杨树德
- 作品数：25 被引量：119H指数：6
- 供职机构：北京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- AFP启动子对绿色荧光蛋白在人肝癌细胞中表达的影响被引量：3
- 2001年
- 目的研究AFP5′端3.1kb启动子序列对GFP在人肝癌细胞中表达的影响。方法首先采用重组DNA技术,构建了由AFP5′端前导序列AFP启动子+AFPEI增强子,3.1kb调控的绿色荧光蛋白GFP报告基因哺乳动物表达载体pcDNA3-GFP-AFP-w,然后将pcDNA3-GFP-AFP-w、pcDNA3-GFP及空载(pcDNA3-neo)经lipofectin分别转染Bel7402、Hela二种肿瘤细胞,G418抗性筛选得到含各不同质粒的稳定阳性细胞克隆,Westernblotting和密度积分扫描检测GFP基因的表达。结果转染pcDNA3-GFP-AFP-w细胞的GFP表达量在Bel7402中明显高于Hela细胞,在Hela细胞中GFP几乎不表达,但均低于相应转染pcDNA3-GFP的细胞,呈现一定的专一性。结论AFP5′端3.1kb启动子序列调控的GFP报告基因载体pcDNA3-GFP-AFP-w对Bel7402肝癌细胞呈现一定的细胞专一性。
- 茆灿泉黄常志杨树德赵玫范云霞徐枫杜菲
- 关键词：报告基因GFPAFP启动子转染绿色荧光蛋白肝癌
- 高效毛细管电泳的现状,发展趋势及其临床应用
- 1998年
- 陈亚非杨树德
- 关键词：高效毛细管电泳
- 直接杂交法检测痰液中结核分枝杆菌被引量：2
- 2001年
- 目的建立了一种高度灵敏、特异、快速和简便的探针杂交检测技术，以解决临床上结核病快速诊断的难题。方法采用简易的方法处理标本，以对结核分枝杆菌特异的生物素标记 １８８ ｈｐ ＤＮＡ探针进行点杂交，与链霉亲合素标记的辣根过氧化酶偶联后，以化学发光自显影方式记录检测信号。结果 此法的敏感性可检出２００个菌，较ＰＣＲ法为高。对２０种分枝杆菌和９种非分枝杆菌检测时发现只有结核分枝杆菌呈阳性。以本法检测１０４例临床标本，结果发现，对其中４５例结核病人痰涂片阳性标本，４１例结核病人痰涂片阴性标本和１８例非结核标本，检测阳性率分别为１００％、６５．９％和０．０％。结论本法简便，特异。
- 杨华卫杨树德庄玉辉张灵霞
- 关键词：结核分枝杆菌痰液
- 两种DNA探针杂交检测结核分支杆菌方法的研究被引量：4
- 2000年
- 为改进结核杆菌DNA探针的特异性与实用性,研制了以生物素标记的两种对结核分支杆菌特异的DNA探针:一个5’端标记的20bp的寡核苷酸探针和一个采用PCR方法合成的188bp长链探针。两种探针分别与结核分支杆菌的全染色体DNA,以及基因组上IS6110序列的一段317bp的PCR扩增产物进行斑点杂交,以碱性磷酸酶(AP)催化的染色反应检测,测试了两个探针的敏感性和特异性。系统地比较研究了两种探针杂交检测条件:探针的浓度选择,杂交温度与洗膜温度的选择,以及杂交与洗膜温度对检测的敏感性与特异性的影响。寡核苷酸探针和188bp探针杂交检测纯化结核分支杆菌基因组DNA的敏感性分别为100ng与6ng,杂交检测PCR产物的敏感性分别是400pg与50pg。两探针的最佳杂交浓度均为40～160ng/ml,最佳杂交温度分别是42℃与68℃,最佳洗膜温度分别是60℃与60～68℃之间。两种探针均仅与结核分支杆菌及BCG有杂交信号,而与其它受试分支杆菌及非分支杆菌杂交结果都呈阴性。它们的特异性都很强,但188bp探针的敏感性约是寡核苷酸探针的7～16倍,而且188bp探针检测本底较低。
- 杨华卫杨树德庄玉辉李国利李邦印
- 关键词：斑点杂交结核分支杆菌DNA探针
- 当代临床检验中的固相化学被引量：10
- 1995年
- 临床检验中的固相化学(Solid Phase Chemistry),实际上是指相对于经典“湿化学”(WetChemistry)的干化学(Dry Chemistry)。因此在临床化学中,固相化学,干化学或干试剂化学的意义相同,都主要是指将液体检品(血清,血浆,全血,尿液等)直接加到在特定载体的干燥试剂上,并以检品中的水作为溶剂,使检品中的欲测成份与试剂进行化学反应并从而进行分析测定的方法。更广义地说,基于Kubelka-Munk理论的薄层扫描法在临床化学或临床检验中也有着相当广泛的应用,而且Kubelka-Kunk理论也正是当代临床化学中固相化学方法的理论基础之一,故从整体上来说,临床检验的固相化学,似亦可包括薄层扫描法。但色谱分离本身为一“湿法”过程,且使用薄层扫描光度计的薄层扫描法,特别是其中的高效薄层色谱法(HPTLC),已作为近年得到复苏的色谱方法为人们所熟知,因此本文将不涉及这方面的内容。当代临床检验中的固相化学法,最具代表性的是所谓多层膜法(Mlutiple Layer,Film),它集现代化学、光学、酶工程、化学计量学和计算机技术于一体,已使其作为定量方法达到常规湿法测定的水平,对有些项目的测定,则几可与参考方法相媲美,如在欧美各国倍受重视的胆固醇的测定就是如此。由于其准确度、精密度高,可测定少量检品,不需配制试剂。
- 杨树德
- 简论临床化学商品标准液的质量检定方法被引量：1
- 1995年
- 简论临床化学商品标准液的质量检定方法杨树德，王治国，王玉琛（卫生部临床检验中心，北京１００７３０）体外诊断试剂的检定，是保证临床检验质量的重要前提之一。此项工作在我国已开始进行，卫生部并已对此正式下达了文件［１］。对于各类试剂盒，一般可参照试剂盒的说...
