黄加祥
- 作品数：29 被引量：52H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项广西科技计划项目广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 摩拉水牛二酰甘油酰基转移酶2基因的多态性检测被引量：4
- 2018年
- 本研究旨在检测水牛二酰甘油酰基转移酶2(diacylglycerolacylt-ransferase,DGAT2)基因的单核苷酸多态性(SNP),探究摩拉水牛多态性位点的群体遗传特征。以广西水牛研究所的57头摩拉水牛为材料,PCR扩增DGAT2基因的部分序列(外显子2及内含子2、3),通过常规测序法检测其SNP,并运用遗传多样性分析软件(POPGENE)和SPSS软件对群体的多态性位点进行基因频率、基因型频率、多态信息含量(PIC)、有效等位基因数(Ne)及遗传杂合度(He)的检测。结果表明,在摩拉水牛DGAT2基因外显子2和内含子2、3上共发现了9个SNPs位点(IVS2.54G>A、IVS2.158A>G、EVS2.191A>G、EVS2.228A>G、IVS3.311C>T、IVS3.444A>G、IVS3.451A>C、IVS3.466C>T、IVS3.521C>T),其中EVS2.191A>G位点的突变导致氨基酸由异亮氨酸突变为缬氨酸,突变位点间存在一定程度的连锁遗传但接近连锁平衡状态。从基因频率上看,IVS2.158A>G、EVS2.191A>G、IVS3.311C>T、IVS3.451A>C、IVS3.466C>T和IVS3.521C>T 6个SNPs位点的两个等位基因频率有较大差异,提示等位基因频率较大的基因个体可能更适合生存。9个SNPs位点在摩拉水牛品种上多处于高度多态,杂合度在0.1744~0.4975之间,说明摩拉水牛群体中DGAT2基因遗传多态性丰富,具有较大的育种价值和性状改良潜力。
- 鄢胜飞尚江华黄丽华杨春艳郑海英李孟琪于农淇Mahmoud Moussa覃广胜黄加祥张秀芳
- 关键词：摩拉水牛DGAT多态性
- 水牛活体采卵和无透明带胚胎培养体系的优化
- 2020年
- 本研究旨在探索哺乳动物体外受精(IVF)胚胎单独或少量培养时发育效率低、无透明带胚胎的体外发育潜能受阻的问题,以期建立提高水牛活体采卵(ovum-pick-up,OPU)和徒手克隆(handmade clone,HMC)胚胎发育潜能高效稳定的体外生产体系。研究首先比较了单个微滴内共培养的胚胎数量(1、3、5、10和20枚)对胚胎发育效果的影响;而后采用微穴体系(well-of-the-well,WOW)和辅助共培养体系(培养微滴中添加包埋IVF胚胎的琼脂糖小块)培养OPU-IVF胚胎,并用WOW体系培养无透明带的徒手克隆重构胚,与传统的微滴培养体系比较其体外发育效果。结果表明:单个微滴内培养的胚胎数量为1、3和5枚时,囊胚发育率极显著低于10枚和20枚组(P<0.01);与微滴培养体系相比,辅助共培养和WOW体系均极显著提高OPU-IVF胚胎的囊胚率(P<0.01),且WOW培养体系极显著促进HMC重构胚的卵裂率和囊胚率(P<0.01)。综上所述,胚胎群体培养有助于胚胎发育,在保证系谱明确的前提下琼脂糖包埋辅助胚胎共培养体系和WOW体系提高了OPU-IVF体外胚胎发育效率,且WOW体系还可用于无透明带胚胎的高效培养。
- 杨春艳郑海英李玲玉黄加祥黄春丽尚江华
- 关键词：水牛
- CART对FSH诱导下水牛颗粒细胞雌二醇分泌及相关基因表达的影响被引量：3
- 2020年
