邢芸
- 作品数：22 被引量：33H指数：3
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- 菊欧氏杆菌β-1,4-内切葡聚糖酶celY基因在大肠杆菌中的克隆、表达及活性分析被引量：2
- 2012年
- 以菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增了该菌的β-1,4-内切葡聚糖酶celY基因及其调控元件并克隆至pUC19载体。测序结果经分析,该基因编码的蛋白序列与菊欧氏杆菌Ech586的β-1,4-内切葡聚糖酶同源性达到98%。将celY的开放阅读框基因插入到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),采用LB-CMC平板刚果红染色筛选含celY基因的转化子。12%SDS-PAGE显示,重组菌经IPTG诱导后表达了目的蛋白,其相对分子质量与预期结果相符。CMCase活力测定显示重组pET-28a-celY阳性菌分泌到培养基中的CelY酶活力为84.4 U/L,周质中的酶活力为12.7 U/L。β-1,4-内切葡聚糖酶CelY工程菌的获得,为研究菊欧氏杆菌纤维素酶基因在菊欧氏杆菌同源转化中的表达及工程菌的酶学特性提供了重要的资料。
- 黄潇王泽宇邢芸侯景李泰明刘景晶
- 关键词：Β-1,4-内切葡聚糖酶
- 药物诱导的亚细胞结构疫苗及其制备方法
- 药物诱导的亚细胞结构疫苗及其制备方法，在肿瘤原代细胞分裂过程中以蛋白酶体抑制剂诱导，肿瘤细胞内部产生的一些易降解蛋白进入自噬途径，产生的自噬小体不被溶酶体降解，最终形成直径为200-900nm的亚细胞结构，即为小体疫苗。...
- 周镇先邢芸魏强曾勇苏舒方媛
- 一种亚细胞结构疫苗及其制备方法
- 本发明公开了一种亚细胞结构疫苗及其制备方法<b>，</b>本发明的亚细胞结构疫苗是基于以硼替佐米及氯化铵诱导肿瘤细胞内短寿蛋白和缺损的核糖体产物作为抗原蛋白，通过自噬途径进入双层膜结构的自噬小体中...
- 邢芸曹荣月胡红明周镇先
- 文献传递
- 抗βhCG蛋白疫苗的抗肿瘤作用被引量：4
- 2010年
- 以人绒毛膜促性腺激素β亚基（βhCG）的羧基端109~118的6段串联重复表位为靶点、热休克蛋白65（HSP65）为载体,设计一种新型的蛋白疫苗HSP65-X6-βhCGCTP37,探讨其能否抑制小鼠前列腺癌,并且对其抗肿瘤的作用机理进行部分探讨。以制备的HSP65-X6-βhCGCTP37免疫C57BL/6小鼠,分别检测体液免疫应答和细胞免疫应答。通过ELISA法,从血清中检测到高滴度的抗βhCGIgG类抗体。Western blot实验证明小鼠血清中的抗体能够特异性识别βhCG表位。淋巴细胞增殖实验的结果显示,HSP65-X6-βhCGCTP37的免疫能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖。预防性实验的结果显示,HSP65-X6-βhCGCTP37激发的免疫应答对于RM-1肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,平均肿瘤重显著降低（P〈0.05）。同时有效地减少了小鼠的肺转移（P〈0.01）;抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生（P〈0.01）。HSP65-X6-βhCGCTP37蛋白疫苗能有效地抑制小鼠前列腺癌的生长。
- 叶嘉燕胡向兵邢芸侯景李飞张帆金亮李泰明刘景晶曹荣月
- 关键词：蛋白疫苗前列腺癌
- 一种带有组氨酸标签的抗糖尿病疫苗的构建、表达、纯化及鉴定被引量：2
- 2013年
- 利用组氨酸标签系统提高抗糖尿病疫苗HSP65-6P277融合蛋白的产量,简化纯化工艺。通过PCR方法,在融合蛋白HSP65-6P277的N端添加6个组氨酸标签后,定向克隆到pET28a原核表达载体中成功构建了组氨酸标签融合表达载体pET28a-HIS-HSP65-6P277。通过乳糖诱导,融合蛋白HIS-HSP65-6P277在大肠杆菌BL21(DE3)宿主中以可溶形式表达,镍柱亲和层析纯化后,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明表达产物是约70 k具有6个组氨酸标签肽的融合蛋白;分离纯化融合蛋白的时间从原来的15～20 d缩短为2～3 d,产量提高到56 mg/L。组氨酸标签系统可以较好的简化抗糖尿病疫苗HSP65-6P277融合蛋白的纯化工艺,提高产量。
- 杨雪刘晓锐邢芸徐茂磊金亮刘景晶吴洁
- 关键词：疫苗组氨酸标签
- 人源血管内皮生长因子突变体Ⅱ的克隆表达、分离纯化及初步鉴定
- 2013年
