杨媛
- 作品数：13 被引量：35H指数：3
- 供职机构：解放军第306医院更多>>
- 发文基金：重庆市科学技术委员会院士基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脐血源性MSCs成骨诱导分化后对DCs的免疫抑制研究被引量：4
- 2012年
- 目的探讨人脐血源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells derived from umbilical cord blood,UCB-MSCs)经成骨诱导分化后,对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的分化、成熟及免疫功能的影响。方法对UCB-MSCs通过细胞形态、表面标记及成骨诱导分化能力进行鉴定;在外周血单核细胞培养体系中加入GM-CSF+IL-4+TNF-α,刺激DCs诱导分化及成熟;收集与成骨诱导分化前后UCB-MSCs共培养的DCs,流式细胞仪检测DCs免疫表型的表达情况;将成熟DCs作为刺激因素,外周血淋巴细胞作为反应细胞,3H-TdR标记β液体闪烁计数仪检测与成骨诱导分化前后UCB-MSCs共培养后,DCs刺激淋巴细胞增殖能力的变化。结果人UCB-MSCs成骨诱导分化后能抑制DCs表面CD40、CD80、CD83、CD86和MHC-II的表达,上调CD14的表达;DCs具有明显刺激淋巴细胞增殖的功能,而UCB-MSCs成骨诱导分化后能显著抑制DCs刺激的淋巴细胞增殖。结论成骨诱导分化的UCB-MSCs在体外可抑制同种异体DCs的分化、成熟及免疫功能,为UCB-MSCs作为同种异体源性种子细胞在骨组织工程中的应用提供了依据。
- 王蒙杨媛史春梦粟永萍
- 关键词：免疫抑制骨组织工程
- 人TALL-1基因在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的研究在毕赤酵母(Pichia Pastoris)系统中人TALL-1基因的分泌表达,获得具有生物活性的重组TALL-1。方法将人TALL-1基因插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的酵母表达载体pPIC9K中,用SacⅠ将重组质粒线性化,电转化Pichia Pastoris GS115感受态细胞,筛选阳性整合子并进行甲醇诱导表达,采用MTT对表达产物进行初步的生物活性检测。结果经过诱导表达条件的优化,人TALL-1在酵母培养基BMMY中实现了分泌表达;免疫印迹和酶联免疫检测结果显示,重组产物可以结合其特异抗体;生物学活性检测证实其可抑制Hela细胞增殖。结论在毕赤酵母系统中实现了人TALL-1的分泌表达,具有生物学活性的重组TALL-1分子可以用于进一步的结构与功能研究。
- 王蒙杨媛杨峥嵘李广阔刘晓红粟永萍程天民
- 关键词：分泌表达毕赤酵母
- 人脐血源性MSCs成骨诱导分化后的免疫调节作用被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨脐血源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)经成骨诱导分化后,其对淋巴细胞的免疫调节作用。方法:从人脐血中分离、培养及扩增MSCs,流式细胞仪测定细胞表型;将获得的MSCs在成骨诱导体系中诱导分化并鉴定,将诱导后的成骨细胞分别以不同剂量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用3H-TdR标记β液体闪烁计数仪检测细胞增殖,观察对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响。结果:从人脐血中分离获得的MSCs,呈成纤维样的细胞形态,CD29和CD105表达阳性,CD34和CD45表达阴性;在成骨诱导剂诱导下,具有成骨细胞样表型,可表达碱性磷酸酶,并形成矿化结节;人脐血源性MSCs经成骨诱导分化后在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有明显的抑制作用,抑制作用与细胞数量呈正相关。结论:脐血源性MSCs诱导为成骨细胞后对同种异体淋巴细胞具有免疫调节作用,为其作为骨组织工程异基因种子细胞来源打下基础。
- 王蒙杨媛粟永萍马华松邹德威
- 关键词：免疫调控骨组织工程
- RNAi抑制H157细胞Wnt5a表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建抑制大鼠Wnt5a基因表达的重组质粒,达到抑制H157细胞Wnt5a表达的目的。方法根据大鼠Wnt5a的基因序列,设计合成含有发夹结构的2条寡核苷酸片段,经退火形成双链后克隆至PAVU6+27载体质粒中,对阳性重组子进行酶切和测序鉴定后转染正常H157细胞,并采用West-ern blot检测Wnt5a蛋白水平表达的变化。结果重组质粒经双酶切后,有目的条带出现,提示Wnt5a干扰片断已克隆至PAVU6+27载体质粒中,DNA测序结果显示插入序列与预先设计完全一致。重组质粒转染H157细胞后经G418筛选,成功获得阳性克隆,Western blot结果显示Wnt5a的蛋白水平表达显著下降。结论成功构建Wnt5a基因RNA干扰表达质粒,明显抑制H157细胞中Wnt5a表达,这为深入研究该基因在非小细胞肺癌发生及侵袭转移中的作用奠定了基础。
- 黄英刘国祥熊玮杨和平章波杨媛
- 关键词：WNT5ARNAI转染
- 重组人TALL-1基因全长及其胞外区片段的克隆和表达
- 2004年
