白亦光 作品数:36 被引量:161 H指数:7 供职机构: 川北医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 四川省科技支撑计划 南充市应用技术研究与开发资金项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
Ⅱ型胶原-透明质酸构建组织工程软骨复合三维纳米支架的体外实验研究 被引量:9 2013年 目的探讨Ⅱ型胶原-透明质酸(hyaluronic acid,HA)构建软骨组织工程复合三维纳米支架的可行性。 方法将Ⅱ型胶原和HA以8∶1(W∶W)比例溶于三氟乙醇和水按1∶1(V∶V)比例混合的溶剂中制成溶液,通过静电纺丝技术制备三维多孔纳米支架材料,通过光镜和扫描电镜观察其表面形貌,测定其孔隙率、吸水率、表面接触角和降解率。取1周龄日本大耳兔肋软骨,采用酶消化法制备软骨细胞。取第2代软骨细胞种植于支架上,用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)评价其细胞黏附性及增殖情况;细胞-支架复合物体外连续培养2周后,行组织学和免疫组织化学染色观察其生物学形态及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)分泌情况。 结果以最佳电纺液浓度为10%、接收距离为10 cm、纺丝注射速度为5 mL/h电纺获得的支架材料,光镜及扫描电镜观察示其孔隙均匀,纳米纤维直径均匀(300~600 nm),孔隙率为89.5% ± 25.0%,表面接触角为(35.6 ± 3.4)°,24 h内支架吸水率可达1 120% ± 34%,48 d内支架降解率可达42.24% ± 1.51%。CCK-8检测结果显示,培养12 h细胞在支架上黏附率可达169.14% ± 11.26%,培养7 d时细胞存活率可达126.03% ± 4.54%。组织学和免疫组织化学染色示,细胞在支架上黏附增殖情况良好,可分泌ECM;细胞在支架上培养2周后,有类似于软骨陷窝的结构形成。 结论以Ⅱ型胶原-HA制备的复合三维纳米支架材料具有良好的物理性能、生物学性能和促进细胞黏附及增殖的能力,是一种良好的组织工程软骨支架材 料。 杨泽龙 陈竹 陈竹 白亦光 刘康 冯大雄 白亦光关键词:组织工程软骨 静电纺丝 透明质酸 表达PEDF的人胎盘间充质干细胞抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移 被引量:4 2017年 目的探讨携带色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)基因的腺病毒转染胎盘间充质干细胞(PMSCs)后对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的抑制作用。方法取足月产胎儿的胎盘组织,分离、培养PMSCs,用流式细胞术鉴定其表面标记。用携带PEDF基因的腺病毒(Ad-PEDF)转染PMSCs,并用Western blot和ELISA检测转染了Ad-PEDF的PMSCs细胞(PMSCs-PEDF)培养上清中PEDF的表达。MTT测定PMSCs-PEDF表达的PEDF对HUVECs增殖的影响。Transwell实验检测PMSCs-PEDF所表达的PEDF蛋白对HUVECs迁移的抑制作用。结果用流式细胞术对分离的PMSCs进行免疫表型分析,结果显示,CD44、CD73、CD90、CD105表达呈阳性,而CD34、CD45表达呈阴性。Western blot结果显示,重组腺病毒成功将PEDF基因传送至PMSCs细胞内并产生分泌性的PEDF蛋白。ELISA结果显示PMSCs-PEDF可并分泌高水平的PEDF至培养基中[(65.2±4.9)ng/ml]。MTT结果显示,PMSCs-PEDF培养基上清在稀释比例为1∶2时对HUVECs抑制率为56.3%±8.7%,随着稀释比例的增加抑制率逐渐降低。而PMSCs及PMSCs-null的培养基上清则对HUVECs抑制作用很弱。Transwell实验结果显示,与PMSCs组(208.8±14.7)及PMSCs-null组(199.0±20.7)相比,PMSCs-PEDF组(79.4±14.5)可显著抑制HUVECs迁移(均P<0.05)。结论 PMSCs-PEDF可在体外高效表达PEDF蛋白,并抑制HUVECs细胞的增殖和迁移。 陈巧玲 白亦光 肖东琴 刘康 冯刚关键词:色素上皮衍生因子 胎盘间充质干细胞 细胞增殖 骨髓间充质干细胞与脂肪干细胞对椎间盘退行性变修复作用的比较实验研究 目的:通过比较骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)和脂肪干细胞(Adipose Derived Stem Cells, ADSCs)体外增殖与分化能力及对兔... 