- 本试验采用无血清培养体系培养原代水牛卵巢颗粒细胞,研究了外源可卡因-苯丙胺调控转录肽(exogenous cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡激素(FSH)诱导下颗粒细胞产生雌二醇(E2)的影响及其相关基因的表达情况。采用Long-term培养方法在无血清培养液中分别添加不同浓度的FSH(0、0.25、0.5、1、2、4 ng/mL)培养7 d,利用双抗体夹心法检测各孔的E2浓度,筛选出最佳添加浓度;将原代颗粒细胞随机分成4组(2组对照组(无FSH)和2组最佳FSH添加组)培养6 d后,其中一组对照组和FSH添加组分别与25μg/mL CART共作用24 h,检测E2浓度的变化并对颗粒细胞中CART受体(CARTPT)和芳香化酶基因(CYP19A1)进行定量检测。结果发现:①在培养液中不添加CART时,颗粒细胞中E2浓度随着FSH添加浓度的升高呈先升高后降低的趋势,当FSH添加浓度为1 ng/mL时,E2浓度达到最高值116.16 pmol/mL,显著高于对照组和其他浓度组(P<0.05);②添加外源CART显著降低了FSH作用下颗粒细胞培养液中E2的浓度(P<0.05),两对照组(0 FSH和0 FSH+CART)差异不显著(P>0.05);③在添加1 ng/mL FSH时,CART作用24 h后显著降低了FSH诱导下颗粒细胞中CYP19A1 mRNA的表达(P<0.05),而细胞中CARTPT mRNA的相对表达量显著升高(P<0.05)。在0 ng/mL FSH下,添加25μg/mL CART作用24 h,颗粒细胞中CYP19A1和CARTPT mRNA的表达与不添加CART组相比差异不显著(P>0.05)。由此推测CART在水牛卵巢发育中是一种负向调控信号,抑制卵泡的健康发育,且需一定量的FSH诱导CART对颗粒细胞增殖分化的负向压力。
- 李玲玉郑海英于农淇尚江华黄加祥杨春艳
- 关键词：CARTFSHE2水牛颗粒细胞
- RAPD标记鉴别四个水牛品种的初步研究
- 2020年
- 为进一步保护和开发中国本地水牛和国外引进水牛的遗传资源,建立快速区分鉴别本地和引进水牛品种的方法。设计57条随机扩增多态性(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)引物,对本地沼泽型水牛和国外引进的河流型(摩拉,尼里拉菲和地中海)水牛之间的遗传差异进行了调查。以128头水牛DNA样本为模板,通过PCR扩增从57条RAPD引物中筛选并优化反应条件。实验结果显示,筛选得到了5条可用于区分本地沼泽型水牛与引进河流型水牛的引物(OPG6,OPG7,S11,S40和S1013),建立了RAPD鉴别区分沼泽与河流水牛的方法。本实验的结果为中国水牛的杂交改良、良种培育和本地水牛种质资源的保护等工作提供了理论和实验依据。
- 于农淇郑海英杨春艳鄢胜飞李孟琪黄加祥尚江华
- 关键词：水牛RAPD
- 不同品种河流型水牛乳成分分析及季节对乳成分的影响被引量：4
- 2021年
- 为了解河流型水牛不同品种乳成分的差异、乳成分之间的相关性以及季节对乳成分的影响,试验不同季节采集来自中国农业科学院广西水牛研究所种畜场的尼里-拉菲水牛、摩拉水牛和地中海水牛的生鲜乳691份,用FOSS多功能乳成分分析仪对乳蛋白、乳脂肪、乳糖及非脂乳固体含量进行测定,计算乳蛋白率、乳脂率、乳糖率及非脂乳固体率,利用SPSS 19.0软件单因素方差分析中的同质性检验对河流型水牛不同品种和不同季节的乳成分进行分析,运用双变量相关中的Pearson相关分析(双侧)对各乳成分进行相关性分析。结果表明:摩拉水牛的乳蛋白率、乳脂率和非脂乳固体率最高,显著高于其他两个品种(P<0.05);地中海水牛次之,其乳蛋白率显著高于尼里-拉菲水牛(P<0.05),乳脂率和非脂乳固体率与尼里-拉菲水牛差异不显著(P>0.05);乳糖率最高的是尼里-拉菲水牛,摩拉次之,最低为地中海水牛,三者之间差异显著(P<0.05)。