- 构建人源血管内皮生长因子突变体hVEGF121Ⅱ的重组原核表达质粒,获得hVEGF121Ⅱ蛋白用于制备抗血管生成作用更强的抗肿瘤疫苗。利用PCR技术,在已构建的hVEGF121Ⅰ突变体的基因末端引入热休克蛋白mHSP70的407-426两段串联重复序列的编码基因,PCR产物经Hind III和Nco I双酶切后连接到经同样限制性内切酶切过的原核表达载体pET-28a(+)上,转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,乳糖诱导表达,超声破碎菌体,包涵体经洗涤、溶解、稀释复性、离子交换层析得到目的蛋白hVEGF121Ⅱ,Western-blot鉴定。结果成功构建了hVEGF121Ⅱ蛋白的表达质粒pET-28a(+)-hVEGF121Ⅱ,重组菌株经乳糖诱导后,目的蛋白表达量占全菌蛋白的62%,分离纯化后纯度达到95%,hVEGF121Ⅱ蛋白的单体和二聚体都可以和VEGF抗体结合。重组hVEGF121Ⅱ蛋白的表达成功为进一步对其进行免疫学研究奠定了基础。
- 曹荣月张鹏徐茂磊陈檬邢芸胡晓利黄巧玲
- 关键词：血管内皮细胞生长因子突变体抗血管新生包涵体
- 探索一种新型生物发酵途径生产乙醇
- 2012年
- 在质粒pUC19中插入菊欧氏杆菌pehX启动子,并与全合成的运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因(pdc),乙醇脱氢酶基因(adhB)串联,构建pUC19-pdc-adhB乙醇发酵重组克隆,转化大肠杆菌DH5α,经气相色谱检测,在大肠杆菌中乙醇的表达量达到0.85%。菊欧氏杆菌富含多种纤维素酶,与一些仅可利用基本糖类作为碳源的大肠杆菌等相比,其可以利用纤维素作为碳源。本实验设计将pUC19-pdc-adhB乙醇发酵重组克隆转化至菊欧氏杆菌,尝试用氯化钙、电击等转化方法,但均没有获得转化子。提示需要寻找新的转化方法或者将pdc和adhB基因整合到菊欧氏杆菌的基因组中以使其能产生乙醇。
- 黄立黄潇董元楷邢芸葛驰宇刘景晶曹荣月
- 关键词：气相色谱
- 肿瘤细胞裂解物抗小鼠B16F10黑色素瘤的作用研究被引量：3
- 2012年
- 反复冻融B16F10肿瘤细胞制备裂解物,以白喉毒素(Diphtheria toxin,DT)为载体,OK432和来源于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)热休克蛋白70(HSP70)第407-426(mHSP70407～426,M)的两段串联重复序列M2为佐剂,制备了肿瘤细胞疫苗B16F10-DT-M2-OK432(BDTMOK),探讨其能否抑制小鼠B16黑色素瘤,并且对其抗肿瘤的作用机理进行部分探讨。以制备的BDTMOK免疫C57BL/6小鼠,分别检测体液免疫应答和细胞免疫应答。通过ELISA法,从血清中检测到高滴度的抗B16肿瘤细胞裂解物(B16 tumor cell lysate,B16TCL)类抗体。淋巴细胞增殖实验的结果显示,BDTMOK的免疫能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖。预防结合治疗性实验的结果显示,BDTMOK激发的免疫应答对于B16肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,皮下注射BDTMOK可以延长皮下移植瘤发生的潜伏期(P<0.05),并且平均瘤重显著降低(P<0.05);抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01)。疫苗BDTMOK能有效的抑制小鼠B16黑色素瘤的生长。
- 路蕾陈科刘彬王泽宇葛驰宇侯景金亮邢芸曹荣月刘景晶
- 关键词：肿瘤细胞疫苗
- 激活沉默基因以产生新抗生素的研究进展被引量：4
- 2010年
- 基因工程技术的不断成熟使得人们寻找新抗生素和新生理活性物质的途径更加多样化,更具针对性。本文将具体介绍一种利用重金属选择压力激活金属耐受放线菌的沉默基因以获得新抗生素的方法,以及人们分析基因组测序发现很多隐藏的生物合成基因簇得到大量新的生物活性物质的方法,为今后科研工作做参考。
- 邢芸刘景晶顾觉奋
- 关键词：沉默基因抗生素重金属基因组
- 黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：2
- 2012年
- 目的构建糖类标记载体筛选克隆。方法以pPIC9K-βGl2为模板,通过PCR扩增得到全长的Bgl2基因片段,克隆至pET-28a载体,转化E.coli BL21(DE3),Cel-M9培养基筛选阳性克隆,经DNA测序分析,成功构建pET28a-Bgl2表达载体。SDS-PAGE显示,重组菌经IPTG诱导后表达了目的蛋白,其相对分子质量与预期结果相符。结果 PCR扩增得到Bgl2基因片段,SDS-PAGE显示蛋白以包涵体形式表达,克隆可用Cel-M9培养基筛选。结论用Cel-M9培养基筛选出阳性克隆为构建食品级载体奠定基础。
- 李泰明庄舰峰Jean Louis Didier MEKOO谷春娇邢芸刘景晶
- 关键词：黑曲霉Β-葡萄糖苷酶纤维二糖
