陈茹 作品数:74 被引量:257 H指数:9 供职机构: 广东出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 广东出入境检验检疫局科技计划项目 广东省农业攻关项目 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 自然科学总论 更多>>
牛传染性鼻气管炎病毒糖蛋白gC基因抗原活性区的克隆与表达 被引量:3 2008年 通过聚合酶链式反应从牛传染性鼻气管炎病毒Bartha Nu/67株中扩增得到病毒gC基因并克隆至T载体pMD20T,再以后者为模板扩增gC蛋白第15-177位氨基酸对应的抗原活性区片段gCd。将gCd插入原核表达载体pET32a构建重组表达质粒pET32a-bhv1gCd。限制性内切酶以及序列分析鉴定表明重组表达质粒克隆片段序列与阅读框正确。对重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)的培养物进行蛋白电泳,可检测到分子量约45ku的目的产物,IPTG诱导后5h表达量最高。免疫印迹试验结果证实,gCd重组蛋白与牛传染性鼻气管炎标准阳性血清发生特异性反应,表明gC抗原活性区片段在原核获得表达并具有良好的抗原性。该重组蛋白可用于建立ELISA等免疫诊断方法。 陈茹 曾彩云 罗琼 谢青梅 曹永长 毕英佐关键词:牛传染性鼻气管炎病毒 GC基因 从进口种用奶牛中分离出传染性牛鼻气管炎病毒 被引量:11 2005年 罗琼 李力施 陈茹 林志雄关键词:奶牛 传染性牛鼻气管炎病毒 临床症状 病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备 被引量:5 2018年 利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至约10~8 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异<5%;稳定性检验表明,室温(20~25℃)保存7 d、冷藏(2~8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算。核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×10~8 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品。 段燕喻 陈茹 吴晓薇 朱道中 林志雄 田纯见 刘志玲关键词:病毒性神经坏死病 实时定量RT-PCR 标准物质 检测及鉴别分枝杆菌的mPCR-DHPLC引物和方法 本发明提供了一组用于检测分枝杆菌及鉴别致病分枝杆菌的五重mPCR-DHPLC方法中使用的核酸,包括核苷酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQID No.2、SEQ ID No.4和SEQ ID No.5、SEQ ID... 陈茹 高小博 马旭 陆彩玲 刘志玲 马静云猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎弱毒二联疫苗研究 被引量:14 2000年 用猪流行性腹泻 (PED)弱毒疫苗株 PEDV- G1P83和猪传染性胃肠炎 (TGE)弱毒疫苗株 TGEV-AG1制成 PED和 TGE弱毒二联疫苗 ,并进行了保存期试验、安全效力、免疫期试验和区域试验。结果表明 ,试验疫苗在 - 2 0℃保存 4个月 ,经 4月保存的疫苗免疫效力未见下降。 4℃保存 4 8h对疫苗病毒的毒价没有明显影响。用该弱毒二联疫苗按程序免疫妊娠母猪 ,对妊娠母猪安全 ,其仔猪获得了良好的被动免疫。其对PEDV强毒、TGEV强毒和该二种强毒混合功击的免疫效力分别达 90 .4 8%、93.75%和 87.5%。用二联弱毒疫苗免疫 8~ 10日龄的哺乳仔猪证明安全 ,2 8日龄时 (2 5日龄断奶 )分别用 PEDV、TGEV和两种强毒混合攻毒免疫效力分别为 10 0 %、90 .9%和 10 0 %。 8~ 10日龄免疫仔猪生长到 4月龄时用 TGEV和 PEDV强毒攻击 ,免疫效力分别为 10 0 %和 73.3%。结果表明 ,该弱毒二联疫苗能够安全地对妊娠母猪和哺乳仔猪进行免疫 ,免疫后能有效地保护初生仔猪、断奶猪和肥育猪抵抗 TGEV和 PEDV强毒的攻击。该弱毒二联疫苗在区域试验中能显著降低猪病毒性腹泻的发病率和死亡率。 