魏晓丽
- 作品数：39 被引量：253H指数：12
- 供职机构：新疆医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- HPV16E7蛋白编码基因原核表达与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16E7蛋白原核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16E7基因,经BamH和Hind双酶切后插入相同酶切pET32a(+)载体,转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选。经IPTG对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot检测目标蛋白表达情况。结果成功构建了原核表达质粒pET32/E7,HPV16E7-TRX融合蛋白在BL21(DE3)菌株中高效表达,在1mmol/LIPTG、30℃诱导条件下融合蛋白表达量占菌体总蛋白的30%左右。结论pET32/E7原核表达质粒的构建、HPV16E7融合蛋白的表达为进一步深入研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用机制奠定了基础。
- 施桥发王保宁李虹魏晓丽张卫东曹康蒋忠华李明远
- 关键词：HPV16免疫印迹
- 小鼠β-防御素-2对肿瘤细胞SiHa生长的抑制作用及其机制被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨小鼠β-防御素-2（beta defensin 2，BD2）对 SiHa 细胞生长的抑制作用及其机制。方法将pcDNA3．1（＋）/mBD 2、pcDNA3．1（＋）/rmBD 2质粒转染 SiHa 获得的稳定转染细胞 SiHa/M、SiHa/R 裂解，用细胞裂解上清进行 Western blot 检测 mBD2蛋白表达；同时采用细胞活力分析对转染细胞的细胞活力进行测定，采用 AnnexinⅤ、PI 流式细胞分析法和 TUNEL 法检测细胞凋亡情况，并计算细胞凋亡指数。结果 SiHa/M、SiHa/R 组在4～6 Ku 区域出现目标条带；SiHa/M、SiHa/R 组细胞在贴壁后2～3 d 细胞活性明显低于 SiHa 细胞（P ＝0．018），但随着时间推移，细胞活性开始下降，3组细胞的细胞活力差异无统计学意义（P ＝0．374）；SiHa/M、SiHa/R 及 SiHa 组 Annexin Ⅴ＋/PI＋双阳性细胞的百分率分别为2．4％、2．3％、2．3％；Annexin Ⅴ＋/PI-细胞分别为0．9％、1．2％、1．5％，3组差异无统计学意义（P ＝0．743）；SiHa/M、SiHa/R 组凋亡细胞发生率较高，分别达到40．7％、30．2％，而 SiHa 组细胞凋亡率只有7．3％，SiHa/M、SiHa/R 组细胞凋亡率明显高于 SiHa 组，差异有统计学意义（P ＝0．004）；SiHa/M 组凋亡发生率高于 SiHa/R 组，差异有统计学意义（P ＝0．003）。结论 mBD 2能够抑制 SiHa 细胞的生长和诱导细胞凋亡。
- 郭琼吴红红李明远魏晓丽
- 关键词：Β防御素细胞活力流式细胞术凋亡指数
- 鼠β-防御素2(mBD2)真核表达质粒的构建及稳定表达株的鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的:对小鼠β防御素-2(mBD2)基因进行克隆,构建其真核表达载体,筛选出稳定表达细胞株,并研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤机制。方法:通过向BALB/c小鼠腹腔注射内毒素(LPS),建立小鼠急性时相反应,取其肺组织提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增小鼠mBD2基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入相同酶切的pcDNA3.1(+)真核表达载体,对其进行酶切和测序鉴定。将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2转染SiHa细胞,采用G418进行稳定表达株的筛选,用免疫荧光染色和RT-PCR鉴定细胞内mBD2蛋白表达情况。结果:提取小鼠肺组织总RNA,采用RT-PCR方法扩增了250bp左右的产物,通过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2。SiHa被该质粒转染后,在100mg/LG418浓度下筛选20d,得到了稳定表达mBD2的细胞株,用免疫荧光染色显示mBD2蛋白在胞质中有大量表达,RT-PCR反应扩增到了mBD2的mRNA。结论:成功地构建了pcDNA3.1(+)/mBD2真核表达质粒,mBD2蛋白在SiHa细胞中能稳定表达,这些结果为进一步深入研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤的作用奠定了基础。
- 魏晓丽施桥发李虹李婉宜蒋忠华李明远
- 关键词：真核表达免疫荧光RT-PCR
- 小鼠beta防御素2原核表达与抗菌作用的初步研究
- 2012年