季节对各乳成分均有不同程度的影响,春季乳蛋白率显著低于夏季和冬季(P<0.05),乳脂率显著高于秋季和冬季(P<0.05),秋季乳脂率最低;夏季乳糖率显著高于春季(P<0.05);冬季非脂乳固体率显著高于夏季(P<0.05)。乳蛋白率、乳脂率、乳糖率三者之间呈极显著正相关(P<0.01);非脂乳固体率与乳蛋白率呈极显著正相关(P<0.01),相关系数为0.59。说明应根据季节性变化并结合自身营养需求且在把控其他影响乳成分因素的同时,及时调整饮水及精粗料的搭配,从而保证牛乳的质量。
- 曾令湖莫乃国李辉黄健谭正准于农淇程隽如卢瑛黄加祥李舒露覃广胜
- 关键词：河流型水牛乳成分
- 水牛Smad4基因的克隆及其真核表达载体的构建被引量：3
- 2017年
- 为了阐明Smad4基因在水牛卵巢颗粒细胞增殖及胚胎发育中的分子机制,试验采用RT-PCR扩增并克隆水牛Smad4基因,对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,构建Smad4基因的真核表达载体,通过脂质体转染法转染体外培养的牛卵巢颗粒细胞。结果表明,试验克隆得到水牛Smad4基因编码序列,编码区全长为1 662bp,编码553个氨基酸。通过BLAST对水牛Smad4基因的核苷酸序列进行同源性比对,结果显示,水牛Smad4基因与牛的同源性为99%,与绵羊、猪、马、人的同源性分别为98%、96%、96%和95%。系统进化树分析表明,Smad4基因在不同物种的进化过程中具有高度的保守性。试验成功构建了水牛Smad4基因的真核表达载体pEGFP-N1-Smad4,并在水牛卵巢颗粒细胞中表达出较强的绿色荧光蛋白Smad4-EGFP融合蛋白。本研究成功克隆了水牛Smad4基因,并成功构建了Smad4基因的真核表达载体,为进一步研究Smad4基因在水牛胚胎发育过程中的分子机制奠定基础。
- 鄢胜飞张秀芳黄玥萌郑海英杨春艳覃广胜黄加祥尚江华
- 关键词：水牛SMAD4基因克隆真核表达载体
- 水牛冷冻胚胎分割效果的初步研究被引量：1
- 2012年
- 探讨了胚胎分割前后冷冻和不同时期的冷冻胚胎对水牛胚胎分割效果的影响。结果:冷冻后分割组的分割成功率与分割后冷冻组差异不显著(71.39%vs 71.43%,P>0.05),但囊胚冷冻后分割组的半胚发育率显著高于分割后冷冻组(58.33%vs 47.14%,P<0.05);扩张囊胚的冷冻存活率显著高于孵化囊胚(94.84%vs 79.01,P<0.05),但囊胚与孵化囊胚差异不显著(92.67%vs 79.01%,P>0.05),囊胚、扩张囊胚和孵化囊胚冷冻胚胎的分割成功率(70.76%,73.22%,70.92%)及半胚发育率差异均不显著(53.07%,51.49%,57.99%)(P>0.05)。上述结果说明,水牛囊胚冷冻后分割比分割后冷冻能获得更高的半胚发育率;水牛未扩张囊胚和扩张囊胚的冷冻存活率比孵化囊胚高,且这3个时期的冷冻胚胎均适合分割。
- 陈焕华杨丽张明郑海英梁贤威黄加祥卢克焕
- 关键词：水牛玻璃化冷冻胚胎分割
- 摩拉水牛PRKAA2基因多态性与生长性状的关联分析被引量：2
- 2020年