白亦光关键词:髓核细胞 骨髓间充质干细胞 脂肪干细胞 椎间盘退行性变 细胞移植 文献传递 聚乳酸乙醇酸共聚物与纳米羟基磷灰石共混制备组织工程纤维环支架的实验研究 被引量:2 2013年 目的探讨以聚乳酸乙醇酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)与纳米羟基磷灰石(hydroxyapa-tite,HA)为原料,利用静电纺丝的技术制备出的三维多孔支架构建组织工程纤维环的可行性。方法将PLGA与HA溶解于丙酮中,配制20%(w/v)的溶液,磁力搅拌均匀后,进行静电纺丝,制备三维多孔支架。支架通过扫描电镜和磷酸盐缓冲液降解(phosphate buffered saline,PBS)的方式,观察支架的形貌和降解性能;利用CCK-8和伊红染色的方法观察支架的生物相容性。结果支架具有良好的纤维形貌,直径均匀,扫描电镜下可见HA结晶。支架在磷酸盐缓冲液中降解速度较快,8周时支架失重可达40%,表现出良好的降解性能。细胞毒性试验和伊红染色均表明细胞在支架上的生长情况较好,支架具有良好的生物相容性。结论 PLGA与HA共混制备的纳米纤维支架具有良好的空间结构和生物相容性,因此该支架是一种良好的组织工程纤维环支架材料。 陈竹 陈竹 冯刚 刘康 杨泽龙关键词:纳米羟基磷灰石 静电纺丝 靶向抑制Akt对成骨细胞分化PI3K/Akt信号通路调控的研究 被引量:7 2020年 目的:观察蛋白激酶B(Akt)特异性抑制剂MK2206对成骨细胞分化的影响,探讨PI3K/Akt信号通路影响成骨细胞分化的分子机制。方法:通过CCK-8检测MK2206对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖的最大安全浓度;将BMSC分为两组,其中对照组使用OBM诱导处理,干预组加入含有3μmol/L的MK2206的OBM进行诱导处理,检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性和矿化能力,实时荧光定量PCR(qPCR)检测相关基因的表达水平。将细胞分为3组,其中OBM组仅加入成骨细胞诱导培养基培养;OBM+MK2206组使用含有3μmol/L MK2206的OBM培养;MK2206组中使用含有3μmol/L MK2206的普通培养基处理,采用Western blotting检测相关蛋白的表达情况。结果:CCK-8结果提示,在3.2μmol/L及以下浓度MK2206对BMSC的增殖没有影响;随着浓度的升高,ALP阳性的细胞数量逐渐下降;干预组的ALP表达、细胞外基质矿化能力、ALP mRNA和骨钙素(OCN)mRNA表达较对照组均明显减少(均P<0.05);与OBM组比较,OBM+MK2206组和MK2206组细胞中RUNX2、Collagen I和p-Akt蛋白均出现明显的降低,且MK2206组下降更加明显(均P<0.05)。结论:靶向抑制Akt在体外细胞培养中可通过PI3K/Akt信号通路明显下调成骨细胞相关基因ALP和OCN的表达,并抑制成骨细胞的分化成熟。 陈巧玲 白亦光 别俊 杨蜜 张加勇 尚东琴关键词:蛋白激酶B 骨破坏 成骨细胞 信号通路 色素上皮衍生因子联合5-氟尿嘧啶抑制结肠癌细胞凋亡和血管生成的作用研究 被引量:2 2021年 目的:探讨色素上皮衍生因子(PEDF)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对结肠癌CT26细胞的抑制作用以及对荷瘤小鼠模型的治疗效果。方法:将体外培养的CT26细胞分为对照组、5-FU组和PEDF+5-FU组3组,分别加入PBS、5-FU和PEDF+5-FU处理CT26细胞。通过细胞划痕实验和Transwell小室检测CT26细胞迁移能力。建立CT26荷瘤小鼠模型,将24只荷瘤模型小鼠随机分为对照组、5-FU组和PEDF+5-FU组,每组8只。用相应药物给药干预,共给药3次,20 d后处死小鼠测量肿瘤体积。通过CD31免疫荧光染色检测肿瘤组织内的微血管密度,TUNEL染色观察肿瘤细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,5-FU组和PEDF+5-FU组CT26细胞迁移率显著下降,CD31表达明显下调,肿瘤细胞的凋亡率明显提高(均P<0.05);与5-FU组相比,PEDF+5-FU组CT26细胞迁移率显著下降,CD31表达明显下调,肿瘤细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。与对照组相比,5-FU组和PEDF+5-FU组肿瘤体积显著减小(均P<0.05),PEDF+5-FU组肿瘤体积小于5-FU组(P<0.05)。结论:PEDF和5-FU联合用药可以对CT26结肠癌细胞起到协同治疗的目的,且治疗效果优于5-FU单独治疗效果。 