李树根 周仲芳 李力复 林志雄 童昆周 罗长保 颜思通 陈茹关键词:流行性腹泻 传染性胃肠炎 联合疫苗 保存期试验 免疫期试验 免疫保护力 荷斯坦奶牛瓜氨酸血症PCR-DHPLC诊断方法的建立及应用 被引量:1 2014年 为有效检测荷斯坦奶牛瓜氨酸血症,采用多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立方法。制备纯合突变、野生型的基因模板,优化PCR反应体系,制备异源双链体系,建立DHPLC检测方法,确定最佳的检测条件。对262个血液样本用建立的方法进行检测,发现4个杂合子个体,并通过了测序验证。结果显示,建立的PCR-DHPLC的方法与测序检测结果一致,表明所建立的PCR-DHPLC方法可以用于检测瓜氨酸血症。PCR-DHPLC是一种高通量、准确性高、特异性好的检测方法。 刘中勇 王振男 朱道中 马保华 吴晓薇 段艳喻 梁梓森 陈茹 刘志玲 林志雄关键词:荷斯坦奶牛 瓜氨酸血症 PCR 变性高效液相色谱 进口猪产品中莱克多巴胺残留的快速检测 被引量:3 2011年 应用经验证可靠的ELISA方法,对进口猪产品进行莱克多巴胺残留快速筛选检测,对ELISA检测阳性的样品采用色谱质谱联用分析方法进行确证检测。1 330份猪产品的检测结果显示,采用ELISA方法检出阳性率达11.4%(152/1 330);对ELISA阳性样品采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)或气相色谱-质谱方法(GC-MS)确证,阳性率达90.8%(138/152)。检测工作表明,综合运用快速筛选检验技术与确证检测技术可实现快速准确检测动物产品中莱克多巴胺残留,提高进出境检验工作效率。 陈茹 洪振涛 吴晓薇 王志元 曾碧健 刘志玲 林志雄关键词:莱克多巴胺 猪产品 ELISA 高效液相色谱-串联质谱 气相色谱-质谱 非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光LAMP检测方法的建立 被引量:14 2017年 为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)通用型高通量检测技术,利用高度保守的非结构DNA聚合酶G1211R基因,制备质粒标准品,建立实时荧光LAMP方法,出现典型的S形核酸扩增曲线,扩增产物具有特异的熔解曲线。G1211R基因质粒标准品在1.81×10~5拷贝数/μL^1.81×10~9拷贝数/μL对数值与Ct值之间的线性关系良好。以ASFV E70株病毒核酸为模板,LAMP检测灵敏度达到21pg,优于荧光定量PCR方法。重复性试验LAMP检测批内和批间变异系数均小于5%。LAMP方法检测ASFV特异性良好,与猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及昆虫核酸无交叉反应。以ASFV Arm 07株制备各种临床模拟样品,检出阳性率达到17.31%。检测方法的建立,可为非洲猪瘟防控提供新的技术手段,有利于不同基因型毒株检测和出入境快速筛查。 田纯见 杨舒展 段喻燕 刘志玲 林志雄 罗琼 陈茹关键词:非洲猪瘟病毒 DNA聚合酶 同步检测三种猪病毒的共有引物核酸扩增方法与试剂盒 本发明提供一种通过锁核酸(LNA)修饰碱基共有引物引导的同步快速检测猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒三种重要猪病原的新型核酸扩增检测方法及其检测试剂盒,设计筛选了一对含有LNA修饰碱基的共有引物和三对5'端带有... 陈茹 高小博 宋长绪 薛春宜 于晓璐 段燕喻 李艳 刘志玲 陈芳文献传递 广东省供港澳注册养殖猪场猪流感流行病学调查 2013年 为了解广东省辖区内84个活猪供港澳注册猪场中猪流感的感染情况,从2009年5月至2012年8月,收集各注册猪场的猪鼻拭子12 927份样品,采用荧光定量RT-PCR的方法进行A型流感病毒筛查,同时对A型流感样品采用H1和H3亚型流感病毒荧光定量RT-PCR的方法进行分型。结果 A型流感病毒核酸阳性样品396份,阳性率3.06%。其中H1亚型流感病毒核酸阳性样品142份,阳性率1.1%;H3亚型流感病毒核酸阳性样品12份,阳性率0.17%;H1N1亚型流感病毒核酸阳性样品有23份,阳性率0.32%。 吴晓薇 陈茹 刘志玲 朱道中 朱事康 段燕喻 林志雄关键词:猪流感 H3亚型