- 试验旨在探讨PRKAA 2基因在摩拉水牛群体中的遗传多态性及其与生长性状的关联性,进而得到显著相关的遗传标记,为摩拉水牛的分子标记辅助选择提供理论依据。利用DNA测序法等技术进行候选基因PRKAA 2外显子4及部分内含子3单核苷酸多态性(SNPs)检测,并采用生物信息学方法结合统计软件分析PRKAA 2基因与摩拉水牛生长性状的关联性。结果显示,摩拉水牛PRKAA 2基因中共检测到4个SNPs位点:c.462 G>A、IVS3.557 T>C、IVS3.560 C>T和IVS3.565 G>A,均包含3种基因型,且符合Hardy-Weinberg平衡。4个SNPs位点在水牛群体中均为中度多态,可以构建3种单倍型,T-C-G-G为优势单倍型,其中IVS3.560 C>T与c.462 G>A位点之间存在完全连锁不平衡,关联分析结果显示,单倍型H2与摩拉水牛体斜长和腰角宽呈显著相关(P<0.05)。c.462 G>A位点与摩拉水牛体高、十字部高、尻长、坐骨端宽和腰角宽呈显著相关,其中GG和AA基因型个体的体高和十字部高均显著高于GA基因型个体,GG基因型个体的尻长显著高于GA和AA基因型个体,AA基因型个体的坐骨端宽和腰角宽显著高于GA基因型个体(P<0.05);IVS3.557 T>C位点与摩拉水牛的生长性状指标未达到显著相关(P>0.05);IVS3.560 C>T位点与摩拉水牛体高、十字部高和尻长呈显著相关,其中CC和TT基因型个体的体高和十字部高均显著高于CT基因型个体,CC基因型个体的尻长显著高于CT基因型个体(P<0.05);IVS3.565 G>A位点与体斜长呈显著相关,其中GG和GA基因型个体的体斜长显著高于AA基因型个体(P<0.05)。综上,PRKAA 2基因的c.462 G>A、IVS3.560 C>T和IVS3.565 G>A位点对摩拉水牛部分生长性状均有显著影响,可作为摩拉水牛品种早期选育的候选基因和分子辅助标记。
- 郑海英杨春艳郑威于农淇文崇利韦科龙李玲玉黄春丽黄加祥尚江华
- 关键词：摩拉水牛SNPS生长性状
- 水牛p21基因在卵母细胞体外成熟过程中的表达及其真核表达载体构建被引量：1
- 2018年
- 旨在检测p21基因在水牛卵母细胞体外成熟过程中的表达变化,并克隆摩拉水牛p21基因CDs序列,构建真核表达载体。收集体外成熟培养不同时期(0、6、12、24h)和不同形态[有第1极体(first polar body,PB1)PB1和无PB1]的水牛卵母细胞,通过RT-qPCR检测其p21mRNA相对表达量。同时利用RTPCR技术从摩拉水牛卵巢颗粒细胞中扩增出p21基因编码序列,插入pEGFP-N1真核表达载体中,构建出重组质粒。将重组质粒pEGFP-N1-p21转染水牛颗粒细胞,并于培养24h和48h后观察转染细胞的荧光表达情况。收集转染48h后的颗粒细胞,通过RT-qPCR检测p21mRNA相对表达量。结果显示,成熟培养6h的卵母细胞p21mRNA表达量显著高于成熟培养0、12、24h的表达量(P<0.05),有PB1的卵母细胞中p21mRNA的表达量显著高于无PB1的卵母细胞(P<0.05);重组质粒pEGFP-N1-p21转染颗粒细胞后,有绿色荧光蛋白表达,且与转染pEGFP-N1和空白组相比,pEGFP-N1-p21转染组的p21mRNA表达量显著升高。结果表明,在体外成熟培养过程中均能检测到水牛卵母细胞p21mRNA表达量,成功构建了摩拉水牛p21基因真核表达载体,为下一步研究p21基因在水牛卵母细胞成熟和胚胎发育过程中的功能和调控奠定了基础。
- 郑海英黄玥萌杨春艳鄢胜飞李孟琪于农淇郑威黄加祥尚江华
- 关键词：摩拉水牛P21基因表达颗粒细胞
- 奶水牛外阴唇部生蛆的治疗和预防措施
- 2018年
- 笔者在生产中多次遇到奶水牛阴唇部生蛆的情况,经过对症治疗及护理,愈后良好,病牛全部恢复健康状态。将引起奶水牛外阴唇部生蛆的原因、治疗过程及预防措施进行总结,目的是减少由于该病给奶牛场造成的经济损失。
- 卢瑛潘玉红文崇利赵朝步钟华配黄加祥郑威覃广胜
- 关键词：奶水牛子宫脱预防措施