- 杨树德王治国王玉琛
- 关键词：诊断试剂
- 一种新的氨基酸测定衍生化方法被引量：24
- 1998年
- 采用２，４二硝基氟苯作为衍生化试剂，１６种常见人体生理性氨基酸为分析对象，区带毛细管电泳为分离模式，建立一种新的氨基酸衍生化方法。系统研究了反应时间、反应温度和ｐＨ值对衍生化反应的影响。同时观察了４℃和２５℃室温下衍生化产物的稳定性情况，结果发现，无论是在４℃冰箱，还是在２５℃室温下，氨基酸衍生化产物保存５天，紫外吸收值无明显改变。方法的性能指标测定表明，该法的线性在１０～７００μｍｏ１／Ｌ范围内良好（γ在０．９６４～０．９９５之间）。最低检测限（Ｓ／Ｎ＝２）为２．５～７．９μｍｏｌ／Ｌ。测得平均回收率在８６．３～１０７．４％之间。该法具有衍生化反应操作简便、灵敏度高、稳定性好、线性及回收率佳等特点，不仅可用于氨基酸的衍生化反应，而且同样适合于其它含有氨基的生物活性物质的衍生化反应。
- 沈佐君李小鹏孙曾培孙曾培
- 关键词：氨基酸衍生化毛细管电泳
- 多胺的测定方法及其临床应用被引量：6
- 1994年
- 多胺(Polyamine,PA)是指三胺的精脒(Spermidine,Spd,又称亚精胺)和四胺的精胺(Spermine,Spm),习惯上人们往往将其前体物二胺的腐胺(Putrescine,Put)亦包括在多胺的范围内.它们都是一些小分子脂肪族非蛋白质含氮化合物,这些物质广泛地分布在原核和真核细胞体内.研究发现,多胺与细胞内DNA、RNA及蛋白质的合成有密切关系,在细胞生长分化活跃的组织内,它们的含量明显增高.
- 沈佐君杨树德
- 关键词：多胺
- 细菌荧光酶报告基因载体构建及在Hela细胞中的表达
- 1999年
- 采用ＰＣＲ点突变技术，构建含有细菌荧光酶融合ｌｕｘＡＢ报告基因的重组哺乳动物载体ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ，脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染和Ｇ４１８抗性筛选稳定转染的Ｈｅｌａ细胞。ＰＣＲ和酶切电泳证明构建的正确性；经稳定转染ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ的Ｈｅｌａ细胞，用发光仪可测得较强的发光强度（最大值为４．１２ｍＶ／４０μｇ细胞总蛋白粗提物）。而亲本及ｐｃＤＮＡ３稳定转染的Ｈｅｌａ细胞则在本底值范围，ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ稳定转染与亲本及ｐｃＤＮＡ３稳定转染的Ｈｅｌａ细胞在细胞形态和培养条件等方面无明显差异。本工作为细菌荧光酶作为报告基因在肿瘤细胞中的表达和应用建立了基础。
- 茆灿泉杨树德赵玫范云霞徐枫杨华卫黄常志
- 关键词：报告基因PCR
- 反相高效液相色谱法测定血清中γ-氨基丁酸被引量：13
- 1998年
- 建立一种高灵敏度的氯甲酸芴甲酯柱前衍生荧光检测反相高效液相色谱法测定血清中γ氨基丁酸的方法．内标为己氨酸，固定相为ＳｈｉｍＰａｃｋＣＬＣＯＤＳ（Ｍ），４６ｍｍ×１５０ｍｍ，填充料为５μｍ；流动相采用二元梯度洗脱，Ａ相为００５ｍｏｌ／Ｌ醋酸钠缓冲液∶水∶四氢呋喃∶冰乙酸（２５０∶１００∶１５∶２２），Ｂ相为乙腈∶甲醇（４∶１）．系统研究了ｐＨ值、反应时间、离子强度及衍生化试剂用量对衍生化反应的影响，确定最佳反应条件和最佳色谱条件．方法的精密度为批内变异系数＜４６％，批间变异系数＜６１％；最低检出限（信噪比＝２）为３１ｎｍｏｌ／Ｌ；线性范围为５０～１０００ｎｍｏｌ／Ｌ，γ２＝０９９９２；平均回收率为９７１％．
- 沈佐君王治国李小鹏胡翠华杨树德
- 关键词：Γ-氨基丁酸反相高效液相色谱法