- 构建小鼠β-防御素-2(mouse beta defensins 2,mBD2)原核表达质粒pET32/mBD2,进行蛋白诱导表达及纯化,测定并纯化蛋白的抗菌活性。旨在为进一步研究其生物学特性奠定基础。通过腹腔注射脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立小鼠急性时相反应,采用RT-PCR方法扩增mBD2成熟肽,经KpnI和XhoI双酶切后插入相同酶切的pET-32a(+)载体,构建的重组质粒。将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达。通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白。将融合蛋白采用肠激酶酶切、洗脱并用滤纸片法测定目的蛋白的抗菌活性。成功构建了原核表达质粒pET32a(+)/mBD2,并转化工程菌BL21(DE3)。在0.25 mmol/L IPTG、30℃诱导4 h条件下获得的融合蛋白。采用抑菌试验证实蛋白具有一定的抑制革兰阳性菌及阴性菌生长的作用。本研究成功构建了pET32/mBD2原核表达质粒,得到了在大肠杆菌中稳定表达mBD2蛋白。
- 魏晓丽金一帮朱明李亮温浩
- 关键词：原核表达SDS-PAGE抑菌作用
- 小鼠beta-防御素2真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2011年
- 构建小鼠beta-防御素2(murie beta-defensin 2,mBD2)的真核表达载体pcDNA-mBD2,并观察其在真核细胞中的表达。从小鼠肝组织中提取mRNA通过逆转录聚合酶链反应扩增得到mBD2基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)获得pcDNA-mBD2;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染siha细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内mBD2的表达。结果显示,构建了小鼠mBD2的真核表达载体,转染siha细胞培养并采用G418稳定筛选后,获得稳定转染细胞,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染细胞内mBD2的表达。成功构建了真核表达载体pcDNA-mBD2,为研究mBD2在宫颈癌发生发展过程中的作用及作用机制奠定基础。
- 魏晓丽温浩金一帮蒋中华李明远
- 关键词：真核表达逆转录聚合酶链反应蛋白免疫印迹
- 医学免疫学课程群实验教学改革探析被引量：5
- 2012年
- 为了探讨医学免疫学课程群实验教学的整合与模式改革，本研究分析了传统的以单一课程为中心的实验教学模式的弊端，构建了以课程群为特点的免疫学教学团队和医学免疫学相关课程群“递进学习”实验教学模式。新的教学模式注重相关课程实验教学的系统关联与知识整合，重视前期课程知识技能贮备与后期课程综合应用实践之间的辩证关系，有利于培养学生科研能力与创新素质，有助于促进学生综合应用能力的提高。
- 丁剑冰王红英罗莉王松魏晓丽徐琦马秀敏
- 关键词：实验教学医学免疫学教学改革
- 细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及原核表达质粒的构建被引量：19
- 2002年
- 目的:克隆细粒棘球蚴 95 (Eg95 )抗原基因 ,构建携带目的基因的原核表达载体 ,为细粒棘球蚴抗原的免疫保护机制研究提供材料。 方法:应用 PCR方法从细粒棘球蚴 c DNA文库中克隆获得 Eg95抗原基因 ,将其克隆至 p U Cm- T载体 ,测序确定其正确性。利用定向克隆技术将 Eg95抗原基因片段克隆至原核表达质粒 p ET2 8上 ,根据选择标记的卡那霉素抗性基因筛选到阳性克隆 ,通过酶切分析和 PCR鉴定筛选出阳性克隆 ,测序确定序列。结果:测序表明所有 p ET2 8- Eg95阳性克隆均为正确连接 Eg95抗原基因的重组质粒。结论:p ET2 8-
- 丁剑冰林仁勇温浩许晏魏晓丽王国荃
- 关键词：细粒棘球蚴原核表达质粒基因克隆
- 全长细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及DNA疫苗的构建被引量：15
- 2002年
- 目的 :克隆分析新疆地区细粒棘球蚴 95 (Eg95 )抗原全长基因的结构特点 ,并构建 Eg95 DNA疫苗。方法 :根据细粒棘球蚴 95抗原基因序列设计 PCR引物 ,应用 PCR方法从新疆株细粒棘球蚴 c DNA文库中克隆获得Eg95全长抗原目的基因。利用定向克隆技术将全长 Eg95抗原基因片段克隆至真核表达质粒 pc DNA3上 ,构建DNA疫苗 pc DNA3 - Eg95 ,测序确定基因碱基序列。利用 DNAm an软件及 Gene Bank/ Blast功能 ,对其进行基因全序列分析及同源性比较。 结果 :从新疆株细粒棘球蚴 c DNA文库中克隆出全长 Eg95抗原基因。所克隆的全长Eg95抗原基因长度为 471bp,编码 15 6个氨基酸。pc DNA3 - Eg95阳性克隆均为正确连接全长 Eg95抗原基因的重组质粒 ,可作为 DNA疫苗作进一步的研究。新疆株全长 Eg95抗原基因与 Gene Bank中已登录的新西兰株 Eg95抗原基因序列一致。 结论:成功克隆并构建了新疆株全长细粒棘球蚴 95抗原基因
- 林仁勇丁剑冰温浩王笑峰魏晓丽
- 关键词：抗原基因DNA疫苗基因克隆
- 新疆医科大学第一附属医院不同科室病房空气中常见细菌分布的调查被引量：4
- 2009年
- 赵亚楠魏晓丽朱明龚燕刘慧刘梦巴音吉力.巴古
- 关键词：细菌分布病房空气医院感染住院患者肝胆外科
- 医学免疫学“探索式教学方法”的研究与实践被引量：5
- 2011年
- 文章主要介绍了探索式教学法的一般理论及在医学免疫学课程教学实践中的具体实施策略及目标要求,通过调动学生主观能动性及学习积极性,使学生主动地探索、掌握医学免疫学的基本理论,更好地培养学生的思考创新能力。
- 魏晓丽丁剑冰王松徐茜甫拉提.热西提
- 关键词：探索式教学医学免疫学
