓度药物干预三组(造模后分别予以瑞舒伐他汀1 mg·kg-1·d-1干预、2.5 mg·kg-1·d-1干预和5 mg·kg-1·d-1干预),15周后对兔颈总动脉血管进行病理形态学检查,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测斑块内CD147 mRNA表达水平及蛋白质印迹法(Western blot)检测斑块内CD147蛋白表达水平。结果第15周末,模型对照组斑块内CD147 mRNA、CD147蛋白表达水平明显高于空白对照组(P<0.05)。病理显示模型对照组颈动脉内可见大量的不稳定斑块,模型对照组的8只兔中5只出现明显斑块破裂及血栓形成,而空白对照组的8只兔血管内膜光滑。瑞舒伐他汀干预,斑块内CD147 mRNA、CD147蛋白表达水平与模型对照组相比明显降低(P<0.05),且具有剂量依赖性,表现为高浓度药物干预组表达水平最低。病理显示瑞舒伐他汀干预后颈动脉动脉硬化斑块均较为稳定,动脉粥样斑块的面积明显减小,斑块纤维帽增厚,且具有剂量依赖性。结论兔颈动脉不稳定斑块内CD147的表达增多;瑞舒伐他汀能通过抑制CD147表达从而发挥其稳定动脉硬化斑块的作用,具有剂量依赖性。
- 杜大勇薛峰李运田李雪杰路怀志杨升华张燕滨
- 关键词：动脉粥样硬化基质金属蛋白酶类瑞舒伐他汀
- CFSE标记对兔骨髓间充质干细胞生物学特性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨荧光染料羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记兔骨髓间充质干细胞（Rb—MSCs）的条件及其对Rb-MSCs生物学特性的影响。方法用全骨髓贴壁法分离纯化Rb—MSCs并进行鉴定；CFSE在不同条件下标记Rb—MSCs，流式细胞仪检测标记率及荧光强度；CCK．8法检测标记细胞的增殖能力，成骨成脂诱导检测标记细胞的分化能力，ELISA法检测标记细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）的能力。结果原代Rb-MSCs呈梭形，集落样生长；传代后细胞变为形态均一，排列有序的成纤维细胞样，流式细胞仪检测其表面标志物符合MSCs表型。与其它标记条件相比，10μmol／L终浓度CFSE标记Rb-MSCs10min，标记率达100％，且荧光强度高。标记细胞的增殖能力及分泌VEGF的能力与未标记细胞相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；且标记细胞具有成骨及成脂的分化能力。结论CFSE标记Rb—MSCs是一种简单且高效的方法，适用于短期标记。且标记后Rb—MSCs的增殖能力、分化能力及分泌能力不受影响。
- 王双双孔根现杨升华薛临先张清华蒋知新
- 关键词：骨髓细胞细胞学间质干细胞细胞学细胞