- 目的 获得人TALL 1基因全长及其胞外区片段 ,构建重组表达载体并对其诱导表达。方法 利用RT PCR技术从人外周血单个核细胞中扩增出TALL 1全长及其胞外区基因编码区序列 ,克隆于载体pGEX 4T 1中 ,测序证实序列正确后转化大肠杆菌BL2 1,以IPTG诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析表达产物。结果 ①从人外周血单个核细胞中扩增出编码TALL 1基因全长及其胞外区片段cDNA序列 ,序列测定证实与文献报道的序列一致 ;②成功构建了GST融合表达载体pGEX 4T 1 hTALL 1和pGEX 4T 1 sTALL 1;③表达了hTALL 1 GST和sTALL 1 GST融合蛋白。结论 人TALL 1基因全长及其胞外区片段的克隆成功及融合蛋白的表达 ,为进一步探索TALL 1抗原表位打下了基础。
- 王蒙杨媛杨峥嵘刘晓宏李广阔艾国平粟永萍程天民
- 关键词：克隆抗原表位
- 人脐血源性MSCs的免疫调节作用被引量：6
- 2007年
- 目的从人脐血中分离、培养间充质干细胞(MSCs)并探讨其对淋巴细胞的免疫调节作用。方法淋巴细胞分离液分离人脐血单个核细胞,利用贴壁筛选法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型;将获得的MSCs分别以不同数量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用H3-TdR标记β液体闪烁计数仪检测细胞增殖,观察脐血来源的MSCs对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响。结果从人脐血中分离获得的贴壁细胞,呈成纤维样的细胞形态,CD29、CD105和CD166表达阳性,CD14、CD34和CD45表达阴性;人脐血源性MSCs在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有明显的抑制作用,抑制作用与细胞数量呈正相关。结论从人脐血中可以成功地分离出MSCs,其对同种异体淋巴细胞具有免疫调节作用,为其作为骨组织工程异基因种子细胞来源打下基础。
- 王蒙杨媛杨东明王序全许建中
- 关键词：脐血免疫调控骨组织工程
- 人TALL-1可溶性功能片段在毕赤酵母中的分泌表达
- 2007年
- 目的在毕赤酵母系统中分泌表达具有生物活性的人TALL-1基因胞外区片段(sTALL-1)。方法构建酵母重组表达质粒pPIC9K-sTALL-1,电转化法将SacI线性化的重组质粒转导入毕赤酵母菌GS115中,经G418筛选获得高拷贝转化子及表型鉴定后,用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达。结果成功构建酵母重组表达质粒pPIC9K-sTALL-1;甲醇诱导表达后,sTALL-1在酵母培养基中得到分泌表达;Westernblot和ELISA检测证实重组产物可以结合其特异抗体;MTT检测证实其对Hela细胞具有细胞毒效应。结论在毕赤酵母系统中实现了人sTALL-1的分泌表达。
- 王蒙杨媛杨峥嵘李广阔粟永萍罗成基程天民
- 关键词：基因毕赤酵母基因表达
- 人TALL-1基因毕赤酵母表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 克隆人TALL 1基因全长及其胞外区片段 ,构建人TALL 1及其胞外区蛋白毕赤酵母分泌型表达载体。方法 从人新鲜淋巴结组织中提取总RNA ,利用RT PCR技术扩增人TALL 1及其胞外区基因编码区序列 ,构建人TALL 1及其胞外区cDNA毕赤酵母表达载体 ,并进行序列测定。结果 克隆获得的 85 8bp和 4 5 9bp片段与文献报道的人TALL 1全长及其胞外区基因编码区cDNA序列一致 ,将目的基因插入酵母表达载体pPIC 9Kα因子分泌信号肽下游。结论 本实验为大量获得人TALL 1蛋白及其可溶性功能蛋白 。
- 王蒙粟永萍杨媛刘晓宏杨峥嵘李广阔程天民
- 关键词：毕赤酵母
- RNAi作用机制研究进展及其应用被引量：16
- 2005年
- RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA(doublestrandedRNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默机制(posttranscriptionalgenesilencing,PTGS)[1]。RNA干扰可以简单、有效、特异地下调细胞中基因的表达,它不但是研究基因功能的一种有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。本文介绍了目前RNA干扰作用机制,与之相关的酶、蛋白、“扳机点”和调节因子,及RNA干扰在生物学方面的应用。
- 杨媛王蒙粟永萍
- 关键词：RNAI基因沉默基因功能分析
- 电离辐射后ERp29蛋白在IEC-6细胞中的表达
- 2006年
- 目的探讨大鼠空肠上皮细胞株(IEC-6)受到不同剂量γ射线照射后,ERp29蛋白(endoplasmic reticulum protein)在不同时相点的表达变化情况。方法分别提取正常IEC-6细胞和5、101、52、0 Gy照射后3、12、24、48、72 h细胞的蛋白样品,采用Western blotting方法检测ERp29的表达。结果不同剂量照射后IEC-6 ERp29蛋白表达比正常细胞高,蛋白表达随照射时间的增加而增加。结论电离辐射可诱导IEC-6细胞高表达ERp29蛋白,提示该蛋白在肠道的损伤修复中起重要作用。
- 杨媛章波王蒙艾国平粟永萍
- 关键词：电离辐射肠上皮细胞WESTEMBLOTTING