陈巧玲 白亦光关键词:结肠癌 PEDF 5-FU 生长分化因子5诱导骨髓间充质干细胞成软骨细胞的实验研究 被引量:9 2013年 目的研究生长分化因子5(Growth and differentiation[actor 5,GDF5)在诱导骨髓间充质干细胞(bonemarrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨分化中的作用。方法通过全骨髓贴壁分离法体外分离、扩增兔骨髓间充质干细胞,利用腺病毒载体将GDF5基因导入骨髓间充质干细胞,通过Safranin-O染色和甲苯胺蓝染色检测硫酸糖胺聚糖和蛋白聚糖、RT-PCR和免疫化学染色检测软骨细胞特异性CollagenⅡ和Aggrecan基因和蛋白的表达,探索GDF5腺病毒对BMSCs成软骨分化的诱导作用。结果 GDF5腺病毒感染的BMSCs细胞外基质糖胺聚糖和蛋白聚糖的含量显著增加,软骨细胞特异性CollagenⅡ和Aggrecan基因和蛋白表达升高。结论本研究结果表明,GDF5能够显著促进脂肪间充质干细胞的成软骨分化。 刘康 刘康 冯刚 白亦光 罗栩伟 冯刚 宋桂芹关键词:骨髓间充质干细胞 软骨分化 兔髓核细胞原代培养及其生物学特性的实验研究 被引量:6 2013年 目的建立兔髓核组织体外直接分离培养的方法及其相关生物学特性的测定。方法取2周龄健康日本大耳白兔,无菌条件下分离出椎间盘凝胶状髓核组织,直接加入含有20%FBS的DMEM培养液中培养,倒置显微镜下观察原代髓核细胞的形态;细胞爬片培养后进行甲苯胺蓝和番红O染色观察;通过RT-PCR法,免疫组化法检测Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达;MTT法绘制髓核细胞生长曲线。结果髓核细胞甲苯胺蓝和番红O染色显示阳性;Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和蛋白聚糖免疫组化荧光检测呈阳性;RT-PCR鉴定发现细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白聚糖mRNA表达阳性;MTT生长曲线与体外细胞培养时生长过程相符。结论成功建立了髓核组织直接分离培养方法,原代髓核细胞生长状态良好,为组织工程髓核的种子细胞研究提供了实验依据。 白亦光 白亦光 冯刚 刘康 杨泽龙 冯刚关键词:髓核细胞 生物学特性 条件性敲除骨髓间充质干细胞中3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1基因后的成骨细胞分化 2022年 背景:国内外对于3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1,PDK-1)的研究主要集中在内分泌和肿瘤学等学科领域,在骨科学中关于其对成骨分化的影响尚未有系统研究与报道。目的:通过使用稳定表达cre酶的腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)转染PDK-1^(flox/flox)小鼠骨髓间充质干细胞,观察PDK-1在成骨细胞分化中的作用。方法:体外培养获得来源于纯合子PDK-1^(flox/flox)小鼠的骨髓间充质干细胞,设立对照组、空载病毒组(pHBAd-EGFP)和pHBAd-cre-EGFP组,对照组仅用成骨细胞诱导培养基诱导培养骨髓间充质干细胞,空载病毒组使用pHBAd-EGFP转染骨髓间充质干细胞,pHBAd-cre-EGFP组使用含Cre重组酶的重组腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)干扰骨髓间充质干细胞中的PDK-1基因,然后进行成骨诱导,采用碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性、茜素红染色和qPCR检测成骨相关基因表达来评价各组成骨细胞的分化成熟情况。结果与结论:pHBAd-cre-EGFP组细胞的碱性磷酸酶分泌、碱性磷酸酶活性、矿化能力均明显低于其他2组(P<0.05,P<0.01),成骨细胞相关基因Runx2、骨钙素和Ⅰ型胶原的表达也明显低于其他2组(P<0.01)。结果表明,体外干扰PDK-1基因表达可显著抑制骨髓间充质干细胞成骨分化。 陈巧玲 白亦光 刘康 林涛 罗栩伟关键词:转移性骨肿瘤 骨破坏 成骨细胞 对于腰椎后路椎间融合术后伤口深部感染的护理分析 被引量:2 2014年 目的:探讨腰椎后路椎间融合术后伤口深部感染的护理措施。方法通过对我院骨科收治的7例腰椎后路椎间融合术后伤口深部感染患者,在彻底手术清创的基础上,通过正确指导功能锻炼等护理措施,深入讨论腰椎后路椎间融合术后伤口深部感染的护理措施。结果所有患者伤口感染获得控制,均二期愈合,随访1~2年未有复发感染者。结论我科室采用的护理干预,有效降低腰椎后路椎间融合术后伤口深部感染的复发率。 吴青霞 白亦光 侯晓倩 王孝玉关键词:腰椎 伤口感染 护理